随机扩增多态性DNA技术在沙门氏菌同源性分析中的应用

目的:利用随机扩增多态性DNA技术(random amplified polymorphic DNA,RAPD)对从食品、蛋品样本或从业人员中收集到的67个地方菌株、4个模式菌株,涉及29种血清型的沙门氏菌进行同源性分析,为沙门氏菌食源性疾病的流行病学溯源和疫情控制提供理论依据.方法:选用筛选得到的10个碱基引物(CCGAAGCTGC)运用RAPD技术对不同来源的71株沙门氏菌进行随即引物扩增,得到的RAPD图谱使用NTSYS-pc2.10e软件进行聚类分析.结果:相似性系数在0.70时,71株沙门氏菌可以分为七大类群,其中最多的一群内聚集的菌株达54株,相似性系数在0.90时,可以分为26个群,最多的一群内聚集的菌株达18株,相似性系数为1.00时,有9个组群,最多的一组群内聚集的菌株达11.同源性结果和血清学鉴定的结果有90%的吻合率.结论:RAPD检测技术可以用于沙门氏菌食源性疾病的流行病学调查和溯源.     

克罗诺杆菌的随机多态性扩增DNA(RAPD)基因分型研究

研究了克罗诺杆菌标准菌株和样品中分离菌株的分子特征,为克罗诺杆菌的种间鉴别和分子溯源提供一种有效手段。采用随机引物扩增多态性DNA分析对38株菌株进行基因分型。筛选出1条随机引物,每一菌株可扩增出1～7条DNA片段,片段在400-3500bp,可将8株标准菌株的种间区分开来。以相似性50%为标准,38株克罗诺杆菌按照其遗传差异可以分为8个基因型类群。所建立的RAPD技术可用于克罗诺杆菌的种间鉴别和分子溯源研究。     

酿酒酵母工业菌株胁迫条件耐受性分析

对酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）工业菌株胁迫条件，包括高浓度酒精、高渗透压、高温、营养饥饿、氧化胁迫、糠醛毒性的耐受性进行了分析，同时测定了抗生素G418对这些菌株的最低抑菌浓度。结果表明，所测定的酵母菌株对这些逆境条件的耐受性有明显差别，表现出良好耐受性的是6508和安琪酵母菌株，同时多倍性的酿酒酵母工业菌株的耐受性均比单倍性实验室菌株高。     

一株酿酒酵母的特征区域序列扩增标记

以23株不同来源的酿酒酵母为研究对象,分别提取基因组DNA,试用50条随机引物对其进行随机扩增多态性DNA分析,筛选到两条具有菌株鉴别能力的随机引物。P09可以从2.412,ST—01,SK—26,ZD—01四株酿酒酵母基因组DNA中扩增出长度为433bp的Sc—433片断Sc—433;P46可以从2.1882,ST—01,NJ—02三株酿酒酵母基因组DNA中扩增出长度为665bp的Sc—665片断,其中仅有目的菌株ST—01能稳定的扩增出这2个标记。把这2个片断分别克隆到pUCmT质粒载体中,经过酶切鉴定后测序,根据序列设计特异性引物,把RAPD标记转化为特征区域序列扩增标记,为酿酒酵母菌株的分子鉴别提供了新的借鉴。     

优选酿酒酵母菌株发酵性能研究

对从新疆楼兰酒厂筛选出的3株优良酿酒酵母菌株进行发酵性能研究,通过对菌株的酒精耐受性、二氧化硫耐受性、絮凝性、发泡性、自溶性和酿酒特性的综合比较,结果显示,菌株CEC524的综合性能最佳,具有应用于我国地区特色葡萄酒生产的潜能。     

银耳干品的DNA提取及随机扩增多态性分析

银耳子实体中因含有大量的多糖和蛋白质,严重干扰其基因组DNA的提取。本实验建立一种银耳干品（子实体）中DNA的提取方法,利用此法可直接以银耳干品为材料提取DNA,不需芽孢分离和菌丝培养步骤,而且DNA产量高、质量好,可用于随机扩增多态性（random amplified polymorphic,RAPD）DNA分析。RAPD分析的结果显示,本实验所选取的银耳样品间存在DNA多态性。研究结果将有助于当前食品分析检测中直接以银耳干品为材料进行DNA提取及品种鉴别等分析工作。     

低双乙酰酿酒酵母的DNA标记研究

对15株酿酒酵母菌株的外观发酵度、双乙酰生成和还原能力进行了比较,通过随机扩增多态性DNA(RAPD)和HSP150编码基因的长度多态性对不同酿酒酵母菌株的基因组DNA分子差异进行了分析。结果显示,菌株YZU-APK和SS-05的外观发酵度分别为77.2%和76.8%,双乙酰峰值分别为0.26mg/L和0.25mg/L,并在发酵第8d均降至0.09 mg/L。在46条随机引物中筛选出的2条引物P07和P42能够扩增出具有较好多态性的RAPD指纹图谱,可以将15个酵母菌株分成9个遗传型;对细胞壁热休克蛋白HSP150编码基因的PCR扩增,并根据扩增条带长度的不同可以将15株酵母分成6个遗传型。综合2种分析结果,并对低双乙酰酿酒酵母菌株YZU-APK和SS-05进行DNA分子标记,确定了其基因型分别是(P07:1,P42:1,hsp150:1)和(P07:1,P42:5,hsp150:2)。     

高乙醇转化率酿酒酵母工程菌株构建研究进展

酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)发酵产生乙醇的过程中,甘油的生成所消耗的碳源约占总碳源的4%~10%。减少甘油合成量可提高乙醇产率与碳源利用率。其主要策略是修饰或切除一步或多步代谢反应,或引入外源相关基因以改变碳流方向与碳流量,从而使反应向有利于生成更多乙醇而少生成甘油的方向进行。文中主要综述了近年来通过代谢工程手段阻断酿酒酵母甘油的合成或降低甘油的合成量,以提高乙醇发酵糖醇转化率的研究进展。     

啤酒酵母突变株发酵性能比较及随机扩增多态DNA分析

对9株啤酒酵母菌种及经过诱变获得的突变株进行了发酵试验，比较了不同菌株的发酵能力、产高级醇能力、双乙酰还原能力以及菌株稳定性。同时利用随机引物对不同啤酒酵母株的基因组DNA进行了随机扩增多态DNA（RAPD）分析，比较不同突变株之间基因组的分子差异。结果表明：不同酵母发酵14d后外观发酵度在72．3％-76．8％，其中酵母YZB具有较高的发酵能力，最终发酵产物的高级醇含量最低，双乙酰峰值最低为0．36mg／L，而酵母Y1110最终发酵产物的高级醇含量最低为67．4mg／L，但双乙酰峰值达0．41mg／L，后酵结束后这2株酵母的双乙酰均可降至0．1mg／L以下。菌株稳定性实验结果表明，在传代7次以后和第1代的主要性能没有明显变化。利用随机引物OPG-5对不同酵母的基因组进行RAPD分析，酵母Y1110、YZB和YZD可以通过特异的扩增谱带区别于其它菌株，该结果为啤酒酵母特异的分子标记奠定了基础。     

RAPD技术在酿酒酵母分类鉴定与遗传育种中的应用

随机扩增多态性DNA(RAPD)具有快速、简便和灵敏等优点,在酿酒酵母的分子鉴定和分类、菌种分离纯化和污染检验、探索种属间亲缘关系和进化过程以及基因定位和辅助育种等研究中具有广阔的应用前景。本文对RAPD在酿酒酵母研究中的应用进行了综述,并且着重探讨了在上述研究应用中的缺点及改进方法。     

不同酿酒酵母发酵对红葡萄酒中花色苷组成的影响

比较了不同酿酒酵母菌株发酵对红葡萄酒中花色苷组分的影响,为本土酵母的开发应用提供依据。采用本土自筛酿酒酵母菌株Y17和进口商业酵母菌株F15分别酿造干红葡萄酒,并利用高效液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)对葡萄酒中的花色苷成分进行检测。结果表明,不同酵母发酵葡萄酒中的花色苷成分种类大体相同,但各种花色苷的含量具有较大差别,本土酵母菌株Y17在发酵生产高花色苷含量葡萄酒方面具有优势。     

随机扩增多态性法分析西藏牦牛奶酪中乳酸菌的遗传多样性

目的：利用随机扩增多态性（randomly amplified polymorphic DNA,RAPD）法对西藏地区牦牛奶酪中27 株乳酸菌基因型进行同源性分析。方法：利用5 个随机引物对Mg2+浓度、dNTP用量、退火温度、模版用量/引物用量（ng/pmol）4 个条件做单因素梯度试验,建立最佳反应条件,筛选最佳引物,然后对27 株乳酸菌和4 株乳酸菌标准菌株进行随机扩增,用NTsys 2.10e软件对扩增条带进行聚类和遗传相似性系数分析,分析结果与16S rRNA测序得到的菌种鉴定结果进行对比。结果：31 株菌遗传相似系数在0.72～1.00之间,当相似性系数在0.82时,菌株被分成了8 组,菌株按照不同种属聚类,聚类结果同16S rRNA测序结果基本一致,同时成功将Lactobacillus casei和Lactobacillus paracasei两个亚种区分开。结论：RAPD技术可以较好地应用于西藏地区牦牛奶酪中乳酸菌亲缘性关系分析。     

两株不同体积酵母酿酒过程中的代谢网络分析

构建了啤酒酵母的代谢网络,通过代谢通量分析的方法,对两株不同体积的酵母进行啤酒发酵过程的代谢网络分析。结果显示体积较小的酵母BB细胞合成能力较强,酿造乙醇的速率较快,并且双乙酰合成较少。     

牦牛奶酪中乳酸菌的随机扩增多态性研究

目的：探讨随机扩增多态性(RAPD)技术在牦牛奶酪中乳酸菌基因型研究方面的应用价值。方法：采用M13引物,对退火温度、Mg2+浓度、引物用量、Taq酶用量、模板量进行单因素梯度试验,建立最佳反应条件,然后对分离自牦牛奶酪的39株乳酸菌进行扩增,用NTsys 2.10e软件分析扩增图谱,计算遗传相似系数,进行聚类分析,并与16S rRNA测序得到的菌种鉴定结果进行对比。结果：39株乳酸菌相互间的遗传相似系数在0.47～0.98之间,当相似系数为0.78时,菌株被分成10个组,除X23、Y36和Y37之外,其余菌株均按照不同的菌种聚类,与16S rRNA测序结果基本一致,聚类有较强的地域相关性。结论：RAPD技术可用于牦牛奶酪中乳酸菌的基因型研究,可用于菌种鉴定和遗传亲缘关系分析。     

高产谷胱甘肽酵母菌株的选育

以BY-14面包酵母（Saccharomyces cerevisiae）为出发菌株,通过紫外线和氮离子注入复合诱变,氯化锌、乙硫氨酸耐性平板筛选,获得一株高产谷胱甘肽的面包酵母优良菌株（S．cerevisiae）BL-23。该菌株经摇瓶发酵谷胱甘肽产量为113．46mg／L,较出发菌株提高62％,每1g干细胞含谷胱甘肽20．86mg,较出发菌株提高56％。传代培养结果表明,该菌株具有稳定的遗传性能。     

传统诱变与基因组重排技术相结合选育耐高温酿酒酵母菌株

以酿酒酵母AY12为出发菌株,采用传统人工诱变育种与基因组重排技术相结合的方法选育出耐高温且高产乙醇的酿酒酵母菌株.通过将出发菌株进行紫外诱变,获得酿酒酵母突变群体,并从中筛选出耐高温且高产乙醇的23株突变株作为正向突变文库;将该文库通过酵母高效产孢与杂交反应实现突变文库的全基因组重排,筛选得到的基因组重排最优菌LYQ-F1的高温耐受性较出发菌株AY12明显提高,且在高温模拟发酵工艺中其乙醇产量较出发菌株提高了22.1％.     

不同菌龄酿酒酵母细胞壁蛋白差异性分析

以酿酒酵母为研究对象,比较了完整细胞提取法、稀碱缓冲液提取法及溶菌酶和β-葡聚糖酶复合酶法等三种酵母菌细胞壁蛋白提取方法,分析了不同菌龄酵母细胞壁差异性蛋白。结果表明:溶菌酶和β-葡聚糖酶复合酶液水解纯化好细胞壁提取蛋白的方法具有所得胞壁蛋白条带较多,且纯度较高的优点,确定了此方法为提取酵母细胞壁蛋白的最佳提取方法。同时,通过SDS-PAGE电泳分析发现,不同菌龄酵母细胞壁蛋白存在着较大的差异性,并确定了分子质量在36 ku、17 ku和12 ku为不同酵母代数细胞壁的3个主要差异性蛋白,其中36 ku、17 ku处条带蛋白随着菌龄的增加酵母细胞壁蛋白表达量逐渐减少,而12 ku处条带蛋白随着菌龄的增加酵母细胞壁蛋白表达量逐渐增加。