L-天门冬氨酸-β-苄酯的制备研究

以L-天门冬氨酸和苯甲醇为原料,对L-天门冬氨酸-β-苄酯的合成进行了研究。结果表明,较佳实验条件是:以浓硫酸为催化剂,n(L-天门冬氨酸)∶n(苯甲醇)=1∶10,100℃回流反应3 h,室温放置24 h,在该条件下,产率约60%。     

利用DNA免疫技术制备麻疹病毒抗血清

目的利用DNA免疫技术制备特异性麻疹病毒抗血清,用于麻疹减毒活疫苗毒种以及含麻疹病毒疫苗的检定。方法以含麻疹病毒沪-191融合蛋白F和血凝素H基因的重组真核表达载体pGI-F和pGI-H作为免疫原,免疫家兔,制备麻疹病毒抗血清。采用细胞培养法检测抗血清细胞毒性,ELISA法检测抗体滴度,微量细胞病变法检测抗血清的特异性和中和效价。结果麻疹病毒抗血清细胞毒性小,与风疹病毒、腮腺炎病毒、水痘病毒均无交叉反应。抗血清的ELISA效价大于256 000,中和效价为1∶1 024,4倍稀释后仍能完全中和1×10~5 CCID_(50)/ml麻疹病毒。结论 DNA免疫方法可制备高效价、低细胞毒性的麻疹病毒抗血清,该血清可用于麻疹疫苗毒种及含麻疹疫苗的质量控制。     

γ-氨基丁酸的合成

以2-吡咯烷酮为起始原料,在碱性条件下发生开环反应,合成了γ-氨基丁酸(GABA)。GABA与异硫氰酸苯酯发生衍生化反应后,用带有紫外检测器的高效液相色谱进行检测,其纯度为99%、收率为80%。     

γ-氨基丁酸液体发酵过程的条件优化及补料研究

为了提高γ-氨基丁酸(GABA)的发酵水平,在3.7 L发酵罐中考察了不同操作条件(通气和pH控制)对短乳杆菌CGMCC NO.1306分批发酵生产GABA的影响.结果表明,不同操作条件对GABA的发酵产量有显著影响.好氧发酵有利于菌体的生长,最大菌体干重达到2.78 g·L-1,而厌氧发酵有利于产物GABA的生成,发酵72 h时GABA的产量达到23.94 g·L-1.在兼性厌氧条件下,研究了pH控制对GABA分批发酵的影响,实验发现pH控制在5.0时,GABA产量最高,发酵72 h时GABA的产量达到40.73 g·L-1. 对GABA的补料发酵进行了初步研究,发酵108 h时GABA产量达到76.36 g·L-1,分别比摇瓶发酵、厌氧发酵以及控制pH 5.0发酵提高128.6%、219%和87.5%.     

谷氨酸席夫碱Ni(Ⅱ)配合物法合成L-茶氨酸

采用谷氨酸席夫碱Ni(Ⅱ)配合物法合成L-茶氨酸.手性助剂——2-[N-(N′-苄基)-脯氨酰]-氨基-二苯甲酮(BPB)、六水合氯化镍和L-谷氨酸反应,将谷氨酸的α-羧基和氨基进行同时保护,得到谷氨酸席夫碱Ni(Ⅱ)配合物;通过接肽试剂与乙胺盐酸盐反应,得到茶氨酸席夫碱Ni(Ⅱ)配合物,经酸水解后离交分离,获得L-茶氨酸,3步反应总收率为70%.手性辅基BPB可回收,回收率超过90%.中间产物和终产物的结构经由 ~1HNMR、HRMS和旋光表征.     

兔抗邻苯二甲酸二甲酯的多克隆抗体制备及特性分析

通过偶氮键将邻苯二甲酸二甲酯半抗原衍生物与载体蛋白BSA偶合后作为免疫原,免疫新西兰大白兔,得到合格的邻苯二甲酸二甲酯抗血清,双向琼脂扩散方法测定血清效价为1∶16~1∶32,间接荧光免疫法检测效价为1∶3200~1∶6400。通过兔颈部采血、抗血清纯化,得到抗邻苯二甲酸二甲酯多克隆抗体IgG冻干后分装,-20℃低温保存。建立了间接荧光免疫法检测纯化抗体的方法。间接竞争荧光免疫法考察交叉反应试验结果显示纯化的邻苯二甲酸二甲酯抗体与邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二丙酯、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二环己酯、邻苯二甲酸二戊酯、邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯等邻苯二甲酸酯类环境激素的交叉反应率均<9%。制备的抗体可应用于环境激素类物质邻苯二甲酸二甲酯的荧光免疫分析。     

4-芳基-3-羟基异噻唑衍生物的合成与生物活性研究

以3-羟基异噻唑为原料,设计并合成了一系列4-芳基-3-羟基异噻唑衍生物,通过1 HNMR、13 CNMR和HRMS对目标化合物进行了结构表征,并测试了目标化合物的昆虫 γ-氨基丁酸(GABA)受体抑制活性及杀虫活性.结果表明,目标化合物在100μmol·L-1浓度下对斜纹夜蛾和家蝇GABA受体均具有一定的抑制活性,且...     

药理试剂羧甲基羟胺半盐酸盐的合成

羧甲基羟胺半盐酸盐(Carboxymethoxylamine hemihydrochloride也称AOAA)是γ-氨基丁酸(GABA)转氨酶的抑制剂,能提高内源性GABA的水平。广泛用于神经药理的研究。是一种神经药理试剂。近年来在亲和层析系统中,带有酮基,特别是类固醇酮基的配位体,能先与AOAA反应而固定。     

羟丙基-β-环糊精对植物甾醇侧链生物转化反应的影响

研究了转化介质对分枝杆菌(Mycobacterium sp.NRRLB-3683)降解植物甾醇生物转化反应的影响.结果表明添加羟丙基-β-环糊精构建成一种新的超分子介质体系可以提高转化反应的反应速率和摩尔转化率,当植物甾醇质量浓度为5 g·L-1,转化168 h时植物甾醇摩尔转化率达到89.9%,较对照试验提高了3.1倍.在含有羟丙基-β-环糊精的转化体系中,研究了羟丙基-β-环糊精添加量、添加时间和底物质量浓度对植物甾醇生物转化反应的影响.研究表明,植物甾醇质量浓度为5～10 g·L-1,转化0 h时添加与植物甾醇摩尔比为2:1的羟丙基-β-环糊精,转化72 h,底物摩尔转化率达到85%以上.本研究为环糊精超分子主体化合物在甾体生物转化反应中的应用提供了理论依据和基础数据.     

己烷雌酚免疫原的合成及其鼠源抗血清的制备

目的合成己烷雌酚(hexestrol,HES)免疫原,并制备其鼠源多抗血清。方法在HES的适当位点上引入活性基团羧基(-COOH)得到HES的半抗原,采用EDC/NHS法合成人工免疫原HES-BSA和检测抗原HES-OVA,经紫外扫描和SDS-PAGE鉴定HES与载体蛋白BSA、OVA是否成功偶联;用免疫原(HES-BSA)免疫3只BALB/c小鼠,获得抗HES多抗血清(polyclonal antibody serum,pAbs),ELISA法检测其效价,间接竞争ELISA法检测其敏感性,交叉反应(cross-reactivity,CR)试验检测其特异性。结果免疫的1号小鼠pAbs效价达到1. 28×104,2号和3号小鼠均在6. 4×103以上;1号小鼠HES pAbs对HES的50%抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)为19. 93 ng/mL,除与己烯雌酚有11. 63%的CR外,与其他结构类似物无CR。结论获得了效价高及敏感、特异的多抗血清,为进一步的免疫学快速检测提供了技术支持。     

L-谷氨酰肼为底物酶法制备茶氨酸

采用一种廉价的底物L-谷氨酰肼代替L-谷氨酰胺,成功地合成了茶氨酸,并且对该酶促反应的条件进行了初步优化。结果表明,以L-谷氨酰肼为底物时,γ-谷氨酰转肽酶(GGT)活性约是以L-谷氨酰胺为底物时的78.3%。该酶促反应的最适条件为:pH=10,反应温度40℃,n(L-谷氨酰肼)∶n(乙胺)=1∶10,L-谷氨酰肼初始浓度0.3mol/L。利用以上条件进行了茶氨酸的小量制备,投料L-谷氨酰肼50g,乙胺140g,反应40h,L-谷氨酰肼的摩尔转化率达84.1%,经离子交换树脂分离产物,得到31.8g高纯度茶氨酸。该结果显示良好应用前景。     

酶法分离制备γ-氨基丁酸和L-天冬氨酸

以L-谷氨酸(L-G lu)和L-天冬氨酸(L-Asp)两种混合酸性氨基酸〔m(L-G lu)∶m(L-Asp)=1∶1〕为原料,利用大肠杆菌菌体内脱羧酶对L-谷氨酸的专一脱羧作用,酶法分离制备了γ-氨基丁酸和L-天冬氨酸。考察了转化体系温度、pH等影响L-谷氨酸脱羧酶活力的主要因素,实验表明,最佳工艺条件为:温度35℃,转化体系pH=5.0,ρ(菌体)=6 g/L,ρ(Tween80)=0.15 g/L,菌龄16 h,ρ(底物)=60 g/L。L-谷氨酸脱羧酶在最适转化条件下比酶活高达15 036 U。1 g湿菌体可重复使用3次共转化L-谷氨酸和L-天冬氨酸混合物30 g,其中L-谷氨酸完全转化为γ-氨基丁酸。γ-氨基丁酸及L-天冬氨酸的总收率可分别达到理论收率的88%和90%。     

天门冬氨酸氨基转移酶连续监测法最适条件的探讨

根据天门冬氨酸氨基转移酶(AST)催化作用的乒乓反应机制,通过二次作图法测定的 L-天门冬氨酸(S_1)和α-酮戊二酸(S_2)的米氏常数分别为(K_m)_(s_1)=7.5mmol/L、(K_m)_(s_2)=0.384mmol/L。当υ_1=0.91V 时,最适条件为;L-天门冬氨酸110mmol/L;α-酮戊二酸12mmol/L;NADH_2 0.25mmol/L;MDH 500U/L;LDH500U/L;Tris 缓冲液80mmol/L,pH8.0±0.1。在此条件下,本法的测定性能为:1)延迟反应时间为30～60s;2)线性反应时间为8min;3)线性测定范围为500U/L(30℃);精确性CV%为0.53～6.7%;相关试验 r=0.9900;95%正常成人 AST 的分布范围为7～30U/L。     

吡咯并[2,3-c]氮杂卓-4,8-二酮衍生物的合成

将N-(2-吡咯甲酰基)-β-丙氨酸甲酯(Ⅲ)与卤代烃经烷基化反应得到的产物水解,得到N-(1-烷基-2-吡咯甲酰基)-β-丙氨酸(Ⅱa～Ⅱc),收率84.7%～91.2%;以化合物Ⅱ为原料,在多聚磷酸-P2O5作用下,经分子内环化反应合成了标题化合物1-烷基-6,7-二氢-1H,5H-吡咯并[2,3-c]氮杂-4,8-二酮(Ⅰa～Ⅰc),收率69.1%～77.2%。3步反应总收率为61.8%～69.1%。测定了3个标题化合物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用。     

镉试剂褪色光度法测定β-环糊精及包合作用探讨

在pH=10的硼砂-氢氧化钠缓冲溶液介质中,镉试剂在溴化十六烷基三甲基铵(CTMAB)存在下与β-环糊精(β-CD)的褪色反应,据此建立了新的测量β-环糊精的光度法。结果表明,褪色后体系的最大吸收波长540 nm,表观摩尔吸光系数为2.05×103L.(mol.cm)-1,β-环糊精浓度在0～1.6×10-4mol.L-1符合朗伯比尔定律。可用于β-环糊精的测定。在最佳条件下,镉试剂与β-环糊精形成1∶2的包合物。     

氨基-β-环糊精-单壁碳纳米管-二茂铁修饰电极对抗坏血酸的电化学行为研究

合成制备了氨基-β-环糊精(NH2-β-CD),然后通过主客体反应将NH2-β-CD与二茂铁(Fc)形成稳定的包合物,再与单壁碳纳米管(SWCNTs)复合后得到NH2-β-CD/Fc/SWCNTs复合膜修饰电极。通过循环伏安法研究该修饰电极对抗坏血酸(AA)的电催化行为。结果表明,在pH7.0的磷酸盐缓冲溶液(PBS)中,电位范围在-0.2～0.6V内,峰电流的变化值与抗坏血酸的浓度在1×10-5～1×10-3mol/L范围内成良好的线性关系,检出限为3.6×10-7mol/L。当用于模拟样品的测定,加标回收率为98.3%～100.8%,效果良好。     

4,5-双取代-3-羟基异噻唑衍生物的合成与杀虫活性研究

针对离子型γ-氨基丁酸(GABA)受体竞争性拮抗位点,设计合成了一系列5-芳基-4-四氢吡啶-3-羟基异噻唑衍生物,通过¹HNMR、¹³CNMR和MS对目标化合物进行了结构表征。活性测试结果表明,在100 mg·L^-1浓度下,部分目标化合物对成年雌性果蝇表现出一定的杀虫活性,为新型GABA受体杀虫剂先导化合物的设计与合成提供了理论依据。     

γ-氨基丁酸的生物合成及其在食品中的应用

γ-氨基丁酸(GABA)是一种具有生物活性的非蛋白质氨基酸,因其生理功能强大及对代谢的积极影响而被广泛研究。其中最重要的是降压作用,已在动物和人体干预试验中得到验证。乳酸菌(LAB)是γ-氨基丁酸(GABA)的主要生产者,发酵食品中富含GABA。本文主要阐述了GABA的生物合成及其在食品中的应用。     

5-叔丁基-5-（1’羧基-2’-甲基丙基）-2，2-二甲基1-，3-二氧六环的合成研究

双环硫化磷酸酯类化合物具有潜在的杀虫活性．1976年和1977年，Bellet，Bowery和Koenaga等报道双环有机磷酸酯类化合物是γ-氨基丁酸(GABA)受体的抑制剂。20世纪80年代中期，通过电生理和同位素示踪技术证明，双环硫(氧)化磷酸酯类化合物为1-氨基丁酸A型(GABA)受体非竞争性拮抗剂，作用于苦毒宁(picrotoinin)位点并表现出较高的杀虫活性。     

L-天门冬氨酸螯合铜的合成研究及表征

以L-天门冬氨酸为原料,合成了L-广天门冬氨酸螯合铜,运用正交设计实验对影响L-天门冬氨酸螯合铜反应的条件进行研究,获得最佳反应条件：n(L-广天门冬氨酸)：n(氢氧化铜)=2．2：1,反应温度80℃,pH=6．0,反应时间2h,产率可达91．3％。采用有机溶剂沉淀法制备高纯度的L-天门冬氨酸螯合铜,用化学分析和红外光谱分析对其进行研究确认。