乙二胺四乙酸对食源性混合病原菌生物被膜的抑制作用

该研究以食源性混合病原菌生物被膜(金黄色葡萄球菌-大肠杆菌-沙门氏菌)为研究对象,研究不同质量浓度的乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid,EDTA)对混合菌生物被膜的抑制作用。结果表明,当添加0.25 mmol/L的EDTA时即可使混合菌生物被膜黏附率下降16.5%,检测AI-2分子活性和扫描电镜观察形态进一步证实了随着EDTA浓度的增加,黏附度逐渐减少;EDTA仅对处于黏附期(0～28 h)的混合菌生物被膜有抑制作用;添加二价金属离子(Mg~(2+)、Ca~(2+)、Fe~(2+))可增强混合菌生物被膜的稳定性。     

食源性混合菌生物被膜的形成和相互作用机制

在食品加工中,食源性病原菌生物被膜的存在会引发大量食品污染等安全问题。目前,国内外学者深入研究了单一菌生物被膜,然而对混合菌生物被膜的研究较少。本文在现有的研究基础上,归纳总结了食源性混合菌生物被膜的形成规律及混合菌生物膜中菌种间的相互作用,初步探讨了群体感应在混合菌生物膜中的作用,以期为食品领域应对和破解食源性混合菌生物被膜污染问题提供思路。     

培养条件对食源性混合病原菌生物被膜形成的影响

以食源性病原菌金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌及其混合菌为研究对象,采用单因素分析及BoxBehnken试验,确定混合菌生物被膜形成的最佳条件;通过96微孔板法分别测定胰蛋白胨大豆肉汤培养基(tryptone soybroth,TSB)、葡萄糖和NaCl对单一菌和混合菌在最佳条件下形成生物被膜能力的影响。结果显示,混合菌生物被膜的最佳培养基p H值为7,培养温度36℃,培养时间22 h;采用质量分数为1.6%的TSB培养基时,病原菌在最佳条件下形成的生物被膜黏附率最大;碳源促进了生物被膜的形成;NaCl质量分数大于0.4%时,食源性病原菌生物被膜的形成能力受到一定抑制。综上,培养条件能够影响病原菌生物被膜的形成。     

布氏乳杆菌细菌素BSX01对金黄色葡萄球菌及其生物被膜形成的影响

为评估布氏乳杆菌所产细菌素在食品工业中的应用潜力,通过培养布氏乳杆菌获得具有抑制金黄色葡萄球菌的抑菌活性物质,经纯化后鉴定其相对分子质量大小与抑菌特性,并对抑制金黄色葡萄球菌生物被膜的形成进行探讨。结果发现,布氏乳杆菌在37 ℃ MRS培养基中培养至20 h后进入稳定期,在26 h时对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径达峰值,为（26.36±0.86） mm。 通过АKTA pure系统串联Superdex 30 Increase纯化后,鉴定得到抑菌活性物质（BSX01）的相对分子质量为773.56,对多种蛋白酶敏感,推测为Ⅰ类细菌素。在pH 10(2 h)和121 ℃(30 min)处理后,BSX01仍具有较好的抑菌活性,最小抑菌质量浓度（MIC）仅为12.50 μg/mL。此外,BSX01在1/2 MIC时可有效降低金黄色葡萄球菌生物被膜的形成,在2 MIC时能够完全抑制生物被膜的形成。基于上述结果,布氏乳杆菌产生的细菌素BSX01是食品工业中的潜在生物防腐剂和抑制食源性致病菌生物被膜形成的有效候选品。     

植物乳杆菌对食源性病原菌作用的研究

通过牛津杯法筛选得到几株高抑菌活性的植物乳杆菌,使用蛋白酶K和NaOH对这几株杆菌的发酵液上清进行处理,以大肠杆菌O157:H7和金黄色葡萄球菌为指示菌,发现有机酸为主要抑菌物质,但是调节pH值至6.5后的发酵上清液可以对大肠杆菌有较好的抑菌效果。其中植物乳杆菌QB3-3具有长达96 h的持续抑菌效果。电子显微镜观察显示,植物乳杆菌抗病原菌的主要机理为破坏细胞结构,导致病原菌菌体形态改变,内容物流出,致使细胞死亡。     

食源性混合病原菌生物被膜行为对金黄色葡萄球菌毒素因子转录水平的影响

以食源性病原菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和肠炎沙门氏菌)形成的混合菌生物被膜为研究对象,对其定性和定量检测,通过实时荧光定量PCR方法分别检测单一菌和混合菌生物被膜中金黄色葡萄球菌28种目的 毒素基因转录水平的变化.结果 表明,结晶紫染色法、银染法和扫描电镜法均表明混合菌在培养24 h时达到最大黏附度;混合菌生物被膜中...     

具有抑菌活性植物乳杆菌的筛选及抑菌物质特性的研究

该研究通过牛津杯双层平板法,从分离自四川泡菜的114株植物乳杆菌中筛选对大肠杆菌O157:H7具有较强拮抗活性的菌株,并对其所产抑菌物质的特性进行了初步的研究。结果表明：114株植物乳杆菌的上清液均可抑制大肠杆菌,其中16株菌的上清液经排酸后仍有抑菌作用,并且抑菌作用不受过氧化氢酶影响,经蛋白酶处理后大幅降低甚至消失;在进一步筛选中发现植物乳杆菌IMAU80122所产抑菌物质具有耐酸（pH 3）、耐弱碱（pH 8）的特性,在80℃具有一定的稳定性,对不同的表面活性剂、有机溶剂、金属离子、盐浓度、紫外照射时间都具有良好的耐受性;对G^-菌株的抑菌活性强于G⁺菌株,但对供试的乳酸菌没有作用。综上所述,植物乳杆菌IMAU80122所产抑菌物质具有蛋白性质,不仅抑菌活性强,而且具有良好的稳定性和广谱抑菌效果,在食品加工和医药行业中具有一定的开发应用潜能。     

AHLs对不同菌株产生物胺的影响及菌株生物被膜特性分析

本文选取新疆熏马肠中产生物胺优势菌克雷伯氏菌、阴沟肠杆菌、成团泛菌作为研究对象,根癌农杆菌A136平行线法检测信号分子,现象表明3株优势菌均能发生群体感应现象。AHLs活性检测、生物胺检测及β-半乳糖苷酶活力与生物胺相关性分析,结果表明:克雷伯氏菌、成团泛菌的β-半乳糖苷酶活力与腐胺、尸胺、组胺、酪胺均显著相关(RPerson均在0.817之上,P0.01);阴沟肠杆菌β-半乳糖苷酶活力与尸胺显著相关(RPerson=0.923,P=0.000.01);因此,AHLs分泌影响生物胺累积,具有协同作用。通过28℃、37℃生物被膜试验、细胞疏水性试验,结果表明:3株优势菌对二甲苯、三氯甲烷、乙酸乙酯吸附能力不同,细胞疏水值均不同;克雷伯氏菌形成生物被膜的能力差异不显著(P=0.0950.05),阴沟肠杆菌、成团泛菌形成被膜的能力差异显著(P=0.03150.05,P=0.0470.05)。因此,细胞疏水性能、培养时间、温度影响优势菌生物被膜形成。     

食源性混合菌种生物被膜的形成与种间相互作用

食源性微生物形成的生物被膜是食品生产加工中不容忽视的安全隐患,针对食品生产加工环境中广泛存在的混合菌种生物被膜的研究仍处于起步阶段。该文在现有的理论和研究结果基础上,总结了食源性混合菌种生物被膜的形成规律,归纳介绍了混合被膜中微生物间以竞争和共生为主的种间相互作用及其调控机制,旨在为食品领域混合菌种生物被膜的研究提供借鉴。     

戊糖乳杆菌DF9对副溶血弧菌群体感应的淬灭作用

以副溶血弧菌的群体感应(quorum sensing,QS)为靶标,研究戊糖乳杆菌DF9的乙酸乙酯提取物作为群体感应抑制剂(QS inhibitor,QSI)对其的淬灭效果.在确定DF9-QSI对副溶血弧菌和哈维氏弧菌BB170生长影响的基础上,探讨亚抑菌浓度的DF9-QSI对副溶血弧菌QS信号分子AI-2的活性、动力...     

不同食源微生物生物被膜形成特征及亚致死浓度消毒剂对菌体成膜的影响

研究4种细菌在体外不同培养条件下形成生物膜的能力,并探索了亚致死质量浓度消毒剂对细菌生物成膜的影响。在不同营养物质浓度和培养条件下以及不同质量浓度的季铵盐下,以微孔板法检测菌体成膜性。高温、低浓度的葡萄糖和NaCl促进菌体形成生物膜,高质量浓度葡萄糖和NaCl、较高的培养温度,成膜受到抑制。菌体成膜受到多种因素的影响,合理控制食源微生物生物被膜的形成,是促进食品安全和卫生的重要手段。     

右旋龙脑和肉桂醛抑制游离态和生物被膜态食源致病菌的研究

目的:以天然产物右旋龙脑和肉桂醛为研究对象,研究其抑制游离态和生物被膜态单核增生李斯特菌和鼠伤寒沙门氏菌的特征。方法:在采用微量肉汤稀释法研究右旋龙脑和肉桂醛单独对游离态单核增生李斯特菌、鼠伤寒沙门氏菌及其混合菌的最低抑菌浓度(MIPC)的前提下,分析两种天然产物共同作用下对游离态致病菌的最低抑菌浓度以及对生物被膜态致病菌的最低抑菌浓度(MIBC)。结果:右旋龙脑对游离态单核增生李斯特菌的MIPC为0.56mg/mL,对游离态鼠伤寒沙门氏菌的MIPC为0.58mg/mL,对混合菌的MIPC为0.60mg/mL;添加肉桂醛时的3种培养状态下MIPC均为0.40μL/mL;在右旋龙脑和肉桂醛共同作用下(即0.50mg/mL右旋龙脑和0.40μL/mL肉桂醛)对游离态菌体均可完全抑制,而2.50mg/mL右旋龙脑和2.00μL/mL肉桂醛共同作用下可以完全抑制生物被膜态的菌体。结论:两种天然产物对生物被膜态菌体的最低抑菌浓度远远大于游离态菌体,右旋龙脑和肉桂醛在抑制游离态菌体和生物被膜态菌体生长方面具有协同作用。     

茶多酚、柠檬醛和肉桂醛对食源菌生物被膜的影响研究

研究茶多酚、柠檬醛、肉桂醛在亚抑菌浓度下对食源性金黄色葡萄球菌和肠炎沙门氏菌生物被膜形成能力的影响.采用二倍稀释法确定三种物质的最小抑菌浓度,在亚抑菌浓度下作用于10株金黄色葡萄球菌和10株肠炎沙门氏菌,用微孔板法检测两种细菌生物被膜形成情况.结果表明茶多酚、柠檬醛、肉桂醛在亚抑菌浓度下对金黄色葡萄球菌和肠炎沙门氏菌均有不同程度的抑制作用,差异有统计学意义(P＜0.05),且随着各物质浓度的加大抑制作用也增强,茶多酚对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌成膜抑制能力比对革兰氏阴性菌肠炎沙门氏菌的成膜抑制能力要强,差异有统计学意义(P＜0.05).柠檬醛和肉桂醛对两种不同细菌的成膜抑制能力没有差异.     

食源性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物被膜的形成及相关基因的检测

为了解食源性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant S. aureus,MRSA）生物被膜形成能力及其相关基因携带情况。采用刚果红琼脂法和96孔板法测定22株食源性MRSA菌株（包括：原料乳分离株4株,鸡肉、速冻水饺和即食食品分离株各6株）的生物被膜形成能力,同时通过PCR方法对MRSA菌株生物被膜形成相关的15个基因进行检测分析。22株MRSA菌株中,刚果红琼脂法和96孔板法分别检测出21株（95.45%）和22株（100.00%）有生物被膜形成能力。96孔板法测定菌株生物被膜形成能力弱、中等和强的检出率分别为54.55%、40.91%和4.55%。MRSA菌株生物被膜相关基因clfA、fib和eno的携带率最高均为95.45%,其次是clfB（90.91%）、fnbB（54.55%）、icaBC和ebpS（都为45.45%）、agr（27.27%）、icaAD和cna（都为22.73%）、fnbA（13.64%）,sar,bbp和sigB（都为4.55%）。此外,来自原料乳和即食食品的MRSA菌株较生鸡肉和速冻水饺MRSA菌株生物被膜形成能力强（p<0.05）。结果表明,96孔板法能够进行定性和定量检测生物膜的形成,而刚果红琼脂法只能定性检测生物被膜的形成,两者的定性检测结果存在一定的差异。通过96孔板法定量检测的结果表明食源性MRSA菌株普遍能形成生物被膜,其中存在一些生物被膜形成能力强的MRSA菌株,同时大部分MRSA菌株不依赖ica途径形成生物被膜,提示产肠毒素MRSA菌株形成生物被膜定植在食品加工过程的环境中,不易清除,成为食品安全中的潜在隐患。     

不同胁迫体系对植物乳杆菌zwq9生物膜形成及其产蛋白酶活力的影响

采用微量板半定量法分析不同外界胁迫条件对植物乳杆菌zwq9的生物膜形成能力及其产蛋白酶活力的影响。结果表明：蛋白酶K处理能够明显破坏zwq9的生物膜,而高碘酸钠对生物膜无明显影响;在乳酸胁迫条件下,乳酸浓度0.8%以上时zwq9的生长和生物膜的形成被显著抑制（P＜0.05）,其产酶活力也显著降低90%以上（P＜0.05）;在温度胁迫条件下,30℃～40℃时zwq9的生物膜形成能力和产酶活力显著高于其他处理组（P＜0.05）;在盐胁迫条件下,较低浓度的NaCl（1%～4%）对zwq9的生物膜形成无显著影响（P＞0.05）,但却显著增强其产酶活力（P＜0.05）,而当NaCl浓度高于8%时,zwq9的生物膜及产酶活力均下降90%以上;相关性分析结果表明,在乳酸和盐胁迫条件下,植物乳杆菌zwq9的生物膜形成能力和产蛋白酶活力呈极显著正相关关系（P＜0.01）。     

樟芝深层发酵菌丝体提取物对食源性致病菌的抑制作用

樟芝是一种珍稀食药两用大型蕈菌,具有解酒保肝、抗肿瘤、抗病毒、调节免疫等多种生物活性.本文以成本低廉且易获得的樟芝深层发酵菌丝体为原料,用甲醇、乙醇、乙酸乙酯及水提取樟芝菌丝体中的活性物质,采用牛津杯法检测上述4种樟芝菌丝体提取物对15株食源性致病菌的抑制作用,结果表明樟芝菌丝体甲醇提取物抑菌谱最广,对其中7株致病菌(...     

群体感应抑制剂对发酵乳杆菌生物膜生成的影响

以课题组前期筛选出的2株高产信号分子AI-2的发酵乳杆菌2-1和211为研究对象,选择D-半乳糖、D-核糖和呋喃酮作为群体感应抑制剂,采用化学发光法和结晶紫染色法测定2株发酵乳杆菌的AI-2活性以及生物膜形成量。结果表明：一定浓度的3种抑制剂都可以抑制2株发酵乳杆菌信号分子AI-2的活性,其中200μmol/L D-核糖对菌株2-1 AI-2活性抑制效果最好,抑制率为19.65%,50μmol/L D-核糖对菌株211 AI-2的活性抑制效果最好,抑制率为28.57%;同时不同浓度的抑制剂对2株发酵乳杆菌的生物膜形成量都有一定的抑制作用,对其生长量的影响并不显著。扫描电镜结果显示添加D-核糖对2株发酵乳杆菌生物膜状态下的菌体形态虽无明显影响,但会降低细菌的黏附性。     

常见食源性致病菌胞外代谢轮廓分析

寻找常见食源性致病菌间特征性代谢产物,是研发食品安全快速高效监控技术的基础。本文直接利用常见食源性致病菌发酵液冻干,经硅烷化试剂衍生,并采用气相色谱-质谱技术(GC-MS)对代谢产物进行分析,同时进行NIST11谱图库检索并分类,并对数据进行热图和主成分(PCA)分析。研究发现,发酵液中有大量有机酸、醇类和胺类等物质产生,且菌种间各代谢产物种类和相对含量差异显著;同时各菌间含有丰富的特有代谢产物,其中部分特有代谢产物在其他菌株中未见报道。通过热图和PCA分析各菌株胞外代谢轮廓可知,24 h时各菌株间能够明显区分,同时去除糖类和氨基酸后,PCA区分鉴定效果明显提高,尤其在24 h时最好。研究表明,胞外代谢轮廓分析可以用于寻找常见食源性致病菌生物标志物和菌种区分鉴定,同时部分菌种间特有的代谢产物有望成为常见食源性致病菌潜在生物标志物。     

食源性致病菌定量风险评估的实例

定量风险评估是对桌种危害造成的风险的性质和严重程度的技术评估将这门新学科应用于食源性致病菌的研究,有利于推动风险管理与风险交流。介绍了沙门菌属、弧菌属、单核细胞增生性李斯特菌、大肠埃希菌O157：H7、弯曲菌属、腊样芽孢杆菌和阪崎肠杆菌等几种重要食源性致病菌定量风险评估的应用实例。     

菌株聚集和成膜特性对开菲尔粒成粒作用的影响

开菲尔粒是一种天然的发酵剂,原粒在牛奶中经长期培养后会不断长大,分裂产生新的开菲尔粒。开菲尔的成粒特性已经引起了人们的广泛关注,然而到目前为止,人们还无法人工合成开菲尔粒,这与其粒中复杂的微生物体系及成分组成等息息相关;开菲尔粒的形成是一个复杂的过程,其中所含的微生物菌系、蛋白质、多糖等成分均会影响开菲尔粒的形成。因此,本文根据国内外的研究动态,介绍了开菲尔粒中微生物的多样性及分布,阐述了开菲尔粒中的微生物及蛋白质、多糖等成分对菌株聚集及生物膜形成特性的影响,进而从微生物的聚集能力及生物膜形成能力的角度出发,综述了开菲尔粒的成粒特性,以期为研究开菲尔粒的形成机制,建立人工合成开菲尔粒的方法,开发开菲尔产品提供思路。