鸡蛋卵转铁蛋白铁结合能力及性质的研究

本试验研究了鸡蛋卵转铁蛋白与不同浓度铁离子的结合能力,以及卵转铁蛋白在不同p H值和Na HCO3条件下与铁离子的结合能力;采用差示扫描量热仪(DSC)和圆二色性(CD)光谱分析卵转铁蛋白铁饱和度对其热变性温度和结构的影响。结果表明,铁离子与卵转铁蛋白的摩尔比值在2.2左右时,卵转铁蛋白铁达到完全饱和;在中性和偏碱性的条件下,卵转铁蛋白对铁结合能力比较高;卵转铁蛋白铁结合能力随着Na HCO3浓度的增加而增强,当其浓度超过75 mmol/L以后,铁结合能力基本保持不变。卵转铁蛋白铁饱和度越高,其热变性温度越高,由去铁卵转铁蛋白的63.41℃到饱和铁卵转铁蛋白的83.29℃;去铁卵转铁蛋白比饱和铁卵转铁蛋白的远紫外CD光谱带更加趋于负值,α-螺旋含量有微小的减少,减少量为4.40%,而β-折叠、β-转角和其它的含量均有所增加,增加量分别:2.80%、1.20%、12.90%;在近紫外CD光谱区,饱和铁卵转铁蛋白的三级结构发生了较为明显的变化。     

甘氨酸螯合铁纳米脂质体对缺铁性贫血大鼠的补铁效果

研究了甘氨酸螯合铁纳米脂质体作为补铁剂对缺铁性贫血大鼠的补铁效果。通过对SD品系初断乳大鼠喂养缺铁基础饲料,建立缺铁性贫血大鼠模型,再用甘氨酸螯合铁纳米脂质体对缺铁性贫血大鼠补铁,并与甘氨酸螯合铁和硫酸亚铁进行比较。结果表明,甘氨酸螯合铁纳米脂质体能够显著增加大鼠血液中血红蛋白含量,提高血清铁含量,降低血清总铁结合力(P<0.05);并且它能够有效地促进大鼠肝脾组织中铁含量的增加。因而,甘氨酸螯合铁纳米脂质体可显著改善大鼠的缺铁性贫血状况,且比甘氨酸螯合铁和硫酸亚铁有更好的补铁效果。     

卵转铁蛋白对树突状细胞成熟的影响

为考察卵转铁蛋白(OVT)对髓源性树突状细胞(BMDCs)成熟的影响。采用不同浓度OVT单独刺激和脂多糖(LPS)+不同浓度OVT共刺激第6 d小鼠BMDCs 48 h,通过倒置显微镜观察细胞形态,并用流式细胞仪测定各组CD11c+细胞比例以及DCs表面MHC-II,CD80和CD40分子表达量。结果表明,不同浓度OVT组刺激的DCs周围毛刺状突起增加,呈现典型的树突状细胞形态,且上调CD11c+细胞比例以及DCs表面MHC-II、CD80和CD40分子表达量。LPS+不同浓度OVT组中,低浓度(≤25μg/m L)组可提高CD11c+细胞比例,上调MHC-II、CD80和CD40表达量;高浓度(25μg/m L)组则能下调CD11c+细胞比例和DCs表面MHC-II、CD80和CD40表达量。因此,不同浓度OVT均能刺激DCs的成熟;LPS+不同浓度OVT共刺激DCs,能显著提高DCs的成熟度,但呈现剂量依赖型,即低浓度时,两者表现出协同作用,高浓度时两者表现出拮抗作用。     

卵转铁蛋白的性质及应用

介绍了卵转铁蛋白的分子组成及其性质,从转铁功能、抑菌功能、调节功能、抑制自由基生成等方面阐述了卵转铁蛋白的生物学功能,例举了卵转铁蛋白作为食品添加剂、抑菌剂方面的应用。     

鸡蛋过敏原卵转铁蛋白标准物质候选物的研究

目的:制备高纯度的鸡蛋过敏原卵转铁蛋白,并详细表征其理化性质及免疫学性质,满足标准物质候选物的质量要求。方法:通过两步柱层析法制备卵转铁蛋白并分装、冻干,然后借助质谱鉴定身份;采用SDS-PAGE银染方法鉴定纯度,圆二色光谱、荧光光谱和核磁共振表征高级结构;利用Bradford法检测含量和SDS-PAGE银染方法评估稳定性,间接ELISA方法评估其与Ig E结合能力。结果:制备的蛋白经质谱鉴定为鸡蛋卵转铁蛋白,分子量约79.55 ku,等电点为6.85,纯度高达94.6%;结构分析显示,制备的卵铁蛋白保留了其天然结构特性,并且冻干未使卵转铁蛋白的结构产生明显的变化;在4℃条件下储藏5个月,卵转铁蛋白的含量、纯度、结构和免疫学活性均无明显变化。结论:制备的卵转铁蛋白可作为标准物质候选物。      

热处理对卵转铁蛋白抑菌效果的影响

卵转铁蛋白(OVT)是一种具有结合铁能力的球蛋白,具有广谱的抗菌功能,其抑菌活性与其结构密切相关。作者研究热处理对卵转铁蛋白抑菌效果的影响,并通过对其二级结构和疏水作用的分析来揭示其抑菌效果的变化机理。结果表明:随着处理温度的升高,卵转铁蛋白对沙门氏菌和大肠杆菌的抑菌效果呈降低趋势;热处理后卵转铁蛋白的二级结构和疏水作用都发生了变化,随着处理温度的升高以及处理时间的延长,α-螺旋含量呈降低趋势,β-折叠含量呈升高趋势,表面疏水性明显增大,而热处理时间则与卵转铁蛋白的结构与活性无明显关联。     

高效特异的鸡蛋过敏原卵转铁蛋白多克隆抗体的制备

为得到高效特异的抗卵转铁蛋白多克隆抗体,通过用商品化的卵转铁蛋白(OVT)标品和自制纯化的OVT 免疫新西兰大白兔,用ELISA 及Western blotting 方法检测制备的抗血清效价和特异性。结果表明获得的抗体效价均高达1:819200 以上,抗体特异性强。本实验所建立的方法可成功制备高效特异的抗卵转铁蛋白多克隆抗体,可为进一步研究提供实验材料。     

鸡蛋卵转铁蛋白过敏原的体外模拟消化特性

采用体外静态消化模式,分别模拟婴幼儿和成年人的胃液、小肠液以及小肠刷状缘膜酶消化鸡卵转铁蛋白,利用Tricine-SDS-PAGE和MALDI-TOF-MS对消化产物进行分析,研究鸡蛋蛋清过敏原卵转铁蛋白的消化特性.结果表明:婴幼儿和成年人的模拟胃液、小肠液以及小肠刷状缘膜酶都能够消化卵转铁蛋白.在模拟婴幼儿消化体系中...     

鸡蛋卵转铁蛋白过敏原B细胞线性表位的预测研究

为预测鸡蛋过敏原卵转铁蛋白的B细胞线性表位,以GenBank中提供的鸡蛋卵转铁蛋白氨基酸序列为基础,分别用Jameson-Wolf法、Kyte-Doolittle法、Emini法和Karplus-Schulz法对鸡蛋卵转铁蛋白的抗原指数、亲水性、蛋白表面可及性及柔韧性进行预测,并用Chou-Fasman法和Deleage-Roux法预测其二级结构,综合分析以上预测结果,得出鸡蛋卵转铁蛋白可能的B细胞线性表位区。结果表明鸡蛋卵转铁蛋白存在7个潜在表位区,包括蛋白第174～181、215～222、231～240、288～294、332～344、415～429、547～555位可能为B细胞线性表位优势区域。该结果将有助于鸡蛋卵转铁蛋白B细胞表位的进一步精确定位。     

鸡蛋清中卵转铁蛋白的分离纯化

鸡蛋清经去卵粘蛋白、盐析后,获得卵转铁蛋白粗提物,通过两步Q-Sepharose Fast Flow离子交换色谱纯化卵转铁蛋白(OVT),利用SDS-PAGE电泳和HPLC法检测其纯度.结果表明,两步阴离子交换色谱获得纯度分别为78.26%和97.53%的卵转铁蛋白.     

含铁牛血肽改善大鼠缺铁性贫血的效果评价

为开发牛血肽相关功能性产品提供理论依据,作者研究了含铁牛血肽对于大鼠缺铁性贫血的治疗效果。以低铁鼠粮饲喂初离乳雌性SD大鼠3周,建立缺铁性贫血模型。以含铁鼠粮为正常对照,以生血宁为阳性对照,用含铁牛血肽灌胃至血红蛋白质质量浓度达到100 g/L以上。结果表明：含铁牛血肽显著地改善了缺铁性贫血引起的大鼠体质量以及白细胞、红细胞、血红蛋白和红细胞压积等血常规指标的下降,同时改善铁代谢指标血清铁和血清铁蛋白。低剂量牛血肽效果相当于生血宁,中高剂量牛血肽效果优于生血宁,证明饲喂含铁牛血肽可以改善大鼠缺铁性贫血。     

卵转铁蛋白对树突状细胞功能成熟的影响

目的：探究卵转铁蛋白（ovotransferrin,OVT）对树突状细胞（dendritic cells,DCs）功能成熟的影响。方法：通过混合淋巴反应检测OVT对DCs刺激T淋巴细胞增殖能力的影响,酶联免疫吸附分析（enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA）检测DCs上清液中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白介素12p70（interleukin-12p70,IL-12p70）和IL-10细胞因子含量,Western blotting检测胞外信号调节激酶（extracellular signalregulated kinase,ERK）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen activated protein kinase,p38 MAPK）和c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）信号蛋白表达量。结果：OVT可以提高DCs刺激T淋巴细胞增殖的能力,并诱导DCs分泌TNF-α以及IL-12p70,且呈一定的剂量依赖关系。OVT可能是通过激活JNK和p38 MAPK信号通路以及抑制ERK信号通路上调细胞因子TNF-α、IL-12p70表达,从而促进DCs成熟。结论：OVT能促进DCs功能成熟,对机体的免疫具有调节作用。     

超声辅助磷酸化修饰对卵转铁蛋白理化及乳化特性影响的研究

卵转铁蛋白(Ovotransferrin,OVT)是蛋清中一种重要的功能蛋白质,前期研究多聚焦于OVT在补铁和抗菌活性等方面,而对其乳化特性研究报道较少。为扩大其应用领域,以OVT为研究对象,研究探讨了超声辅助磷酸化修饰对OVT理化及乳化特性的影响。结果表明:超声时间对磷酸化程度有显著影响,随着超声时间增长,蛋白的磷酸化程度呈现上升趋势,在超声时间为10 min时的磷酸化程度较高,达到0.0686 mg/g。超声辅助磷酸化修饰蛋白的粒径减小,电位绝对值增大,热稳定性提高。傅里叶变换红外光谱表明,磷酸基团(P=O、P—O)已成功引入蛋清蛋白侧链中,导致蛋白结构发生改变。综合研究发现改性后的OVT表现出了良好的乳化活性和乳液稳定性,其乳化性、乳化稳定性与天然OVT相比均有所提升,其中超声处理10 min时达到最大值127.29 mL/g。该研究有效提高了OVT的乳化性,为其在食品、医药等领域应用拓展了空间。     

膜分离技术制备蛋清卵转铁蛋白的工艺技术研究

利用微滤、超滤和钠滤技术,并结合冷冻干燥处理从蛋清中分离制备卵转铁蛋白(OVT).结果表明,经5倍生理盐水稀释,20℃和40MPa均质处理后的蛋清液黏度适宜,微滤除杂质后,通过10kD超滤膜除去大分子蛋白,再经5kD超滤膜连续处理,回收浓液经纳滤脱盐浓缩,冷冻干燥即为卵转铁蛋白混合物.混合物经SDS-PAGE电泳分析,OVT的相对分子质量为80kD,OVT纯度为28.46%.     

卵转铁蛋白对免疫低下小鼠Th1/Th2细胞平衡的影响

目的:研究卵转铁蛋白(OVT)对免疫低下模型小鼠的免疫平衡恢复作用。方法:将健康小鼠随机分为正常对照组、模型对照组及OVT高剂量组、中剂量组和低剂量组,每组10只。OVT高、中、低剂量组分别以10、1、0.1mg/mL的OVT溶液每天灌胃,灌胃量为20mL/(kg.d)(以体质量计)。模型组对照组和正常对照组灌胃生理盐水20mL/(kg.d)。连续灌胃15d,于第15天灌胃后注射环磷酰胺(正常对照组除外),继续灌胃至第19天(由模型决定)进行检测。测定血清中IFN-γ和IL-4含量、IFN-γ/IL-4比值以及脾脏和胸腺指数。结果:模型对照组小鼠血清IFN-γ的浓度和IFN-γ/IL-4比值与正常对照组相比明显降低(P<0.01);高剂量组小鼠血清IFN-γ的浓度和IFN-γ/IL-4比值显著高于模型对照组(P<0.01),与正常对照组比较,无显著性差异;高剂量组的脾脏指数和胸腺指数与模型对照组相比明显提高(P<0.01)。结论:OVT能修复由环磷酰胺所致免疫低下模型小鼠的体液和细胞免疫失衡,增强免疫低下小鼠的免疫功能。