ALA光动力学治疗对C6胶质瘤细胞凋亡的影响

目的:通过细胞学水平研究不同剂量ALA光动力学治疗对C6胶质瘤细胞细胞凋亡的影响。方法:以不同剂量的ALA(10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml)与C6胶质瘤细胞一起培养,随后以630nm半导体激光200mW/cm2,照射肿瘤细胞,照射20分钟,及与不用光敏剂单照激光、单用光敏剂不照光、不用光敏剂不照激光空白对照组比较。以流式细胞仪及倒置微镜、电镜观察促使肿瘤细胞凋亡或死亡的差别,寻找促使肿瘤细胞凋亡或死亡的最小合适剂量。结果:对照组没有细胞凋亡,ALA-PDT组随着剂量的增加细胞凋亡数增加。尤其晚期凋亡数明显增加,用药剂量增加至40μg/cc才能达到活细胞少于50%,即使剂量增加到160μg/cc,还是有19.7423的活细胞存在。结论:单纯用ALA激光PDT治疗不能达到完全将肿瘤细胞杀灭,ALA40mg/kg激光光动力学治疗才能得到明显的治疗效果。     

一种新的类病毒的暗场电镜研究

类病毒(Viroid)是一种仅含有300多个核苷酸的小分子RNA,是有感染性的致病因子,迄今只发现十余种类病毒。暗场电镜成像技术是观察如此微小核酸分子的有效方法。我们应用暗场电镜技术首次观察到苹果锈果病病原体(Apple Scar Skin Viroid)——一种新的类病毒的核酸分子。将纯化的类病毒分子溶在含有0.004％的Benzyldimethylalkylammonium chloride(BAC)中,终浓度为2μg/ml,展层后用敷有厚度为25—50A碳膜的铜网蘸取病毒分子(为增加碳膜的亲水性,先用浓度为30μg/ml的溴化乙啶处理5分钟),再经10~(-4)—10~(-5)M的醋酸双氧铀染色30秒后,在JEM—200CX电镜     

植物细胞壁伸展蛋白分子的电镜标本制备及观察

本文介绍一种植物细胞壁伸展蛋白分子的电镜标本制备及观察方法。用简化的装置将伸展蛋白的溶液,喷射到云母片上,再经投影和喷碳,经剥离后在电镜下观察呈棒状分子。通过测量,棒状分子的平均长度为87nm。     

不同制备条件对SpA分子印迹聚合微球聚合效果的影响

本文用金黄色葡萄球菌蛋白A(SpA)作为模板,以丙烯酰胺为功能单体,利用反相悬浮聚合法合成了SpA分子印迹聚合微球.通过扫描电镜观测不同条件下聚合微球的聚合效果,研究不同制备条件对SpA分子印迹聚合微球聚合效果的影响,从而筛选制备聚合微球最佳工艺;并检测了制备的分子印迹聚合物对SpA的吸附性能.结果表明,反相悬浮聚合法合成SpA分子印迹微球的最佳工艺条件为:分散剂乙基纤维素(EC)加入量0.20 g/100 mL(甲苯);甲苯与水的比例10:3;交联度10%;引发剂加入方式为缓慢滴加;反应温度50℃.反相悬浮聚合法制备的SpA分子印迹聚合微球对SpA的吸附量:6.956×10-3μmol/g.     

应用扫描电镜技术显示染色体方法的初探

光镜观察染色体,已沿续多年。扫描电镜问世以来,尤其是近10年来,国内外学者选用光镜观察认定的染色体标本,再重新用锇酸(1％O_sO_4)、丹宁酸(2％)浸渍,然后进行漂洗、自然干燥、黄金离子镀膜后上镜观察。其目的试图经电镜放大之后与光镜观察结果进行对比。近几年我们试用扫描电镜技术,经反复试验,成功地制备了染色体样品。其方法独特,结构新颖,为研究染色体开创了一条新路。一、材料与样品制作取临床病人静脉血0.5ml,注入装有1ml培养基(1640)的培养瓶中,置37℃培养箱72小时,取材前2小时加入秋水仙素1滴(10μg/ml),然后将其倒入离心管离心10分钟(2000转/分),弃上     

TNF-α对3T3-L1脂肪细胞胰岛素敏感性的影响及罗格列酮的干预作用

目的观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对3T3-L1脂肪细胞胰岛素敏感性的影响及罗格列酮的干预作用。方法采用不同浓度TNF-α(5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml)处理3T3-L1脂肪细胞48h、采用20μg/ml TNF-α处理不同时间(6h、12h、24h、48h)及罗格列酮(10μmol/ml)预处理6h的3T3-L1脂肪细胞与20μg/mlTNF-α作用48h;以2-DG摄入法检测细胞对葡萄糖的摄取率。结果与对照组比较,5μg/L、10μg/L和20μg/LTNF-α作用各组分别使葡萄糖摄取率减少了25%(P<0.01)、43%(P<0.01)、58%(P<0.01);20μg/L TNF-α处理3T3-L1脂肪细胞6h、12h、24h、48h使葡萄糖的摄取率分别减少10%(P<0.05)、28%(P<0.01)、40%(P<0.01)、57%(P<0.01),罗格列酮预处理能使20μg/ml TNF-α组脂肪细胞对葡萄糖的摄取率增加37%(P<0.01)。结论TNF-α以浓度和剂量依赖方式导致脂肪细胞胰岛素抵抗;罗格列酮能明显改善此作用。     

ALA联合HPD光动力学治疗对C6胶质瘤细胞影响的研究

目的通过细胞学水平研究确定ALA配合小剂量HPD激光光动力疗法促使肿细胞凋亡及死亡的光敏药用药剂量及与两者单独使用的差别.方法以不同剂量的ALA(20μg/ml、40μg/ml、60μg/ ml、80μg/ ml、160μg/ ml)、HPD(1μg/ml、2μg/ml、3μg/ml、4μg/ml、5μg/ml)、两者联合与C6胶质瘤瘤细胞一起培养,随后以630nm半导体激光200mW/cm2,照射肿瘤细胞,照射20分钟,及与不用光敏剂单照激光、单用光敏剂不照光、不用光敏剂不照激光空白对照组比较.以流式细胞仪及倒置显微镜、电镜观察促使肿瘤细胞凋亡或死亡的差别,寻找促使肿瘤细胞凋亡或死亡的最小合适剂量.结果ALA40μg/ml配合HPD2.5μg/ml与C6胶质瘤细胞同时培养,630半导体激光200mW/cm2,照射20分钟组从倒置显微镜及电镜形态学观察及流式细胞仪测定是能达到较佳的细胞凋亡的最小光敏剂剂量.单纯ALA-PDT组中能达到小鼠C6胶质瘤细胞明显凋亡的最小剂量是ALA(80μg/ml),单纯HPD-PDT组中能达到小鼠C6胶质瘤细胞明显凋亡最小剂量是HPD(5μg/ml).结论ALA40mg/kg配合HPD2.5mg/kg,630半导体激光200mW/cm2,照射20分钟是能达到小鼠C6胶质瘤细胞明显凋亡的最小光敏剂剂量.     

一种用于暗场电镜术的超薄碳膜制备方法

高分辨透射电镜术观察单个重原子和未染色生物分子,一个重要问题是底质的背景噪音。利用超薄(20—30A)碳膜做支持物和暗场电子显微术成象较好地解决了这个问题。近年来利用这种技术研究核酸、蛋白质等生物分子.获得了许多新的结构信息。一些作者应用间接蒸发碳到新劈开的云母片,制备较均匀和颗粒性小的超薄碳膜(1、2)。本文介绍了一种简易高效制备超薄碳膜的装置和方法。     

ALA联合HPD光动力学治疗对C6胶质瘤细胞细胞内钙离子变化的研究

目的:研究ALA、HPD及ALA联合HPD光动力学治疗对C6胶质瘤细胞细胞内钙离子变化,方法:以不同剂量ALA(20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml、80μg/ml、160μg/ml)、HPD(1μg/ml、2μg/ml、3pg/ml、4μg/ml、5μg/ml)及不同剂量组合ALA联合HPD光动力学治疗C6胶质瘤细胞,应用Fluo-3AM为细胞内钙离子荧光指示剂,以激光共聚焦显微镜测定对照组及光动力学组照光后培养24小时活细胞细胞内钙离子含量,及测定单激光及对照组、光动力学治疗组照光前36秒及照光20分钟至停照光后20-100分钟细胞内钙离子浓度的动态变化,每12秒测定一次.结果:空白对照组、单激光、单加光敏剂组活C6胶质瘤细胞显示钙离子荧光值,在120分钟内变化较小.而光动力学治疗组,初照光5-15分钟内荧光明显慢慢增强,以后就逐渐下降,光敏药剂量大的初5-10分钟内荧光亮度上升很快,以后下降也快,可下降为0,剂量越大变化越明显,且光敏剂ALA较HPD更明显.二光敏剂联合组以上反应更明显,HPDl-2μg/ml联合ALA40-60μg/ml与HPD 5μg/ml组动态图相似.结论:通过本实验可推测光动力学作用后细胞内钙离子超载可能在细胞凋亡及死亡中发挥重要作用.二光敏剂联合可提高疗效,降低HPD光敏剂用量,减少皮肤光毒付反应,HPDl-2μg/ml联合ALA40-60μg/ml是较合适的剂量.     

ALA联合HPD光动力学治疗C6胶质瘤细胞基因P16及P53变化的研究

目的研究ALA、HPD及ALA联合HPD光动力学治疗C6胶质瘤细胞瘤基因P16及P53变化.方法以不同剂量ALA(20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml、80μg/ml、160μg/ml)、HPD(1μg/ml、2μg/ml、3μg/ml、4μg/ml、5μg/ml)及不同剂量组合ALA联合HPD光动力学治疗C6胶质瘤细胞,以流式细胞仪测试基因P16及基因P53的变化.结果本实验中未作PDT治疗的对照组,肿瘤细胞生长良好,可见P16值小于6.59%.P53值小于4%.而PDT治疗组随着光敏剂剂量的加大P16及P53基因值逐渐上升,是未作PDT治疗组的3-4倍,且两光敏剂混合组,P16及P53基因值大于单纯ALA或HPD-PDT治疗组.HPD1μg/ml联合ALA60μg/ml,HPD2μg/ml联合ALA40μg/ml就能达到HPD5μg/ml PDT治疗组P16基因及P53基因水平.结论推测PDT疗法激活了P16基因及p53基因功能,促使肿瘤细胞凋亡及坏死.联合疗法HPD1μg/ml联合ALA60μg/ml,HPD2μg/ml联合ALA40μg/ml光动力学治疗能达到HPD常规剂量5μg/ml PDT的效果,这样可明显提高ALA-PDT疗效及减少HPD-PDT的皮肤光毒反应.     

激光光敏剂血卟啉衍生物杨州光卟啉作用于癌细胞疗效原理的超微结构研究

以国产血卟啉衍生物—扬州光卟啉为光敏剂,研究它对离体培养的人宫颈鳞状上皮癌细胞克隆(CC—801)的激光光敏的早期效应。实验组分别以8μg/ml及16μg/ml两种不同剂量的扬州光卟啉作用于培养细胞,经不同的光照时间及持续不同的作用时间后立即固定取材,进行透射电镜与扫描电镜的观察,发现给药16μg/ml后光照两分钟细胞内线粒体基质即出现灶性空化,扫描电镜下发现,细胞体积肿大。光照5分钟后,细胞核基质开始有轻度凝聚现象,细胞质膜绒毛突起肿胀,随着作用时间的延长,上述损伤愈加严重,绒毛肿胀呈泡状,继而脱落,细胞裂解8μg/ml     

ALA联合HPD光动力学治疗鼠S180肉瘤研究

目的通过鼠肿瘤动物模型确定ALA配合小剂量HPD激光光动力疗法促使肿细胞死亡及凋亡的疗效及光敏药物最佳用药剂量。方法以不同剂量的ALA口服(20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml)、HPD2.5μg/ml静脉注射、24小时后,以630nm半导体激光250mW/cm2照射,每光斑照射20分钟剂量,照光前及照光后不同时间以肉眼、肿瘤大小测定、病理、电镜、流式细胞仪观察单纯ALA-PDT、HPD-PDT、二者配合的疗效差别并与未作光动力学治疗的空白对照组模型作比较,寻找最佳的光敏药物配合的剂量。结果ALA20-40μg/ml口服配合HPD2.5μg/ml静脉注射作半导体630nm激光250mW/cm2照射20分钟组光动力学治疗组,从形态学观察,肿瘤大小测定、病理、电镜、流式细胞仪观察是能达到较佳的肿瘤坏死变性、细胞凋亡、肿瘤消失的最小用光敏剂剂量。结论ALA20-40mg/kg配合HPD2.5mg/kg,630半导体激光250mW/cm2,照射20分钟是能到小鼠S180肉瘤肿瘤模型光动力学治疗最佳疗效的最小光敏剂剂量。     

应用原子力显微镜对不同种属I型胶原纤维微观结构的研究

目的：利用原子力显微镜(AFM)对猪和牛的I型胶原蛋白在溶液中的聚集行为进行微观结构的形态学研究。方法：将I型胶原蛋白溶液，滴至新鲜剥离的云母片上，空气中干燥后，用原子力显微镜观察。结果：发现来自猪和牛的I型胶原蛋白在浓度为32μg／ml时以单体形式和聚集体形式混合存在，在浓度为4mg／ml时两种I型胶原蛋白自发装配成胶原纤维，形成多孔网状结构，孔隙大小为：牛，100～150nm；猪，170～200hm。孔隙率：牛，575个／μm2；猪，193个／btm。。平均粗糙度为：牛，3．1nm；猪，8．7nm。均方根粗糙度为：牛，4．0nm；猪，11．4nm。平均高度：牛，50．9nm；猪，52．3nm。Rp—v：牛，72．1nm；猪，102．7nm。结论：利用原子力显微镜能够准确直观地观察到I型胶原蛋白形成的胶原纤维的种属差异性，AFM技术是一种理想的胶原纤维微观结构的表征方法。     

重组人骨形态发生蛋白9和2体外诱导成骨的活性分析

利用PCR扩增hBMP-9全长序列构建真核表达载体pcDNA4／HisMax—BMP-9,与质粒pSV2-dhfr共转染CHO—dhfr-细胞,以含有100μg／ml博来霉素的1MDM进行选择性培养,筛选抗性克隆,并用MTX扩增,提高rhBMP-9的表达量。经过细胞分离培养,得到稳定表达rhBMP-9的6株单克隆细胞株,ELISA法检测rhBMP-9表达水平,最高可达1．13μg/24h／10^6cells。收集最高表达蛋白的单克隆株培养基上清,经His标签的蛋白纯化柱纯化,冻干法浓缩得到100μm/ml的rhBMP-9。用浓度100μg／ml的rhBMP-9和rhBMP-2分别刺激培养C3H10,各项成骨指标显示rhBMP-9具有-定的体外诱导成骨能力,但不及rhBMP-2。     

普鲁卡因对光动力作用的影响

目的:1)体外观察光敏剂CPD5对人胰癌细胞(Hs766T)的光动力效果;2)观察普鲁卡因对CPD5光动力作用的影响.方法:浓度为1×105/ml的胰癌细胞,加到96孔培养板中,每孔100 μl,然后再加入不同浓度的CPD5,培养24 h弃旧液,更换新鲜培养液.普鲁卡因组加普鲁卡因,CPD5光动力对照组加生理盐水.670 nm半导体激光器,光剂量10 J/cm2,逐孔照射3 min.继续培养24 h后,用细胞排染试验测细胞存活率.结果:1)CPD5浓度为2.5μg/ml时,PDT后胰癌细胞存活率为2.0%;2)加入普鲁卡因(20 μg/ml)后,CPD5(浓度为2.5μg/ml)光动力效果是胰癌细胞存活率97.0%.结论:普鲁卡因可明显地淬灭CPD5光动力作用.     

不同浓度的碘化丙啶染色对细胞周期分布的影响

研究不同浓度的碘化丙啶(PI)染色对细胞周期分布的影响。293T细胞经0、2、4、6Gy的X射线照射后,用浓度分别为5、10、20、50μg/ml 的PI染色后,流式细胞仪检测细胞周期的分布情况。0、2、4、6 Gy时,不同浓度PI染色时G1/G0期的比例变化如下：(35.90±0.17)至(37.65±0.42),(18.05±0.40)至(19.08±2.01),(4.24±1.31)至(5.89±1.08),(2.88±0.16)至(4.04±1.06),G2/M 期的比例变化如下：(13.36±0.36)至(15.39±0.33),(54.56±0.34)至(58.98±1.46),(83.92±4.50)至(84.80±1.43),(92.29±1.56)至(92.89±1.49);S期的比例变化如下：(45.63±0.97)至(49.74±0.16),(22.45±0.35)至(27.04±0.36),(10.05±0.79)至(11.29±0.11),(3.71±1.06)至(4.99±1.01)。在同一照射剂量下,不管是G1/G0期、S期还是G2/M期,不同浓度PI染色对细胞周期分布没有明显差异( P>0.05);但不管5、10、20μg/ml还是50μg/ml 的PI染色,随着照射剂量的增加,G2/M期细胞比例明显增加(P<0.01)。随着照射剂量的增加,G2/M期细胞比例明显增加;但对于同一照射剂量,不同浓度PI染色对细胞周期分布没有明显差异,做周期分布实验时选择5μg/ml的PI染色即可。     

利用激光光源制作四分之一波片的工艺和测量方法

在以往的一些文献中曾叙述了λ/4波片的制作方法,由于选用了发散光源做参考光源,所以限制了精确制作和测量λ/4片的准确性,我们用激光作为光源制作出了较高精度的λ/4片。 一、λ/4片的制作和测量 我们是选用云母片作为制作λ/4片的原料,因为云母片比较容易剖开到所需要的厚度。先把市场上采购来的大小不一的云母片,用锐利的剪刀剪成大小一致的长方形片(约50×40),然后,用清洁的针头从云母片的边缘伸进去,留出一条缝,加入几滴酒     

35 V47 μF固体钽电容器制备工艺的改进

研究了15 000μF·V/g钽粉在35 V 47μF固体钽电容器上的应用,研究了压制密度和烧结温度对产品电性能的影响,并改进被膜工艺,研究了在硝酸锰溶液中添加硝酸铵对产品电性能的影响.实验结果表明15030μFV/g钽粉的最佳压制密度为5.8 g/cm3,最佳烧结温度为1660 ℃,制备的钽阳极块比容为13500 μFV/g,产品的漏电流系数为3.5×10-4μA/μF·V,tanδ为3.5%,被膜过程中加入硝酸铵有效降低产品漏电流,提高了产品电性能的一致性.     

若丹明6G DN的细胞毒作用以及与氩离子激光的光灭生物效应

本实验发现对体外培养小鼠白血病P388,人胃腺癌(SGC-7901),人舌麟癌(Tca8113),KB和HeLa细胞均有明显细胞毒作用。Rh6G DN能明显抑制试管内P388细胞的克隆形成,当细胞与0.1、1和10μg/ml Rh6G DN培育1小时的克隆形成率为对照组的38.5±6.7,17.3±2.4和0.43±0.7%。培育4小时时,1和10μg/ml剂量组已无克隆形成。以平板克隆效应为指标,发现Rh6G DN对恶性细胞有较强的选择性。用小剂量Rh6G DN与细胞温     

一种选择性检测4-氟苯酚浓度的光纤倏逝波传感器

为了实现对水体中4-氟苯酚(4-FP)选择性检测,利用塑料光纤、4-FP分子印迹聚合物、壳聚糖构建了4-FP高选择性敏感的D形塑料光纤倏逝波传感器。首先制备了4-FP分子印迹聚合物溶胶及D形光纤,并将分子印迹聚合物溶胶涂覆在D形塑料光纤传感器敏感区表面。然后建立了传感器测量理论模型。最后实验研究了4-FP分子印迹聚合物涂覆厚度对传感器灵敏度的影响,以及传感器的响应时间、检测下限及选择敏感性。研究表明：传感器对4-FP具有高选择敏感性;当聚合物膜厚度约为20μm时,传感器灵敏度达到-0.000 5 L/mg,检测下限达到180μg/L。