染料木黄酮对光老化成纤维细胞增殖作用的影响

目的探讨染料木黄酮对光老化成纤维细胞增殖作用的影响。方法经酶消化法分离培养真皮成纤维细胞,并进行细胞传代,免疫细胞化学鉴定细胞。实验分为3组:正常细胞对照组:未经处理的真皮成纤维细胞;8-甲氧补骨脂素(8-methoxypsoralan,8-MOP)/长波紫外线(ultraviolet A,UVA)对照组:用含50 ng/ml 8-MOP的培养基避光孵育细胞24 h,再以9 J/cm2UVA照射;8-MOP/UVA+染料木黄酮(0、1.25、2.5、5、10、20μg/ml)组:用含50 ng/ml8-MOP及各浓度染料木黄酮的培养基共同孵育细胞24 h,再以9 J/cm2UVA照射24 h。MTT法检测各组细胞增殖活力,流式细胞术检测各组细胞细胞周期,光镜下观察各组细胞分裂和分裂后表型,实时荧光定量PCR法检测各组细胞中基质金属蛋白酶-1、3水平。结果皮肤成纤维细胞阳性率达99%以上;8-MOP/UVA+染料木黄酮1.25、2.5μg/ml组细胞增殖率分别为8-MOP/UVA对照组的112.6%(P0.05)和146.6%(P0.05),染料木黄酮的光保护作用随浓度的升高而增强,然而随着浓度的继续升高,细胞增值率逐渐降低,当浓度达20μg/ml时,细胞增殖率仅为8-MOP/UVA对照组的19.4%(P0.01),选择染料木黄酮的最佳保护浓度为2.5μg/ml;8-MOP/UVA对照组细胞细胞周期阻滞于S期,而8-MOP/UVA+染料木黄酮2.5μg/ml组细胞细胞周期则由S期进入G2/M期;正常细胞对照组、8-MOP/UVA组及8-MOP/UVA+染料木黄酮2.5μg/ml组分裂细胞表型占总细胞数目的比率分别为(99.7±0.58)%、(7.7±1.15)%、(57.7±3.51)%,各组间差异有统计学意义(P0.01);8-MOP/UVA+染料木黄酮2.5μg/ml组细胞基质金属蛋白酶-1、3水平均明显低于8-MOP/UVA对照组,而高于正常细胞对照组,各组间差异均有统计学意义(P0.05)。结论染料木黄酮可在一定程度上解除8-MOP/UVA所致光老化成纤维细胞的生长抑制作用。     

用无血清适应的Vero细胞培养H5N1型流感病毒条件的优化

目的优化无血清适应的Vero细胞(SFM-Vero细胞)培养H5N1型流感病毒的条件。方法将H5N1型流感病毒接种于SFM-Vero细胞,于免疫荧光显微镜下观察病毒感染情况。对病毒无血清培养条件MOI(0.05、0.10、0.15、0.20)、细胞培养时间(12、24、36、48 h)、培养液基础培养基(DMEM/F12、M199、RPMI1640及MEM:DMEM/F12混合液)、培养温度(33、33.5、34、34.5、35和37℃)、收获时间(24、36、48、60和72 h)、培养液p H值(6.8、7.1、7.4、7.7、8.0和8.3)和TPCK胰酶浓度(0.5、1.0、1.5μg/ml)进行优化,并检测最佳条件无血清培养的H5N1型流感病毒的血凝效价及形态。结果 H5N1型流感病毒对SFM-Vero细胞具有感染性。最佳无血清培养条件为:MOI=0.1和0.15,细胞培养时间36 h,以DMEM/F12为基础培养基,病毒培养温度33.5和34.5℃,病毒收获时间60 h,培养液p H 7.7,TPCK胰酶浓度为1.0μg/ml。最佳条件无血清培养的H5N1型流感病毒的血凝效价为1∶512,电镜下观察病毒形态完整。结论确定了H5N1型流感病毒对SFM-Vero细胞具有感染性,并优化了SFMVero细胞培养流感病毒的适宜条件,为更具有生物安全性流感疫苗的研发奠定了基础。     

金雀异黄酮对脂多糖处理的软骨细胞增殖抑制的拮抗及抗炎作用

目的观察金雀异黄酮(Genistein,GEN)对脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)处理的软骨细胞增殖抑制的拮抗及抗炎作用。方法体外培养新西兰兔关节软骨细胞,将细胞分为正常对照组、LPS单独处理组(10μg/ml)及LPS(10μg/ml)+不同剂量GEN(1、5、10、15μg/ml)处理组,采用MTT法检测各组细胞的增殖活性,RT-PCR法检测各组细胞相关炎性因子IL-1β、诱导型一氧化氮合酶iNOS、转录调节因子p53基因mRNA的表达。结果剂量为1μg/ml的GEN能拮抗软骨细胞经LPS处理后引起的增殖活性降低,且能抑制经LPS处理后软骨细胞IL-1β、iNOS、p53基因mRNA的表达。结论 GEN对LPS处理的软骨细胞可能具有拮抗其增殖抑制及抗炎的作用。     

脂多糖诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞的活化凋亡作用

目的探讨脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞活化凋亡的作用。方法体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,分别用0.5、1.0、2.5μg/mlLPS刺激RAW264.7细胞24h,一氧化氮(NO)试剂盒检测细胞培养上清中NO水平;用1.0μg/mlLPS分别刺激细胞3d和6d,台盼蓝拒染法检测细胞增殖情况;用1.0μg/mlLPS刺激细胞6d,流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡情况。结果经LPS刺激后24h,RAW264.7细胞培养上清中NO含量明显增加,且具有剂量依赖性;LPS刺激3d和6d后,细胞的增殖均受到抑制,且呈时间依赖性;LPS刺激6d时,细胞周期被阻滞在S期,并出现明显的凋亡。结论LPS具有诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞活化凋亡的作用。     

Vero细胞培养轮状病毒关键条件的优化

目的优化轮状病毒基因重配株(UD株)在Vero细胞上培养的关键条件。方法将轮状病毒基因重配株(UD株)分别以0.01、0.03、0.05和0.10 MOI接种Vero细胞,分别于接种病毒后6、12、24、36、48、72、84、96、108、120 h取样,观察细胞病变(CPE)情况,计算半数感染剂量(CCID50/ml)。以0.05 MOI接种Vero细胞,分别加入含1、2、3、5、8和10μg/ml胰蛋白酶的M199培养液,于接种病毒后12~48 h,观察CPE情况,检测病毒滴度。结果以0.05 MOI接种Vero细胞后,维持液中胰蛋白酶浓度为5μg/ml,培养时间为48 h时,滴度达到最高,为6.5 lgCCID50/ml,且对Vero细胞的分裂增殖无不良影响。结论通过对Vero细胞培养轮状病毒关键条件的优化,获得了提高病毒滴度的有效方法,为使用Vero细胞培养轮状病毒制备轮状病毒减毒活疫苗奠定了基础。     

水溶性富勒烯对人皮肤成纤维细胞活性的影响

为探讨水溶性富勒烯对人皮肤成纤维细胞的毒性,将人皮肤成纤维细胞与不同浓度水溶性富勒烯共孵育不同时间后,采用MTS法对人皮肤成纤维细胞的活性进行检测。结果表明,富勒烯浓度为7.5μg·mL~(-1)且共孵育时间在48 h以内时,富勒烯对人皮肤成纤维细胞产生微小的毒性;若浓度大于7.5μg·mL~(-1)或共孵育时间超过48 h,富勒烯对人皮肤成纤维细胞有较明显的毒性。因此,开发基于水溶性富勒烯产品时,应考虑一定条件下富勒烯材料可能存在的细胞毒性问题,当富勒烯材料与皮肤接触时,建议控制富勒烯材料的浓度在7.5μg·mL~(-1)以下,同时与人体皮肤的接触时间控制在48 h内为宜。     

新型杀螨剂嘧螨酯对柑橘红蜘蛛的生物活性

测定了新型杀螨剂嘧螨酯对柑橘红蜘蛛雌成螨和卵的毒杀活性，结果表明，处理后24h，嘧螨酯原药与30％嘧螨酯胶悬剂对雌成螨的LC50值分别为4．67μg／ml和5．68μg／ml，处理后48h，分别为1．50μg／ml和1.97μg／ml；处理后第10d，对卵的LC50值分别为1．561μg／ml和1．58μg／ml。30％嘧螨酯胶悬剂对柑橘红蜘蛛具有优异的防效。     

丹皮酚对人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响及其可能的机制

目的探讨丹皮酚对人卵巢癌SKOV3细胞的促凋亡作用及其可能的机制。方法用25、50、100、200、400μg/ml丹皮酚处理SKOV3细胞,设未经丹皮酚处理的细胞为对照组,24 h后,采用MTT法检测细胞增殖情况;用50、100、200μg/ml丹皮酚处理SKOV3细胞,设未经丹皮酚处理的细胞为对照组,24 h后,采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)、Hoechst染色法检测细胞凋亡情况,Western blot法检测caspase3及survivin蛋白的表达情况。结果与对照组相比,各浓度丹皮酚对SKOV3细胞的增殖均有明显的抑制作用,呈浓度依赖性(P<0.05),IC50值为200.06μg/ml;100、200μg/ml浓度组中SKOV3细胞凋亡率分别为(35.33±1.32)%、(39.56±1.27)%,与对照组[(9.01±1.21)%]相比明显增加(P<0.05);丹皮酚100、200μg/ml浓度组中发生凋亡的细胞数量较对照组多;丹皮酚处理后细胞凋亡相关蛋白survivin表达降低,而caspase3表达增加,高浓度组与低浓度组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论丹皮酚能显著抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与其调控凋亡相关蛋白survivin、caspase3表达变化有关。     

甲型流感病毒在贴壁MDCK细胞上增殖条件的优化

目的确定甲型流感病毒在贴壁MDCK细胞上最佳增殖条件。方法将3株甲型流感病毒(H1N1 NYMC X-181、H1N1 NYMC X-275和H3N2 NYMC X-263B)在贴壁MDCK细胞上进行传代培养,以其血凝效价和半数细胞感染剂量(median cell culture infective dose,CCID50)为检测指标,分别对其增殖条件胰酶浓度(0.5、1.25、2.5、3.5和4.5μg/m L)、MOI(0.000 1、0.001、0.01、0.1、1)、培养温度(33、34、35、36、37℃)、吸附时间(0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h)、培养时间(24、48、72、96、120 h)进行优化。结果 H1N1 NYMC X-181、H1N1 NYMC X-275和H3N2 NYMC X-263B 3株流感病毒在贴壁MDCK细胞上增殖的最适胰酶浓度分别为2.5、1.25、1.25μg/m L;最适MOI值均为0.01;最适培养温度均为34℃;最适吸附时间分别为1.5～2.0、1.5、1.5 h;最适培养时间均为72 h。结论确定了3株甲型流感病毒在贴壁MDCK细胞上的增殖条件,为后续相关疫苗的研发工作奠定了基础。     

熊果酸对血管内皮细胞增殖的影响及其机制

目的研究熊果酸(Ursolic acid,UA)对人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖及ERK1、c-Jun、c-Myc、Cyclin D1基因mRNA和蛋白表达的影响,探讨熊果酸抑制血管生长的机制。方法体外培养HU-VECs,用不同浓度熊果酸(31.5、62.5、125、250、500μg/ml)处理不同时间(12、24、48 h),MTT法检测细胞增殖抑制率。用125μg/ml熊果酸和100μmol/L PD98059(ERK抑制剂)处理HUVECs 48 h;不同浓度熊果酸处理24 h;125μg/ml熊果酸处理不同时间,RT-PCR和Western blot分别检测HUVECs中ERK1、c-Jun、c-Myc、Cyclin D1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平。结果不同浓度的熊果酸对HUVECs的增殖均有明显的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;经熊果酸和PD98059处理的HUVECs中ERK1、c-Jun、c-Myc、Cyclin D1基因mRNA和蛋白的表达水平均明显降低,且呈剂量和时间依赖性。结论熊果酸可通过抑制ERK信号转导通路而抑制血管内皮细胞增殖。     

人中性粒细胞载脂蛋白快速定量ELISA检测方法的建立

目的建立人中性粒细胞载脂蛋白(HNL)快速定量ELISA检测方法,并进行验证及初步应用。方法以兔抗人HNL多克隆抗体为包被抗体,HRP标记的HNL单克隆抗体为检测抗体,采用双抗体夹心模式,建立快速、一步定量检测HNL的ELISA方法,并进行验证及初步应用。结果最佳包被抗体工作浓度为1μg/ml,检测抗体的最佳稀释度为1∶1000,标准品浓度在0.1～10μg/L范围内呈良好的线性关系,相关系数r>0.98。经验证,该方法的灵敏度可达0.103μg/L;检测7.2、3.6和0.9μg/L浓度的HNL标准品,试验内变异系数分别为5.6%、6.8%和9.8%,试验间变异系数分别为5.7%、6.9%和10.5%;不同浓度的平均回收率为102.04%;抑制试验表明特异性较强;健全性分析表明,样品稀释倍数对该方法无影响;8d连续检测表明稳定性良好。用建立的方法检测30份健康成人血清的HNL含量为(90.73±30.12)μg/L。结论已建立了HNL快速定量ELISA检测方法,该方法简便、快速、稳定,适合临床常规检测。     

疫苗制品中Vero细胞残余蛋白含量检测方法的建立

目的建立疫苗制品中Vero细胞残余蛋白含量检测方法。方法制备Vero细胞蛋白抗原参考品,免疫家兔,提纯抗体作为包被抗体并以酶标记,建立酶联免疫检测系统。用Vero细胞蛋白抗原参考品绘制定量标准曲线,并对各项指标进行验证。结果提纯后抗体纯度达90%以上,抗体效价为1∶64,Westernblot分析显示,提纯抗体与Vero细胞蛋白抗原参考品中绝大部分蛋白成分均能特异性结合。确定最佳抗体包被浓度为10μg/ml,酶标抗体的工作浓度为1∶1000。Vero细胞蛋白抗原参考品定量范围为12.5～800.0ng/ml时,线性关系良好,r=0.997,该方法特异性、精密度及准确度良好。将试剂于4、25和37℃分别放置3周,检测同一定量参考品和样品中Vero细胞蛋白抗原含量,差异无显著意义。结论已建立了用ELISA检测疫苗制品中Vero细胞残余蛋白含量的方法。     

Magnetic CoPt nanoparticles as MRI contrast agent for transplanted neural stem cells detection

Neural stem cells (NSCs) exhibit features that make them suitable candidates for stem cell replacement therapy and spinal cord reconstruction. Magnetic resonance imaging (MRI) offers the potential to track cells in vivo using innovative approaches to cell labeling and image acquisition. In this study, experiments were carried out to optimize the loading condition of magnetic CoPt hollow nanoparticles (CoPt NPs) into neural stem cells and to define appropriate MRI parameters. Both cell viability and multipotency analysis showed that CoPt NPs at a concentration of 16 μg ml(-1) reduced T2 relaxation times in labeled rat NSCs, producing greater contrast on spin echo acquisitions at 4.7 T, yet did not affect cell viability and in vitro differentiation potential compared to controls. After optimizing nanoparticle loading concentrations and labeled cell numbers for MRI detection, CoPt-loaded NSCs were transplanted into organotypic spinal cord slices. The results showed that MRI could efficiently detect low numbers of CoPt-labeled NSCs with the enhanced image contrast. Our study demonstrated that MRI of grafted NSCs labeled with CoPt NPs is a useful tool to evaluate organotypic spinal cord slice models and has potential applications in other biological systems.     

人参皂苷Rh2诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的研究人参皂苷Rh2(G-Rh2)对人胃癌细胞SGC-7901的影响。方法采用MTT法检测G-Rh2对SGC-7901细胞存活率的影响;流式细胞分析法检测凋亡小体的含量;免疫印迹技术及体外Caspase-3/-7活力测定方法检测Caspase的激活状态。结果G-Rh2对SGC-7901细胞生长有明显的抑制作用,且呈量-效关系,IC50为9.3μg/ml。7.5μg/mlG-Rh2作用SGC-7901细胞24h,凋亡细胞数量为6.97%。7.5μg/mlG-Rh2作用SGC-7901细胞20h,出现多聚(ADP-核糖)聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]断裂,Caspase-3/-7活力开始出现,并随作用时间的延长而增强。结论G-Rh2诱导Caspase参与SGC-7901细胞凋亡。     

A polyphenolic biomacromolecule prepared from a flavonoid: Catechin as degradable microparticles

Catechin (CAT) was crosslinked with trimethylolpropane triglycidyl ether (TMPTGE) to obtain degradable poly(CAT) particles in a single step. Spherical p(CAT) particles with tens of micrometer size range and an isoelectronic point at pH 1.2 were obtained. The hydrolytic degradation of p(CAT) particles provided sustainable and extended release with 264 mg/g CAT release within 10 days at pH 7.4. The antioxidant capacity of 55.0 ± 0.9 μg/ml gallic acid equivalent in terms of total phenol content, and 0.88 ± 0.3 μmol/g trolox equivalent were estimated for p(CAT) particles displaying strong radical scavenging capability. Blood clotting and hemolysis assays demonstrated dose-dependent blood compatibility revealing higher blood compatibility for p(CAT) particles up to 10 μg/ml concentration. The cytotoxicity results show that p(CAT) particles have almost no toxicity for CCD841 normal colon cells at 250 μg/ml concentration in 24 h incubation time giving ~97% cell viability, whereas CAT molecules only provide ~34% cell viability.     

CHO宿主细胞DNA残留量检测方法的建立

目的建立检测生物制品中CHO宿主细胞DNA残留量的方法,制备检测CHO细胞DNA残留量的内部参考品,为国家相关标准的制定和修订提供依据。方法分别采用酚:氯仿:异戊醇抽提、DNA提取试剂盒和高盐抽提3种方法提取CHO细胞DNA,比较3种方法的提取效果;用地高辛标记最佳方法提取的CHO细胞DNA探针,并优化标记体系,直接法检测探针的标记效率;采用3种方法处理CHO细胞DNA内部参考品(1组不作处理;2组加入牛血清白蛋白和蛋白酶K;3组按2组方法处理后,增加DNA抽提步骤),通过点杂交法,用标记的探针检测上述样品的灵敏度。结果高盐抽提法提取的CHO细胞DNA效果较好;体系4(DNA10μg,Vial416μl,总体积64μl)标记效率最高;经不同方法处理的1、2、3组CHO细胞DNA内部参考品的检测灵敏度分别为1pg、10pg和1ng。结论建立的地高辛标记CHO细胞DNA探针-点杂交检测CHO细胞DNA残留量的方法稳定可靠,可用于生物制品中CHO宿主细胞DNA残留量的检测。     

重组人角质化细胞生长因子-2发酵条件的优化及其活性

目的优化重组人角质化细胞生长因子-2(Recombinant human keratinocyte growth factor-2,rhKGF-2)基因工程菌的发酵条件,并对rhKGF-2进行纯化及活性检测。方法优化rhKGF-2基因工程菌接种量、装液量、培养基初始pH值、IPTG浓度、诱导时机和诱导时间等发酵条件;rhKGF-2经离子交换层析和肝素亲和层析后,采用MTT法检测其对NIH-3T3细胞增殖的影响。结果 rhKGF-2基因工程菌的最佳发酵条件为:接种量2.0%,装液量50ml/250ml三角瓶,培养基初始pH值6.5～7.0,IPTG浓度0.10mmol/L,菌体处于对数生长初期时(A600=0.8～1.0)开始诱导,诱导时间4h;纯化的rhKGF-2经HPLC检测纯度达95.0%以上;在1～100μg/ml浓度范围内,rhKGF-2对NIH-3T3细胞的增殖具有促进作用。结论优化了rhKGF-2基因工程菌的发酵条件,获得了纯度较高、具有活性的rhKGF-2蛋白,为其工业化生产奠定了基础。     

白藜芦醇体外诱导大鼠骨髓基质细胞向神经元样细胞的分化

目的研究白藜芦醇体外诱导大鼠骨髓基质细胞(Marrow stroma cells,MSCs)向神经元样细胞的分化。方法采用全骨髓贴壁法分离培养MSCs,取第3代MSCs分为白藜芦醇诱导组、对照组和正常组,白藜芦醇诱导组先加入预诱导液(含10μg/L bFGF的DMEM/F12培养基)培养24 h,再更换诱导液(含15μmol/L白藜芦醇的DMEM/F12培养基)诱导6 h,然后更换维持液(含15μmol/L白藜芦醇,10μg/L bFGF,2%B27的DMEM/F12培养基),继续培养至72 h;对照组预诱导与白藜芦醇诱导组相同,诱导时仅加入DMEM/F12培养基诱导6 h,再更换维持液(含10μg/L bFGF,2%B27的DMEM/F12培养基),继续培养至72 h,倒置显微镜下观察诱导分化后MSCs形态;各组分别于诱导前及诱导后2、6、24、72 h采用间接免疫荧光法、Western blot法和RT-PCR法检测nestin、NSE蛋白及mRNA表达。结果白藜芦醇诱导后细胞胞体收缩,伸出长突起,类似神经元,间接免疫荧光染色显示诱导后细胞nestin和NSE阳性,对照组未见阳性细胞。白藜芦醇诱导组nestin、NSE蛋白及mRNA表达较对照组明显升高,诱导后2 h,nestin蛋白及mRNA表达达最高(P<0.01),之后逐渐下降;而NSE蛋白及mRNA表达逐渐升高,诱导后72 h达最高(P<0.01),对照组则无明显变化。结论白藜芦醇在体外可诱导大鼠骨髓基质细胞分化为神经元样细胞,为白藜芦醇在干细胞移植领域的应用提供了实验依据。     

增强ESAT6-CFP10融合蛋白诱导小鼠细胞免疫应答佐剂的筛选

目的筛选能增强特异性抗原早期分泌抗原靶6蛋白(Early secretory antigenic target 6,ESAT6)-培养滤出液蛋白-10(Culture filtrate protein 10,CFP-10)融合蛋白(E1C0)诱导小鼠细胞免疫应答的佐剂,建立基于细胞免疫应答的小鼠模型,以评价基于体外干扰素γ释放分析(IFNγrelease assay,IGRA)结核诊断方法中特异性刺激抗原E1C0的活性。方法建立小鼠IFNγ双抗体夹心SABC-ELISA检测系统,并验证系统的线性、灵敏度、重复性和特异性。将BALB/c小鼠随机分为7组:E1C0+单磷酸类脂A(Monophosphoryl lipid A,MPL)+双十八烷基二甲基溴化铵(Dimethyl dioctadecylammonium bromide,DDA)组、E1C0+DDA组、E1C0+MPL组、E1C0+弗氏不完全佐剂(IFA)组、E1C0组、生理盐水组和MPL+DDA联合组,每组6只,经小鼠后肢内侧皮下免疫3次,间隔2周,免疫剂量为:E1C0 100μg/只,MPL 25μg/只,DDA 250μg/只,IFA 100μl/只。末次免疫4周后处死小鼠,无菌取脾,分离脾淋巴细胞,加入E1C0进行培养,MTT法检测特异性淋巴细胞增殖反应,ELISA法检测培养上清中IFNγ水平。采用筛选出的最佳佐剂与抗原组合免疫3批BALB/c小鼠,进行IFNγ诱生测定。结果检测系统的线性范围为:40～2 560 pg/ml(R>0.98);灵敏度为40 pg/ml;变异系数(CV)<15%,检测大鼠、豚鼠和兔血清IFNγ均为阴性;E1C0+MPL+DDA组、E1C0+IFA组和E1C0+DDA组小鼠特异性淋巴细胞增殖刺激指数均明显高于生理盐水组(P<0.01);E1C0+MPL+DDA组小鼠的脾淋巴细胞经E1C0体外刺激后,产生的IFNγ水平明显高于其他组(P<0.001);重复试验结果显示,E1C0+MPL+DDA组3批小鼠免疫后,脾淋巴细胞诱生的IFNγ水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 E1C0与MPL和DDA联合免疫所诱导的小鼠Th1型细胞免疫应答最强,成功建立了用于评价刺激抗原E1C0活性的小鼠模型。     

植物乳杆菌凝集素的纯化及其体外抗HIV活性

目的纯化植物乳杆菌(L.plantarum PCL)凝集素,并检测其体外抗HIV活性。方法采用Sephadex G-25凝胶脱盐层析和HITrap Q Sepharose XL离子交换层析纯化L.plantarum PCL凝集素;测定纯化产物的兔红细胞凝集素活性、纯度及荧光光谱;采用MTT法检测其对C8166淋巴细胞的毒性作用,以光镜检查其对HIV-1ⅢB诱导C8166细胞形成合胞体的抑制作用,并计算TI值。结果纯化的L.plantarum PCL凝集素经尿素-SDS-PAGE,可见相对分子质量约85000的单一条带;荧光光谱可见在380nm附近有一个发射强度较大的凝集素特征荧光发射峰;L.plantarum PCL凝集素对C8166细胞的IC50为2.239μg/ml,对HIV-1ⅢB诱导C8166细胞合胞体形成的EC50为0.079μg/ml,TI值为28.34。结论已成功纯化了L.plantarum PCL凝集素,并具有抗HIV活性。