紫贻贝酶解产物抗菌活性及其工艺优化研究

以果蔬病原菌Botryiscinerea为供试菌,采用微孔板培养法,测定了胰蛋白酶、胃蛋白酶、风味蛋白酶和菠萝蛋白酶酶解产物对Botryiscinerea的抗菌活性,并采用正交试验对胰蛋白酶的酶解条件进行了优化。结果表明,胰蛋白酶酶解产物抑菌活性最强,其抑菌率分别比胃蛋白酶、风味蛋白酶和菠萝蛋白酶酶解产物高38.4%、19.5%和18.2%(P<0.01);胰蛋白酶获取最佳抑菌酶解产物的条件为:55℃、pH8.5、加酶量300U/g、酶解时间2h、料水比1∶1。     

鸡骨酶解物的抗氧化活性研究

分别选用复合风味蛋白酶、Protamex复合蛋白酶、Alcalase蛋白酶、胰酶、胰蛋白酶、AS.1398中性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解鸡骨泥,研究鸡骨酶解物(蛋白质含量3 mg/mL)对DPPH、羟自由基(OH·)的清除能力及其还原性.试验结果表明:Protamex复合蛋白酶酶解鸡骨产物的DPPH清除率最强,即81.44%;复合风味蛋白酶酶解物OH·清除率达30.32%,还原性测定的吸光值为0.3.总之,鸡骨酶解物的DPPH清除能力强于羟自由基清除能力和还原力.在研究不同浓度和水解度对鸡骨酶解物清除DPPH活性的影响时发现,随着酶解物蛋白质质量浓度的增大,酶解物的DPPH清除率升高.复合风味蛋白酶、Protamex复合蛋白酶的鸡骨酶解物蛋白质质量浓度分别为4、6mg/mL时,其DPPH清除率分别达91.49%、97.3%.但DPPH清除率与水解度不呈正相关性,只有在特定水解度下,使抗氧化肽含量最高时,水解物才表现出最强的抗氧化能力.例如复合风味蛋白酶、AS.1398中性蛋白酶、Protamex复合蛋白酶、胰酶的最佳水解度分别为12.59%、23.78%、14.45%、20.04%.     

贻贝蛋白的酶解及其酶解物的抗氧化活性研究

比较了6种不同的蛋白酶(胰蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、碱性蛋白酶)对贻贝粗蛋白的酶解效果,确定碱性蛋白酶为最适用酶。用此酶制备不同水解度(DH 6%、DH 11.5%、DH16%、DH 20%、DH 25%)的贻贝蛋白酶解物,考察不同DH酶解产物的抗氧化活性。试验结果表明:贻贝酶解产物具有较强的抗氧化活性,并呈一定的量效关系;当DH为25%时,贻贝酶解物对DPPH自由基、超氧自由基、羟基自由基的清除率最高,分别为77.4%、75.2%、43.4%,同时具有最强的金属螯合率(64.7%);而DH为16%时,酶解物对亚油酸的过氧化抑制作用较还原型谷胱甘肽强,达65.6%。DH对酶解产物的抗氧化活性有一定的影响,但在不同的抗氧化体系中,影响趋势不一致。     

银鲳酶解物抗氧化活性研究

选用胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶对银鲳蛋白进行酶解以制备蛋白酶解物,以羟基自由基清除活性为指标确定银鲳最佳水解酶。结果显示,碱性蛋白酶的水解物抗氧化活性最强。实验对碱性蛋白酶水解银鲳的酶解条件(时间、温度、pH、酶添加量和固液比)进行正交实验设计,并对最佳水解条件下所获得的酶解物进行抗氧化活性测试。结果表明,银鲳蛋白碱性蛋白酶水解物对DPPH自由基和羟基自由基具有清除作用,其自由基清除效果呈现剂量依赖性,而且银鲳蛋白水解物还具有明显还原能力。所有这些体外抗氧化数据说明,银鲳蛋白水解物有明显的抗氧化效力。      

银鲳酶解物抗氧化活性研究

选用胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶对银鲳蛋白进行酶解以制备蛋白酶解物,以羟基自由基清除活性为指标确定银鲳最佳水解酶。结果显示,碱性蛋白酶的水解物抗氧化活性最强。实验对碱性蛋白酶水解银鲳的酶解条件(时间、温度、pH、酶添加量和固液比)进行正交实验设计,并对最佳水解条件下所获得的酶解物进行抗氧化活性测试。结果表明,银鲳蛋白碱性蛋白酶水解物对DPPH自由基和羟基自由基具有清除作用,其自由基清除效果呈现剂量依赖性,而且银鲳蛋白水解物还具有明显还原能力。所有这些体外抗氧化数据说明,银鲳蛋白水解物有明显的抗氧化效力。     

鲬鱼肉酶解物抗氧化活性的研究

深度开发利用鲬鱼蛋白,以羟自由基清除率为指标,从碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶中,筛选出碱性蛋白酶为其水解酶。采用单因素试验及响应面分析法对碱性蛋白酶的水解条件进行优化,得到最佳酶解条件为:加酶量3 000 U/g蛋白、pH 9.0、温度40℃、时间180 min、固液比1∶30(g/mL),清除率为89.49%。酶解物清除羟自由基的IC_(50)值为0.58 mg/mL,表明鲬鱼酶解物是具有良好的抗氧化作用的天然抗氧化剂。     

斑鰶鱼蛋白控制酶解及其酶解物抗氧化活性研究

以斑鰶鱼(Clupanodom punchtatus)为原料,采用食品级的风味蛋白酶、复合蛋白酶、碱性蛋白酶、胰酶和木瓜蛋白酶酶解斑鰶鱼蛋白,制备具有DPPH自由基清除活性的富肽酶解物;对酶解物在化学反应体系和亚油酸氧化体系中的抗氧化活性进行综合评价。研究结果表明:碱性蛋白酶为斑鰶鱼蛋白制备抗氧化肽的最适酶,最优制备条件是:温度55℃,酶解时间5h,料水比1∶3,加酶量0.2%,pH 7.5,此时酶解物(蛋白质量浓度10 mg/mL)DPPH自由基清除率为89.54%;在化学反应体系中,酶解物的DPPH自由基清除能力、还原力和亚铁离子螯合力都随着蛋白质量浓度的增加而增强。在蛋白质量浓度为5 mg/mL的条件下,DPPH自由基清除率为78.26%;酶解物的还原力为0.372(低于抗坏血酸);亚铁离子螯合率为46.81%。在亚油酸氧化体系中,酶解物(蛋白质量浓度10 mg/mL)对亚油酸过氧化物的抑制率为59.61%。     

鲶鱼骨酶解物抗氧化活性及其稳定性研究

探讨鲶鱼骨酶解物体外抗氧化活性及其抗氧化稳定性。测定不同浓度酶解物对羟自由基(.OH)、H2O2和超氧阴离子自由基(O2-)的清除效果,观察其抗氧化活性及其剂量效应关系;将酶解物溶液进行不同pH、温度、微波以及紫外光照射处理,观察其抗氧化活性的变化。结果表明:在试验浓度下,酶解物对.OH、H2O2和O2-均有较强的清除能力,其清除作用随着酶解物浓度的增加而增强,清除作用的IC50分别为6.47、15.96、12.50 mg/mL;在pH2~9范围内、80℃~121℃加热条件下,以及20 min~120 min紫外线照射和0 min~5 min微波处理时,酶解物的总体抗氧化活性变化不大。鲶鱼骨酶解物具有较强的抗氧化作用且抗氧化活性基本稳定。     

东北林蛙卵蛋白酶解工艺及其酶解物的抗疲劳活性

研究复合蛋白酶对东北林蛙卵蛋白的酶解工艺及其酶解物的抗疲劳活性。分别考察pH值、加酶量、固液比、反应时间、反应温度对林蛙卵蛋白水解度的影响,并通过正交试验得到最佳酶解工艺条件：加酶量3000U/g pro、温度55℃、pH8.0、水解时间5h、固液比1:5.5(m/V)。以昆明小鼠为实验对象,通过测定小鼠的负重游泳时间、肝糖原及血乳酸含量,研究东北林蛙卵蛋白酶解物的抗疲劳活性,结果显示最佳优化条件下得到的林蛙卵蛋白酶解物具有较好的抗疲劳作用。     

溶菌酶活性的AFM研究

以溶壁微球菌为底物,用原子力显微镜(Atomic forcemicroscope,AFM)观察到了不同浓度的溶菌酶与溶壁微球菌相反应的作用过程。结果发现,在溶菌酶浓度为0.01mg/mL的情况下,反应菌液逐渐变澄清,溶壁微球菌的裂解程度随着反应时间的延长而逐渐加剧;而在酶浓度增大为1mg/mL时,反应菌液反而不再变清,AFM观察到溶壁微球菌仅发生变形,但未裂解。AFM是观测酶活生理过程的有力工具,同时还为酶活测定开辟了新思路,是传统酶活测定方法的有力补充。     

红曲色素抑菌作用的研究

探讨了红曲色素对细菌、放线菌、酵母、霉菌的抑制作用，实验证明，红曲色素对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌具有较强的抑制作用，对大肠杆菌、灰色链霉菌的抑制作用较弱，而对酵母、霉菌、黄色八叠球菌无抑制作用。     

鱿鱼蛋白抗菌液及其美拉德反应产物制备及抑菌作用研究

目的 制备抗菌型鱿鱼蛋白水解液,实现鱿鱼资源的高值化利用。方法 以鱿鱼蛋白(鱿鱼头和加工碎肉)为原料,经风味蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶水解,测定各水解液对鱿鱼腐败菌(specific spoilage organisms of squid after end storage at room temperature,SE-SSOs)的抑菌性,选择合适蛋白酶水解鱿鱼蛋白,在最适酶解温度和酶解pH下,研究加酶量和酶解时间对水解液抑菌活性影响,制备鱿鱼蛋白抗菌液,通过美拉德反应提高鱿鱼蛋白抗菌液对SE-SSOs的抑菌活性,探讨抑菌模式。结果 胃蛋白酶水解鱿鱼蛋白所得水解液对SE-SSOs的抑菌效果强于其他4种蛋白酶,在胃蛋白酶最适pH 2.0和酶解温度37 ℃下,胃蛋白酶添加量500 U.g_-1^和酶解2 h制备了鱿鱼蛋白抗菌液(Squid protein antibacterial hydrolysate,SAH),SAH中分子量6500 Da左右和低于1000 Da肽组分的相对含量达到46%左右。在SAH中分别添加1%和3%质量体积比(m/v)葡萄糖、果糖和壳聚糖,在120 ℃油浴下加热30 min进行美拉德反应,其中添加3%果糖的SAH美拉德反应产物(记作SAH-3Fru MRPs)对SE-SSOs抑菌作用强于SAH和其他美拉德产物。扫描电镜结果显示SE-SSOs经SAH和SAH-3Fru MRPs作用,其中一些杆菌发生严重膜损伤,而球菌的质膜相对保持较完整。结论 胃蛋白酶水解法适用于制备抗菌型鱿鱼蛋白水解液,通过美拉德反应能进一步提高水解液的抑菌作用,SAH和SAH-3Fru MRPs均可以通过膜损伤方式抑制SE-SSOs中特定菌。因此,SAH及SAH-3Fru MRPs有进一步开发应用前景。     

Ultrafiltration-modified chicken egg white lysozyme and its antibacterial action

The aim of the study was to produce a lysozyme preparation with an increased content of enzyme polymeric forms using the ultrafiltration (UF) technique. The effect of selected parameters of the membrane process on the extent of enzyme modification was examined. The study showed that the membrane technique, developed for the production of lysozyme monomer, could also be used in the direct production of a preparation containing enzyme polymers. Under optimal conditions of the modification procedure, the obtained preparation contained 53.3% of lysozyme polymeric forms. The effectiveness of the antibacterial action of UF-modified lysozyme against selected strains of bacteria was determined. Its bacteriostatic activity depended on the applied modification conditions. Among lysozyme preparations modified by UF, the highest bacteriostatic activity against selected strains of bacteria was recorded in the preparation containing 53.3% polymeric forms. The modification procedure facilitates the extension of the antibacterial spectrum of lysozyme against Gram-negative bacteria ( Pseudomonas fluorescens ) .     

几种硫醚类香料抑菌活性的研究

选取八种硫醚类香料,通过测量抑菌圈直径考察其抑菌活性,并根据显著性分析结果探讨结构对其抑菌活性的影响。结果表明:对于大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、福氏志贺氏菌及枯草芽孢杆菌,二甲基硫醚(DMS)、二乙基硫醚(DES)及二丁基硫醚(DBS)均无抑菌作用,而二烯丙基硫醚(DAS)则具有一定的抑菌作用;以二烯丙基二硫醚(DADS)为阳性对照,选取的硫醚类香料对五种供试细菌抑制作用大小为DADS>二丙基二硫醚(DPDS)>或≈二甲基二硫醚(DMDS),二甲基三硫醚(DMTS)>DMDS>DMS及DADS>DAS。这些结果说明二烯丙基对单硫醚类香料的抑菌作用有一定贡献,双键的存在对二硫醚类香料的抑菌作用有重要影响。对于具有相同取代基团的硫醚类香料,硫原子数越多,其抑菌效果越强。     

溶菌酶活力的简易测定

对溶菌酶的测定方法进行了改进,简化了读数方法;对底物悬液进行了适当处理。本方法在酶活性为50～250U/mL范围内有良好的线性关系,反应底物无需用菌粉制成,读数只需记录第15s和第75s的OD450值。结果表明,该方法与常规方法相比较无显著差异（P<0.01）。     

橄榄抑菌活性部位研究

目的:测试橄榄提取物对食品生产、加工和贮藏中常见的腐败菌的抑制作用,寻找橄榄抑菌作用的活性部位。方法:采用抑菌圈法测试橄榄提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、啤酒酵母、黑曲霉、黑根霉、青霉等细菌,酵母菌,霉菌的抑制作用,橄榄三个提取部位对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌的抑制作用。结果:橄榄提取物对测试菌种中的细菌和酵母菌有一定的抑制作用,但对霉菌几乎没有抑制作用。橄榄乙酸乙酯部位对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌有较强抑制作用。结论:橄榄提取物对细菌和酵母菌有一定的抑制作用,乙酸乙酯部位为橄榄抑菌活性部位。      

壳聚糖-蒲公英提取物的抑菌活性与稳定性研究

研究天然抑菌剂壳聚糖和蒲公英提取物联用抑菌活性和抑菌稳定性。分别测定壳聚糖和蒲公英提取物对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄葡萄球菌的抑菌最小浓度以及在最小抑菌浓度下的抑菌率和抑菌圈直径,并研究了壳聚糖和蒲公英提取物联用时的抑菌活性与抑菌稳定性。结果表明:单独使用壳聚糖与蒲公英提取物,均对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄葡萄球菌有一定的抑菌活性。两者联用后,抑菌活性较单独使用有所提高。将联用抑菌剂通过不同温度、p H和紫外照射时间处理后测定可知,壳聚糖与蒲公英提取物联用抑菌剂在40~60℃、p H为5~7和紫外照射时间20~40 min的情况下仍具有较强的抑菌活性,抑菌稳定性良好。      

响应面法优化芝麻蛋白酶解工艺及其产物 抑菌活性的研究

目的为了得到芝麻蛋白双酶分步酶解的最佳工艺参数以及酶解产物的抑菌活性。方法采用响应面法优化双酶分步酶解芝麻蛋白的工艺参数,并以抑菌圈直径大小为指标,考察芝麻蛋白酶解产物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活性以及最小抑菌浓度。结果响应面优化得到双酶分步酶解的最适酶解条件为:总酶量6200 U/g,碱性蛋白酶:木瓜蛋白酶=3:1,先加入碱性蛋白酶后反应1.6 h后加入木瓜蛋白酶,总反应时间为4 h。在此条件下,芝麻蛋白水解度实测值为29.673%,与预测值30.622%相近。芝麻蛋白酶解产物对大肠杆菌无抑制作用,但是具有抑制金黄色葡萄球菌的活性,得到其最小抑菌活性浓度为25.29mg/m L。结论响应面分析法优化芝麻蛋白双酶分步酶解工艺是可行的,芝麻蛋白酶解产物具有抑制金黄色葡萄球菌的活性。     

溶菌酶的活性测定

考察比浊法测定溶菌酶的活性,对可能出现的结果差异进行分析,提出实际操作中测定未知样溶菌酶活性的方法。     

小黄杏色素抑菌作用的研究

以小黄杏色素提取物为实验材料,对4种常见的致病菌(金黄色葡萄球菌、变形杆菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌)进行了抑菌实验,结果表明:小黄杏色素提取物对4种供试菌均有一定的抑制作用,并与其浓度呈正相关,MIC均较低,其抑菌活性随着提取物浓度的增大而逐渐增强。高温以及低浓度的还原剂对色素提取物的抑菌作用基本没有影响;氧化剂对抑菌作用的影响较为明显;在pH=5～6时,色素提取物表现出最佳的抑菌效果。因此,小黄杏色素可作为具有抑菌功能的天然色素,具有广泛的应用潜能。