人呼吸道合胞病毒的稳定性

目的观察人呼吸道合胞病毒(HRSV)在不同温度保存、冻融和超声波处理的稳定性。方法将HRSVA2株接种于KMB17细胞上适应培养后,收获病毒液,分别置于37、22、4和-20℃条件下保存不同时间,或经冻融和超声波处理后,用微量细胞病变法检测HRSV的感染性滴度,观察其稳定性。结果HRSV在37℃保存,病毒感染性滴度下降很快,第4天时,降至约1.50lgCCID50/ml,5d后降至1.00lgCCID50/ml以下,几乎检测不到;在22℃保存,病毒感染性滴度下降相对缓慢,第14天时比原始滴度降低约3.20lgCCID50/ml;在4℃和-20℃下保存较稳定,分别保存5周和3个月后,病毒感染性滴度下降<0.60lgCCID50/ml。冻融1、2、3次,病毒感染性滴度分别下降1.37、2.55和3.61lgCCID50/ml,冻融4次后,病毒几乎无感染性。超声波处理后,病毒感染性滴度下降很快,处理1次病毒滴度即下降至原始滴度的50%左右,处理2次后,病毒几乎无感染性。结论HRSV不宜在37℃和22℃存放,可短暂保存于4℃,在-20℃可保存较长时间;冻融和超声波处理均对病毒感染性滴度有明显影响。     

第6套丙型肝炎病毒抗体诊断试剂国家参考品的研制

目的研制第6套丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)抗体诊断试剂国家参考品。方法从我国10省市血站及生物制品企业的供血员中筛选候选参考品血浆样本304份,采用国内外27种检测试剂进行HCV Ag、HCV Ab及HCV RNA检测后,应用CHIRON公司的RIBA HCV 3.0 SIA及MP公司HCV BLOT 3.0试剂进行确证检测;利用Abbott Real Time HCV GenotypeⅡ试剂,对HCV RNA阳性样本进行HCV基因型别检测,并以核苷酸序列测定方法对分型样本进行确认。通过分析上述检测数据,从中拟选出协作标定样本,邀请国内外生产或市场使用占较大份额的11个实验室参加该套参考品标定。取最低检出限参考品4份,分别于4、25和-20℃放置1、3、5、7、9和11 d,或置-70℃反复冻融1~6次,进行稳定性试验。结果选出65份样品组成第6套HCV抗体诊断试剂国家参考品,其中包括阴性参考品30份,阳性参考品30份,最低检出限参考品4份,精密性参考品1份。应用11家的16种HCV抗体试剂分别平行3次标定检测,阴、阳性参考品符合率均≥29/30;最低检出限参考品检测L1~L3均为阳性,L4为阴性;精密性参考品检测CV在1%~11%之间。不同温度保存11 d及-70℃保存反复冻融6次的检测结果均符合要求(P0.05)。结论建立了应用于血液筛查丙型肝炎病毒抗体试剂质量控制的第6套HCV抗体国家参考品。     

快速血浆反应素环状卡片试验实验室内质控品的制备及稳定性评价

目的制备快速血浆反应素环状卡片试验(rapid plasma reagin circle card test,RPR)实验室内质控品,并对其稳定性进行评价。方法选择肝炎病毒标志物、梅毒螺旋体特异性抗体/非特异性抗体和HIV抗体均为阴性的血清,选择肝炎病毒标志物和HIV抗体均为阴性,梅毒螺旋体非特异性抗体为阳性的血清,将阳性和阴性血清分别混匀,2 643×g离心10 min去除蛋白质沉淀,56℃加热30 min灭活传染性病原体,经0. 2μm滤膜过滤除菌。阴性质控品使用RPR阴性血清基质制备;用阴性血清基质稀释阳性血清基质制备1∶2~+阳性质控品。将阴性和阳性质控品按7 d使用量分装,冷冻保存在-70和-20℃,检测6个月冷冻保存的稳定性及2～8℃保存1周的开瓶稳定性,并进行瓶间差验证。结果质控品-70和-20℃6个月冷冻保存的稳定性及复融后2～8℃保存1周的开瓶稳定性均良好;两种储存条件保存的质控品均无甁间差。结论自制的RPR试验室内质控品6个月内稳定性和均一性均良好,能满足临床实验室日常质控活动。     

Ⅰ型Ⅲ型脊髓灰质炎减毒活疫苗（人二倍体细胞）实际储运中的稳定性

目的考察口服Ⅰ型Ⅲ型脊髓灰质炎减毒活疫苗(bOPV液体疫苗)和Ⅰ型Ⅲ型脊髓灰质炎减毒活疫苗糖丸(bOPV糖丸)的运输、冻融及不同温度下的稳定性。方法将3批bOPV液体疫苗分别按陆路运输(途中模拟10次开门卸货入库)和航空运输要求进行运输稳定性试验和反复冻融5次稳定性试验,3批bOPV糖丸按陆路运输要求(途中模拟10次开门卸货入库)进行运输稳定性试验后,均于-20℃入库储存,分别于入库后第6、12、18个月取样检测病毒滴度,第24个月进行全检。同时将6批bOPV液体疫苗和6批bOPV糖丸分别于-20℃保存36个月、2～8℃保存12个月、25℃放置4周、37℃放置8 d,于不同时间点取样检测病毒滴度。采用细胞培养半数感染量(cell culture infective does 50%,CCID50)法检测上述样品病毒综合滴度及Ⅰ型、Ⅲ型分型滴度,按企业注册制造及检定规程评价疫苗效价稳定性。结果 bOPV液体疫苗及bOPV糖丸2～8℃运输及bOPV液体疫苗反复冻融5次后,于-20℃保存24个月,疫苗各项质量指标检测结果均符合质量标准要求;-20℃保存36个月、2～8℃保存9个月、25℃放置1周、37℃放置2 d后,病毒滴度均符合企业注册制造及检定规程。结论 bOPV在常规储运条件下具有良好的稳定性,反复冻融对bOPV液体疫苗稳定性影响有限,但储存温度和时间会对bOPV的稳定性产生不同程度的影响,在实际储运过程中应避免将其长期暴露于温度偏移情况下。     

戊型肝炎病毒IgG抗体国家参考品的建立

目的制备戊型肝炎病毒IgG抗体国家参考品。方法从我国多省血液中心、采浆站收集血清、血浆样品300份,应用国内外5家HEV IgG抗体诊断试剂进行筛选,制备HEV IgG国家参考品,并对参考品的稳定性及适用性进行检测。结果制备了HEV IgG国家参考品,其中阴性参考品30份;阳性参考品10份;灵敏度参考品1份,依据HEV IgG国际标准品进行标化,定量为3 U/ml;精密性参考品1份。参考品经4℃及室温放置10 d,37℃放置7 d,以及反复冻融3次后,测定结果与-20℃放置参考品检测结果一致,稳定性良好。5个厂家试剂对参考品的检测结果显示该参考品具有较好的适用性。结论制备了戊型肝炎病毒IgG抗体国家参考品,为提高诊断试剂的质量奠定了基础。     

以IU为单位的乙型肝炎病毒核心抗体国家参考品的建立

目的建立以IU为单位的乙型肝炎病毒核心抗体(hepatitis B core antibody,HBcAb)国家参考品。方法从我国多个省份血液中心和采浆站收集血清、血浆样品300份,应用5家国产和2家进口HBcAb诊断试剂初步筛选,并采用WHO国际HBcAb标准品进行标定,同时验证初步筛选获得的参考品的稳定性及适用性。结果建立了HBcAb国家参考品,包括阴性参考品15份、阳性参考品15份、灵敏度参考品1份、精密性参考品1份。其中灵敏度参考品经WHO国际HBcAb标准品标化后定量为5 IU/ml,19家发光试剂和酶联免疫试剂的最低检出限均值分别为0.67及0.53 IU/ml。参考品经4℃、常温、37℃保存及反复冻融后与置-20℃保存的参考品在阳性参考品符合率、阴性参考品符合率、最低检出限及精密性等方面的结果均一致。5家国产试剂检测阴性参考品符合率均为15/15,阳性参考品符合率均为15/15,其中3家试剂的最低检测限高于1.0 IU/ml,精密性CV均20%。结论成功建立了以IU为单位的HBcAb国家参考品,且具有良好的稳定性及适用性,为提高HBcAb诊断试剂的质量奠定了基础。     

口服Ⅰ型Ⅲ型脊髓灰质炎减毒活疫苗的稳定性

目的考察口服Ⅰ型Ⅲ型脊髓灰质炎减毒活疫苗在不同温度和pH环境下的稳定性。方法将6批疫苗分别于2～8℃放置6个月、22～25℃放置7 d、37℃放置7 d、-20℃放置27、30、33个月,或反复冻融5次;将疫苗pH调至3. 0～10. 0。采用细胞培养半数感染量(cell culture infective dose 50%,CCID50)法检测病毒总滴度及分型滴度。结果口服二价脊髓灰质炎减毒活疫苗在2～8℃保存6个月,22～25℃保存5 d,37℃保存2 d,反复冻融5次,-20℃保存27个月,pH 3. 0～10. 0环境下,疫苗效力均符合质量标准。结论疫苗的保存温度及时间对其稳定性均有影响。     

奶粉中金黄色葡萄球菌标准样品的均匀性和稳定性研究

对人工制备的奶粉中金黄色葡萄球菌标准样品进行均匀性和不同储存条件下稳定性的实验研究。奶粉中高密度菌体和低密度菌体标准样品的均匀性统计学结果变异小,均匀性良好;两种密度菌体在-80℃保存半年后,活菌数没有显著变化,符合稳定性统计学要求,提高保存温度之后,低密度菌体标准样品可以在-20℃下保存半年以上,而高密度菌体标准样品的活菌数在-20℃下保存40 d后开始下降,直到70 d后达到稳定,继续提高保存温度,高密度菌体标准样品在4℃下保存稳定性较差,而低密度菌体标准样品在4℃可以稳定7 d。综上所述,低密度菌体的奶粉中金黄色葡萄球菌标准样品可以满足实验室质量控制和方法验证的基本需求,保障量值准确统一,保证检测结果的有效性、可比性及国际国内互认度。     

ELISA方法检测肝癌血清标志物的应用

目的对已建立的肝癌血清标志物ELISA检测方法进行扩大规模临床样本检测,进一步评价和优化该方法。方法利用本实验室建立的肝癌血清标志物ELISA检测方法,对407份肝病患者血清和95份正常献血员血清进行检测,并对检测结果进行分析。结果324份HBV感染后的肝癌、肝硬化及肝炎患者血清样本中,2种或2种以上指标阳性比例分别为77.6%、76.1%和52.5%,肝癌患者3种或3种以上指标阳性比例较肝硬化和肝炎患者分别高39.9%和310%;在正常献血员、药物性肝炎、酒精性肝炎及其他类型的癌症患者中,87.5%～100%的患者肝癌血清标志物分子≤1种;URG7是最早出现的抗体阳性标志物分子,URG11和S15a抗体则在进展后期或已发展为肝癌的患者血清中呈优势比例出现。结论5种肝癌血清标志物分子与肝癌发生的风险呈正相关,已建立的肝癌血清标志物ELISA检测方法可用于肝癌高危人群的筛选及小肝癌的早期诊断,作为目前AFP和MRI诊断方法的有益补充。     

2种不同方法检测HIV抗体结果比较

目的 研究使用不同检测方法对HIV抗体进行初筛检测,结果有无显著性差异。方法 通过使用酶联免疫法和化学发光法对2794份相同的艾滋病高危人群人员的血清样品进行HIV抗体初筛检测,对2种检测方法的检测结果进行比较。结果 酶联免疫法检测结果为阳性47份,阴性2747份,阳性率为1.682%,化学发光法检测结果为阳性55份,阴性2739份,阳性率为1.968%,酶联免疫法检测结果阳性而化学发光法检测结果阴性的样品有11份,酶联免疫法检测结果阴性而化学发光法检测结果阳性的样品有19份,经配对χ2检验,酶联免疫法和化学发光法初筛检测HIV抗体的阳性率无显著性差异。酶联免疫法和化学发光法2种检测方法初筛检测结果共同阳性有36份,共同阴性有2728份,总符合率为98.93%。结论 提示初筛检测HIV抗体时,酶联免疫法和化学发光法可互相参考,也可互相替代。     

丙型肝炎病毒RNA室内质控品的制备及其临床应用评估

目的探讨自制丙型肝炎病毒(hepatitis C Virus,HCV)RNA定量检测室内质控品的可行性,并评估其临床应用价值。方法收集已发过HCV-RNA临床报告的血浆样本,分别将HCV-RNA阴性血浆(<50 IU/mL)、弱阳性血浆(102~103 IU/mL)和强阳性血浆(105~106 IU/mL)混合、离心后,获得阴性质控品(HCV-RNA-N)、弱阳性质控品(HCV-RNA-L)和强阳性质控品(HCV-RNA-H),小量分装后于-80℃冻存。确定靶值后,评价其均一性、重复性、准确性和稳定性。结果自制HCV RNA室内质控品具有良好的均一性、重复性和准确性,可在-80℃保持稳定至少12个月。结论HCV RNA室内质控品制备过程简单,样品均一,重复性好,准确性高,稳定性良好,可用于临床检测HCV-RNA。     

口服脊髓灰质炎减毒活疫苗单价半成品在-20℃保存的稳定性

目的评价口服脊髓灰质炎减毒活疫苗单价半成品在-20℃保存的稳定性。方法将-20℃保存1～7年的Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型单价疫苗半成品各随机抽取5～11个批次,采用微量细胞病变滴定法进行病毒滴度测定,分析样品的病毒滴度变化。结果Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型单价疫苗半成品保存5年,滴度仍达到《中国药典》三部(2005版)的要求;保存6和7年,Ⅰ型半成品滴度仍符合上述要求,Ⅱ型半成品滴度合格率均为80%,Ⅲ型半成品合格率分别为60%和20%。结论口服脊髓灰质炎减毒活疫苗单价半成品在-20℃下保存具有良好的稳定性,与Ⅰ型、Ⅱ型相比,Ⅲ型稳定性相对较差。     

氯丁橡胶的老化和寿命预测研究

通过对氯丁橡胶在55℃、70℃、85℃、100℃下热空气加速老化的实验,研究了氯丁橡胶的老化机理并进行了寿命预测。红外分析结果说明氯丁橡胶的老化机理为：热氧老化在C=C上进行;85℃、]00℃侧基C1脱离主链。以扯断伸长率为指标进行寿命预测,可知氯丁橡胶在本实验条件下的贮存寿命约为20a。     

双价肾综合征出血热纯化疫苗的研究

目的　研制包含Ⅰ型和Ⅱ型病毒抗原的肾综合征出血热纯化疫苗 ,以提高疫苗质量及临床应用效果。方法　用金黄地鼠肾细胞培养的PS 6株 (Ⅰ型 )病毒和L99株 (Ⅱ型 )病毒以体积比 1∶1的比例配制成双价疫苗 ,经醋酸锌沉淀、超滤浓缩、Sepharose 4FF柱层析制备成双价纯化疫苗。结果　双价纯化疫苗经中国药品生物制品检定所检测 ,各项指标全部合格。疫苗于 37℃放置 2周和 4℃放置 3年 ,效力试验均合格。临床观察血清中和抗体阳转率大于 85 % ,仅出现 0 .5 %的轻反应。结论　研制的出血热双价纯化疫苗 ,各项质量指标均符合《双价肾综合征出血热纯化疫苗试行规程》的要求 ,临床应用效果良好     

HIV-1核酸血筛试剂国家参考品的研制

目的研制HIV-1RNA血筛试剂国家参考品。方法收集HIV-1病毒培养物、我国不同地区的HIV-1感染者血浆以及正常人样品,经HIV-1病毒载量试剂检测,对HIV-1RNA阳性的样品进行env基因型分析,从中筛选参考品的候选样品。结果共筛选8份HIV-1RNA阳性的样品作为阳性参考品,病毒载量均高于5000IU/ml;8份HIV、HBV、HCV均为阴性的血浆样品作为阴性参考品;以1份病毒培养样品作为灵敏度参考品的原始样品,经WHOHIV-1RNA标准品标定,其HIV-1病毒载量为3.79×104IU/ml;反复3次冻融对参考品的病毒载量无明显影响。结论已制备HIV-1RNA血筛试剂国家参考品,为我国HIV-1核酸血筛试剂的质量控制和标准化提供了依据。     

pH值对重组人源抗狂犬病病毒单克隆抗体稳定性的影响

目的研究pH值对重组人源抗狂犬病病毒单克隆抗体NM57稳定性的影响。方法将NM57原液的pH值分别调节为4.0、5.0、6.0、7.0和8.0,分别置于4和40℃保存,于0、2、4、6周取样,观察其外观的变化,并检测其SDS-PAGE及SEC-HPLC纯度。中试规模制备NM57制剂(200IU/ml,pH6.0),4℃放置3、6、9、12、18和24个月,取样观察其外观的变化,SEC-HPLC检测样品纯度,快速荧光灶抑制试验(RFFIT)检测样品中和活性。结果在观察期内,所有样品的外观均保持澄清透明。不同pH值的NM57原液4℃放置6周,纯度无明显变化;40℃放置的不同pH值的NM57原液样品纯度变化有明显差异,NM57(5.0)和NM57(6.0)样品相对稳定。中试规模制备的6批NM57制剂4℃放置24个月,其纯度及中和活性均保持稳定。结论NM57原液在甘氨酸-组氨酸缓冲系统中,pH6.0条件下比较稳定,NM57(pH6.0)制剂长期稳定性良好。     

轻武器用钝感发射药功能失效阈值预估方法

为预估轻武器用钝感发射药在贮存过程中,因钝感剂迁移导致弹道性能变化而引起功能失效的问题,采用Fick第二定律和扩散系数与扩散活化能的关系,以发射药钝感层结构相同、其内弹道性能相同为前提,建立了轻武器用钝感发射药功能失效阈值预估方法。应用该方法,采用3种配方钝感发射药分别在75℃和85℃下长贮,计算出各发射药钝感剂药的扩散活化能,并以75℃为基准预测了3种配方钝感发射药65℃长贮下的膛压功能失效阈值,同时在65℃下对发射药进行长贮,通过内弹道试验实测出发射药在65℃长贮下膛压功能失效阈值。结果表明,应用该方法预估发射药膛压功能失效阈值与实测值偏差分别为10.3%、2.9%、7.9%。同时以65、75、85℃下平均扩散活化能,计算出不同温度下发射药功能失效阈值,并对3种配方钝感发射药要满足常规弹药17年的贮存寿命要求的最高贮存温度提出了要求。     

毕赤酵母表达的含前S抗原重组乙型肝炎疫苗的稳定性

目的考察毕赤酵母表达的含前S抗原重组乙型肝炎疫苗原液和成品的稳定性。方法将3批疫苗原液置4℃存放,分别于0、1、2、3、6个月时取样,测定其在各时间点的乙型肝炎表面抗原S、前S1(PreS1)、前S2(PreS2)抗原滴度及HPLC纯度;将3批疫苗成品置25℃和4℃存放,进行加速稳定性和长期稳定性试验,分别于0、1、2、3、6个月和0、3、6、9、12、18、24个月时取样,进行小鼠效力、pH值、细菌内毒素和无菌测定。结果 3批疫苗原液于4℃保存6个月,表面抗原S、PreS1、PreS2抗原滴度及HPLC纯度均无明显变化;3批疫苗成品于25℃放置6个月和4℃放置24个月,各个时间点的小鼠效力均符合暂定规程的要求,pH值保持稳定,细菌内毒素和无菌试验均符合《中国药典》三部(2005和2010版)要求。结论毕赤酵母表达的含前S抗原重组乙型肝炎疫苗原液及成品稳定性良好。     

Vero细胞HCP试剂盒的稳定性观察

目的观察Vero细胞HCP试剂盒的稳定性。方法将Vero细胞HCP试剂盒分别于2～8℃和37℃放置不同时间,检测试剂盒的灵敏度、特异性、准确性及精密性。结果试剂盒在2～8℃放置10个月的特异性及灵敏度均较好;检测参考品的回收率在91.7%～114.8%之间;对不同制品检测结果的变异系数均小于10%。37℃放置7d,试剂盒的灵敏度仍可达12.5ng/ml;放置10d,检测参考品的回收率在85%～115%之间;对不同制品检测结果的变异系数均小于10%。结论Vero细胞HCP试剂盒于2～8℃放置10个月及37℃放置7d的稳定性较好,仍可正常使用。