原发性高血压患者中血管紧张素Ⅱ2型受体基因A1675G多态性与缬沙坦降压疗效的相关性研究

目的: 探讨原发性高血压患者中血管紧张素Ⅱ2型受体基因A1675G单核苷酸多态性与高血压发生及缬沙坦治疗的关系。方法: 应用直接测序方法对80例原发性高血压和40例正常人群中血管紧张素Ⅱ2型受体基因作SNP分型。结果: 原发性高血压患者A1675G位点上A等位基因频率和正常人群中相比有统计学意义(P＜0.05);其与用药后血压的下降幅度有统计学意义(P＜0.05)。结论: 血管紧张素Ⅱ2型受体基因的A1675G单核苷酸多态性与原发性高血压发病有关,其可能是缬沙坦降压疗效的新的预测因子。     

焦磷酸测序分析ABCG2基因多态性方法的建立

目的: 建立ABCG2 34G＞A和421C＞A单核苷酸多态性位点的焦磷酸测序方法。 方法: 抽取志愿者静脉血入EDTA抗凝管,常规苯酚/氯仿法制备全血gDNA,生物素标记引物对扩增多态位点目的片段,制备生物素标记单链模板,与测序引物退火结合后行焦磷酸测序。分析结果经毛细管电泳测序验证,并进行重复性检验。 结果: 本文建立了针对ABCG2 34G＞A和421C＞A多态性位点的焦磷酸测序方法,经毛细管电泳测序验证和重复性验证,结果准确可靠。ABCG2 34G和34A等位基因频率分别为 79.5%和 20.5%;421C和421A等位基因频率分别为 72.7%和 27.8%,均符合Hardy-Weinberg平衡。 结论: 本文建立的焦磷酸测序方法可准确、高通量、快速检测ABCG2 34G＞A和421C＞A单核苷酸多态性,并且特别适宜大样本量的临床及科研批量检测需要。     

ABCC2基因多态性与肾移植受者环孢素所致肝功能异常的相关性研究

目的: 研究肾移植术后患者多药耐药相关蛋白(MRP2/ABCC2)基因多态性对环孢素(CsA)肝功能异常的影响。方法: 入选的339例肾移植受者均采用CsA治疗,检测患者rs717620(A/G)和rs2273697(G/A)多态性的基因型。此外,采用荧光偏振免疫法检测患者的CsA血药浓度,根据肾移植患者发生肝脏损伤的情况分为3组。结果: rs717620和rs2273697突变等位基因发生频率分别为 38.89%和 10.72%。ABCC2基因rs717620位点的G突变等位基因与CsA肝功能异常的发生密切相关,与对照组比较,CsA肝功异常组的GG基因型发生频率明显升高(P<0.05),AA基因型发生频率明显降低(P<0.05)。ABCC2基因rs2273697多态性与CsA肝功异常的发生无明显相关。基因型分析结果显示,这两个多态性对CsA谷浓度均无明显相关性,但rs2273697多态性对ALT和AST检测值有明显影响。对于ABCC2基因rs717620而言,GG基因型纯合子携带者的发病风险比AA型纯合子携带者高6倍(OR=6.960, 95%CI:1.636～29.610, P<0.01)。单倍体分析结果显示,与AA-AA基因型个体相比,GG-GG和GG-GA基因型个体移植术后发生CsA肝功异常的风险分别增加 5.909 倍和 13.333 倍。结论: ABCC2基因rs717620位点多态性与CsA肝功异常有明显相关性。ABCC2基因单倍体各基因型中,GG-GG和GG-GA单倍体基因型是肾移植术后发生CsA肝功异常的危险基因因素。     

焦磷酸测序技术检测SLCO1B1基因多态性方法的建立

目的:建立SLCO1B1 A388G和T521C单核苷酸多态位点的焦磷酸测序方法,分析中国健康人群中分布频率。方法: 制备300例健康人外周血gDNA,应用PyroMark ID焦磷酸测序仪进行多态位点分型分析。并通过重复性检验和毛细管电泳测序验证方法正确性。结果: 建立了SLCO1B1 A388G和T521C多态性分析的焦磷酸测序新方法,经毛细管电泳测序验证和重复性验证,结果准确可靠。在300例标本中, 388A、388G、521T、521C等位基因频率分别为28%、72%、89.5%和 10.5%,符合Hardy-Weinberg平衡。结论:焦磷酸测序方法可准确、高通量、快速检测SLCO1B1 A388G和T521C单核苷酸多态性,特别适宜大样本量的临床及科研批量检测需要。     

PNPLA2基因多态性与中国汉族2型糖尿病患者缺血性脑卒中的相关性研究

目的: 探讨脂肪甘油三酯脂酶基因PNPLA2 rs1138693(T>C,L481P)多态性与中国汉族人群2型糖尿病患者缺血性脑卒中发生风险的相关性。方法: 病例对照研究共纳入368例中国2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)患者(139例T2DM缺血性脑卒中患者和229例T2DM非缺血性脑卒中患者作为对照组),利用Taqman探针实时聚合酶链式反应TaqMan MGB Real-time PCR对PNPLA2 rs1138693(T>C)进行基因分型,并采用SPSS 20.0进行统计分析。结果: 对照组和缺血性脑卒中组患者临床资料中的年龄、性别、血压和同型半胱氨酸水平存在统计学差异(P<0.05)。缺血性脑卒中组患者PNPLA2 rs1138693位点的 CC基因型频率和C等位基因频率显著低于对照组(基因型频率:P=0.033;等位基因频率:P=0.011)。Logistic回归分析发现,在加性、显性和隐性遗传模型下,PNPLA2 rs1138693等位基因C是T2DM患者进展为缺血性脑卒中的保护因素(P<0.05)。结论: PNPLA2 rs1138693基因多态性与中国T2DM患者发生缺血性脑卒中的易感性有关,携带rs1138693 C等位基因的T2DM患者更不容易进展为缺血性脑卒中。     

染料木素临床不良反应与CYP1A2、UGT1A7基因多态性研究

目的:探讨染料木素临床不良反应与CYP1A2、UGT1A7基因多态性的相关性。方法:114例健康志愿者随机分为试验组与对照组,试验组分别口服染料木素一个剂量50、100、200mg,每人服药1次,观察3d了解有无不良反应发生;用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(RFLRPCR)扩增基因片段并酶切电泳观察分析CYP1A2G2964A、C734A和UGT1A7Trp208Arg的多态性。结果:试验组及对照组的基因型及等位基因分布差异无统计学意义(P>0.05)。试验组受试者根据有无不良反应的出现分为两组基因,CYP1A2G2964A基因:不良反应组14例受试者中有10例的基因型为G/A(占71.43%),而无不良反应组41例受试者中有22例的基因型为G/G(占53.66%);CYP1A2C734A基因:不良反应组13例受试者中有7例的基因型为C/A(占53.85%),而无不良反应组32例受试者中有16例的基因型为A/A(占50.00%);UGT1A7Trp208Arg基因:不良反应组15例受试者中有12例的基因型为Trp/Trp(占80.00%),并且无不良反应组53例受试者中有32例的基因型也为Trp/Trp(占60.38%)。结论:染料木素不良反应组中CYP1A2G2964A基因以G/A型较高,CYP1A2C734A基因以G/G型较高;UGT1A7基因以TrpTrp型较高。     

连接蛋白37 rs1764390基因多态性与中国汉族人缺血性脑卒中的相关性研究

目的: 探讨连接蛋白37（connexin37,Cx37）基因rs1764390（A/G）多态性与中国汉族人缺血性脑卒中（ischemic stroke,IS）遗传易感性的关系。方法: 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP）分析技术,结合琼脂糖凝胶电泳进行病例对照研究,检测184例IS患者（病例组）和149例健康人（对照组）Cx37基因 rs1764390（A/G）多态性位点的基因型分布和等位基因频率。结果: 病例组Cx37 rs1764390 AA、AG、GG基因型分布频率分别为 30.4%、48.9%、20.7%,其中突变等位基因G携带比例为45.1%,对照组AA、AG、GG基因型分布频率分别为 24.2%、51.0%、24.8%,其中突变等位基因G携带比例为 50.3%,经χ²检验,病例组与对照组基因型分布和等位基因频率均没有统计学差异（χ²=1.884 和1.804,P>0.05）。结论: Cx37基因rs1764390 A/G多态性与中国汉族人IS的发生和发展不存在明显的相关性,提示A/G等位基因可能不能作为判断中国汉族人IS易感性的分子遗传标记。     

高尿酸合并高血压患者URAT1 6092(T/C)基因多态性对氯沙坦降尿酸疗效的影响

目的: 探讨尿酸盐阴离子转运体(Urate Transporter 1,URAT1)SNP6092(T/C)基因多态性对高尿酸血症合并原发性高血压患者服用氯沙坦降尿酸疗效的影响。方法: 应用PCR-RFLP方法对101名高尿酸血症合并原发性高血压患者和117名健康对照者进行基因分型,并且所有患者均每天口服氯沙坦药物 100 mg,连服2周。测定用药前后的血压、血尿酸(Ur)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、胆固醇(CHOL), 高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c), 低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)和甘油三酯(TG)。结果: 服用氯沙坦后,突变基因型患者(TC/CC)的Ur和Cr的降低水平均明显低于TT基因型患者(P<0.05),并且TC和CC型患者的Ur降低幅度(1.34%±2.12%,-0.2%±3.8%)也明显低于TT基因型患者(22.58%±14.46%)(P<0.05)。结论: URAT1基因6092T/C遗传变异影响氯沙坦的降尿酸疗效,并且可能是氯沙坦降尿酸潜在的遗传靶点。     

β3肾上腺素受体基因Trp64Arg多态性与中国男性2型糖尿病患者合并高尿酸血症的相关性研究

目的: 探讨中国人群男性2型糖尿病患者中β3肾上腺素受体基因Trp64Arg多态性与高尿酸血症的相关性。方法: 196名高尿酸血症的2型糖尿病患者和196名正常尿酸水平的2型糖尿病患者进行基因分型。检测体重指数、腰臀比、收缩压、舒张压、血尿酸、肌酐、尿素氮、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇脂、高密度脂蛋白胆固醇脂、空腹血糖和餐后血糖的水平。结果: 高尿酸血症组中,携带不同β3肾上腺素受体Trp64Arg基因型的2型糖尿病患者其尿酸水平有统计学差异,且呈基因剂量效应[CC组(599.53±113.70) vs CT组(529.78±81.10) vs TT组(507.33±74.27), P<0.01]。在该研究中,Trp64Arg TC+CC基因型患者的血尿酸水平亦显著高于TT基因型组[(557.95±99.91) vs (503.47±69.40) μmol/L, P<0.01]。结论: β3肾上腺素受体基因Trp64Arg多态性与2型糖尿病合并高尿酸血症的具有相关性。     

ACE基因I/D多态性与风湿性心脏病的相关性研究

目的: 探讨血管紧张素转换酶(Angiotensin converting enzyme ,ACE)基因插入/缺失(I/D)多态性与中国人风湿性心脏病(Rheumatic heart disease,RHD)易感性的关系。方法: 以病例-对照法,采用聚合酶链反应(PCR)检测246例风湿性心脏病患者和223例正常对照组的ACE基因型。病例组进一步分为二尖瓣病变组和联合瓣膜病变组,结合临床资料统计分析各组数据。结果: ACE I/D各基因型在RHD病例组和对照组分布差异无统计学意义,但病例组ACE I型等位基因频率高于对照组(70.1% vs 63.9%),差异有统计学意义(P＜0.05)。联合瓣膜病变患者组中,ACE II、ID、DD基因型频率分别为 51.8%、39.2%和 9.0%,I、D等位基因频率分别为 71.4%及 28.6%。ACE II基因型和I型等位基因在联合瓣膜病变组和对照组的分布差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论: ACE基因I/D多态性可能与中国人风湿性心脏病的遗传易感性相关。     

中国肾移植患者钙蛋白酶10基因多态性与移植后糖尿病的相关性研究

目的: 探讨中国肾移植患者钙蛋白酶10(CAPN10)基因多态性与移植后糖尿病(PTDM)的相关性。方法: 采用等位基因特异性PCR、限制性片断长度多态性PCR(PCR-RFLP)分别检测了97例PTDM患者(PTDM组)和301例未发生PTDM的肾移植患者(对照组)的CAPN10基因SNP-19、SNP-43、SNP-63的基因型,采用 logistic 回归分析该基因多态性与PTDM的相关性。结果: PTDM组患者SNP-19的11 +12基因型频率和SNP-43的GG基因型频率明显高于对照组(P< 0.05)。用性别、移植时年龄、体重和BMI进行校正后, SNP-19 的11基因型和12基因型携带者移植术后发生PTDM的风险分别是22基因型的1.502倍(OR=1.502,95%CI:1.016~2.347,P=0.048)和1.764倍(OR=1.764,95%CI:1.055~2.947,P=0.030),SNP-43的GG基因型携带者移植术后发生PTDM的风险是AA和GA基因型患者的2.19倍(OR＝2.190,95%CI:1.047~3.473,P=0.044),SNP-63与PTDM的发生无明显相关性(P>0.05)。结论: CAPN10基因SNP-19 的1等位基因和SNP-43的GG基因型是肾移植后发生PTDM的独立危险因素。     

吸入性糖皮质激素布地奈德相关基因多态性与哮喘疗效的关系

目的：研究糖皮质激素诱导转录因子1（GLCCI1）基因rs37973、促肾上腺皮质激素释放激素受体1（CRHR1）基因rs1876828以及IgE低亲和力II受体基因Fc片段（FCER2）基因rs28364072基因多态性与哮喘患者使用吸入性糖皮质激素（ICS）布地奈德治疗疗效的关系。方法：收集哮喘患者血样152例,提取血液DNA,采用荧光原位杂交法检测GLCCI1、CRHR1与FCER2基因多态性,收集患者进行药物治疗前后的肺功能检测结果,记录用力肺活量（FVC）、第一秒用力呼气容积（FEV1）、第一秒用力呼气容积占用力肺活量的百分比（FEV1/FVC%）、嗜酸性粒细胞计数（EOS）等指标,并计算FVC、FEV1、FEV1/FVC等差值和改善率。分析GLCCI1、CRHR1与FCER2基因多态性与哮喘患者治疗前后肺功能改变的关系。结果：GLCCI1、FCER2各基因型的分布频率在汉族患者与维族患者中均有统计学差异（P<0.05）,本研究人群中未发现CRHR1 AA基因型,但GA基因型在维族患者中的分布频率明显高于汉族患者（P<0.05）。GLCCI1 AA型与GG型患者治疗前后的FVC差值与FVC改善率变化相近（P>0.05）,但AG型患者的FVC差值与FVC改善率较之GG型明显升高（P<0.05）;FCER2 AA型与AG型相比,药物治疗前后FEV1/FVC的差值变化相近（P>0.05）,但AA型/AG型分别与GG型相比,ICS治疗前后FEV1/FVC的差值均明显升高（P<0.05）。CRHR1 GA基因型患者治疗前后的FEV1/FVC差值比GG型的变化更明显（P<0.05）。FCER2 AA型与GG型的汉族与维族患者经治疗后的各项肺功能指标变化均相近（P>0.05）,而AG基因型的维族患者与汉族患者相比,经ICS治疗后的FEV1改善率、FEV1/FVC差值和FEV1/FVC改善率均有明显升高（P<0.05）。结论：GLCCI1、CRHR1、FCER2各基因型患者经吸入性糖皮质激素布地奈德治疗前后肺功能指标的改变具有明显差异,GLCCI1 rs37973、CRHR1 rs1876828与FCER2 rs28364072基因多态性与哮喘患者ICS治疗疗效存在一定相关性,可能作为预测哮喘患者吸入性糖皮质激素治疗疗效的遗传学指标。     

供受体CYP3A5基因型对肝移植术后早期他克莫司谷浓度的影响作用及其临床意义

目的：回顾性分析治疗药物浓度监测（TDM）策略下，供受体CYP3A5 rs776746基因分型对肝移植术后早期他克莫司谷浓度的影响作用及其临床意义。方法：根据入选标准收集2015年1月到2019年3月上海市第一人民医院肝移植患者125例，临床资料包括术后28天的临床药理学参数、肝功能以及随访新发糖尿病（new onset diabetes mellitus, NODM）情况。应用定量PCR技术对供体和受体细胞色素P450家族成员3A5（CYP3A5）基因rs776746位点进行分型。结果：术后第一周他克莫司谷浓度中位数（median trough concentration, Ctmed）、谷浓度最大值（maximum trough concentration, Ctmax）分别为（8.3±7.0）ng/mL、（11.2±12.9）ng/mL。供体和受体联合CYP3A5基因分型可将患者分为4个亚组：供体和受体均为AA/AG组、供体AA/AG+受体GG组、供体GG+受体AA/AG组、供体GG+受体GG组。各亚组患者术后第一周Ctmed、Ctmax均有统计学差异（P<0.01）。接收者操作特征（ROC）分析显示Ctmax可预测NODM，曲线下面积（AUC）为0.716 8（P=0.000 5），最佳诊断阈值浓度为14.4 ng/mL；而Ctmed对NODM没有预测价值（P=0.193 6）。多因素Logistic回归分析显示，Ctmax异常过高（大于等于14.4 ng/mL，OR：17.796，P=0.014）和术前血糖水平（OR：5.076，P=0.043）、术前总胆固醇水平（OR：3.752，P=0.022）、术后激素治疗（OR：12.846，P=0.015）为NODM发生的独立危险因素。供受体CYP3A5基因型对Ctmax有显著影响，四个亚组肝移植术后早期Ctmax大于等于14.4 ng/mL患者分别为14.70%（5/34）、33.33%（12/36）、61.11%（11/18）、78.57（22/28），四组间比较均有统计学差异（P＜0.000 1）。结论：TDM结合供受体CYP3A5 rs776746基因分型指导肝移植患者个体化用药有助于减少Ctmax异常过高和NODM发生。     

氯沙坦钾片的生物等效性及CYP2C9*3基因多态性对氯沙坦药代动力学的影响

目的: 评价试验制剂氯沙坦钾片(杭州民生药业)与参比制剂氯沙坦钾片(杭州默沙东制药)的生物等效性及CYP2C9^*3基因多态性对氯沙坦药代动力学的影响。方法: 采用PCR测序法对健康中国汉族受试者CYP2C9^*3(rs1057910 A>C)位点进行基因分型,筛选36名受试者入组本试验,其中CYP2C9^*1/^*1(AA)基因型个体32例,CYP2C9^*1/^*3(AC)基因型个体4例。本研究为两制剂、两周期交叉设计,单次、开放口服给药的单中心试验,给药剂量为氯沙坦钾片(50 mg/片)1片。通过液相色谱-串联质谱法同时测定人血浆中氯沙坦钾及其代谢产物E-3174的浓度,采用DAS3.2.2非房室模型药动学参数计算的方法求算药动学参数。结果: 受试试剂对参比制剂的相对生物利用度分别为氯沙坦(101.5±20.2)%、E-3174(100.0±13.8)%;同CYP2C9^*3为AA基因型受试者相比,AC基因型受试者中氯沙坦的药代动力学参数AUC_0-12、AUC_inf以及C_max升高,其中AUC_0-12、AUC_inf差异有统计学意义;E-3174的药代动力学参数AUC_0-48和AUC_inf降低,不同基因型间差异无统计学意义。结论: 两种制剂生物等效; CYP2C9基因1075A>C突变可导致氯沙坦代谢减慢,但氯沙坦临床剂量可能不需要根据CYP2C9基因型进行调整。     

钙通道阻滞剂对肾移植患者环孢素血药浓度/剂量的影响与 CYP3A5 基因多态性有关

目的: 研究CYP3A5基因多态性对合用钙通道阻滞剂(CCBs)患者环孢素(CsA)血药浓度/剂量(C/D) 的影响。方法: 利用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP) 分析技术对 69例肾移植患者 CYP3A5 基因进行分型, 研究患者在合用CCBs后CsA C/D 的差异及与 CYP3A5 基因型的关系。结果: CYP3A5 基因型为 ＊1/＊1、＊1/＊3 和＊3/＊3 型的患者分别有8例、23例和38例。肾移植患者的 CYP3A5 A6986G 多态性(CYP3A5＊3) 发生频率为 71.74%。未用CCBs的CYP3A5＊1/＊3 和CYP3A5＊3/＊3 患者其 CsA CD 分别是野生型患者的 1.73 倍和 2.43 倍,CYP3A5 ＊1/＊1、＊1/＊3 型患者在合用 CCBs 前后CsA 的C/D 明显提高( 19.90±7.66 vs 36.01±8.18, 34.33 ±7.87 vs 46.16 ±9.63 ng·mL^-1 per mg·kg^-1;P <0.01, P <0.05) , 而 CYP3A5 ＊3/＊3 型患者CsA的C/D无明显变化(48.27±10.60vs 46.42 ±9.24 ng.mL^-1 per mg·kg^-1)。结论: CCBs对肾移植患者CsA 的 C/D的影响与 CYP3A5基因多态性相关。     

阿司匹林-烟酰胺-锌络合物对血小板聚集作用和实验性血栓形成的影响

目的: 对阿司匹林-烟酰胺-锌络合物(WUY)的抗血小板聚集作用和抗实验性血栓形成作用进行研究。方法: 用 Born 法测定 WUY 对抗腺苷二磷酸钠(ADP)、花生四烯酸(AA) 和胶原诱导大鼠体外或体内血小板最大聚集, 用小鼠静注 AA 引起的死亡率以及大鼠实验性血栓形成研究药物的抗血栓作用, 并且用放免法测定家兔口服药物后血小板释放产物血栓烷 B₂ (TXB₂) 和 6-酮前列腺素 F_1α (6-keto-PGF_1α) 的含量。结果: WUY 高、中、低 3 种剂量在体外都能显著对抗诱导剂(ADP、AA 和胶原) 引起的血小板聚集, 其中高剂量组的抗血小板聚集作用比阿司匹林(ASP) 强。在体内, WUY 明显抑制 AA 诱导的血小板聚集作用, 1 h 和 3 h 作用最强。WUY 对小鼠尾静脉注射 AA 后诱发的肺栓塞死亡有较强的预防作用, ED₅₀ 比ASP 低, 对大鼠实验性血栓形成也有显著的抑制作用。WUY 高剂量能显著抑制血浆中TXB₂ 水平和提高血浆中6-keto-PGF_1α 含量, 而ASP则降低血浆中 TXB₂ 和 6-keto-PGF_1α 的水平。结论: WUY 具有比ASP 更强的抗血小板聚集作用和抗实验性血栓形成作用, 并能提高血浆中 6-keto-PGF 1α 含量。     

高血压病患者血压水平与脑血管并发症发生率的关系

目的: 探讨不同血压水平与高血压病脑血管并发症发生率的关系。方法: 回顾性调查近5 年住我院未治疗高血压病患者696 例(男387 例, 女309例), 按不同收缩压、舒张压和脉压水平进行分组, 分析不同收缩压、舒张压及脉压水平与脑血管并发症发生率的关系。结果: 脑血管并发症的发生率与收缩压、舒张压和脉压有关(P <0.05), 其影响顺序依次为:脉压>收缩压>舒张压。结论: 高血压病患者脑血管并发症发生率与收缩压、舒张压和脉压有关, 但脉压起着更重要的作用。