Isolation and HPLC determination of amines in wine

Summary The isolation of the amines from wines for liquid chromatography was accomplished by either continuous extraction with Freon 11-methylene chloride or with butanol-methylene chloride. The former method gives high recoveries for high-molecular weight amines and the latter for low molecular weight amines. Amines were dansylated and detected with fluorescence and UV detectors. The methods were used to determine amine contents of wines from different countries. The identification of amines was based on UV spectra of dansylamides with a diode array detector.Molecular-connectivity indices, , to sixth order were correlated with the liquid-chromatographic retention parameters of the dansyl derivatives of the amines studied. Some amines containing oxygen had to be omitted before high correlations were obtained. The molecular-connectivity index method for predicting the structure of a given amine requires that the unknown amine is of the type studied in the present series.

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Isolierung und HPLC-Bestimmung der Amine in Wein

Zusammenfassung Isolierung der Amine aus Wein für die Flüssigchromatographie wurde entweder durch kontinuierliche Extraktion mit Freon-11-Methylenchlorid oder durch Extraktion mit Butanol-Methylenchlorid durchgeführt. Die erste Methode gibt gute Ausbeuten für die höhermolekularen, die zweite für die niedermolekularen Amine. Die Amine wurden dansyliert und mit Fluorescenz- und UV-Detektoren nachgewiesen. Die Methoden wurden zur Bestimmung der Amingehalte in Weinen unterschiedlichen Ursprungs verwendet. Zur Identifizierung der Amine aus Weinproben dienten die mit einem Diodenreihendetektor aufgezeichneten UV-Spektraen der Dansylamide.Die molekularen Konnektivitätsindexe, , der sechsten Ordnung wurden mit den flüssigchromatographischen Retentionsparametern der Dansylderivate der untersuchten Amine korreliert. Um hohe Korrelationen zu erreichen, muten einige sauerstoffhaltige Amine unberücksichtigt bleiben. Um die Struktur eines Amins mit Hilfe des molekularen Konnektivitätsindexes vorauszusagen, wird vorausgesetzt, daß das unbekannte Amin von dem untersuchten Typ in der vorliegenden Reihe ist.

     

Determination of biogenic amines by RP-HPLC for monitoring the microbial spoilage of poultry

A simple high-performance liquid chromatographic (HPLC) analysis is described for the determination of biogenic amines in broiler carcasses. The clean-up procedure consists of an extraction with 0.6 M-perchloric acid, formation of dansyl derivatives, separation by a RP-18 column and UV detection at 254 nm. Within 7 min eight amines could be separated. The quantitative determination of spermidine and spermine requires an additional ion-exchange clean-up with Amberlite CG 50 after the extraction. This procedure gives recoveries of 82%-96% with detection limits of 0.2-0.5 microgram/g of broiler skin. Putrescine and cadaverine are good indicators for the onset of spoilage of poultry carcasses, since both amines could be detected at total colony counts of 10(5) cfu/cm2 and their concentration increases rapidly with advancing decomposition.     

Determination of biogenic amines in leafy vegetables by amino acid analyser

An automated ion-exchange Chromatographic method is described for determination of biogenic amines in leafy vegetables using a cation-exchange resin column in potassium form and a three-buffer system. The following amines were separated and quantified for Chinese cabbage, endive, iceberg lettuce and radiocchio: putrescine, histamine, cadaverine, spermidine, agmatine, spermine, tyramine. Amines from vegetable samples were extracted with 10% trichloroacetic acid. The total concentration of these amines ranged from 14 to 20 g/g fresh weight. Spermidine was the major polyamine detected, present at concentrations of 7–15 g/g fresh weight.

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Bestimmung biogener Amine in Blattgemüse mit dem Aminosäureanalysator

Zusammenfassung Es wird eine Methode zur Bestimmung biogener Amine in Blattgemüse mittels automatisierter Ionenaustausch-Chromatographie beschrieben. Die Trennung erfolgte auf einer K⁺-Kationenaustauschersäule mit Hilfe eines Drei-Puffer-Systems. In Chinakohl, Endivie, Eisbergsalat und Radicchio sind folgende Amine bestimmt worden: Putrescin, Histamin, Cadaverin, Spermidin, Agmatin, Spermin und Tyramin. Die Extraktion erfolgte mit 10% Trichloressigsäure. Die Gesamtkonzentration biogener Amine betrug 14–20 g/ g Frischsubstanz. Von den nachgewiesenen Polyaminen war Spermidin mit einer Konzentration von 7–15 g Frischsubstanz am stärksten vertreten.

     

A screening method for the simultaneous determination of putrescine, cadaverine, histamine, spermidine and spermine in fish by means of high pressure liquid chromatography of their 5-dimethylaminonaphthalene-l-sulphonyl derivatives

Summary A simple and rapid method is described for the extraction, derivatization and subsequent determination by means of high pressure liquid chromatography of putrescine, cadaverine, histamine, spermidine and spermine as their 5-dimethylaminonaphthalene-1-sulphonyl derivatives.The amines are extracted from the fish material by an aqueous trichloroacetic acid solution and derivatized by means of 5-dimethylaminonaphthalene-1-sulphonylchloride (dansyl chloride). The reaction mixture is then injected on a RP-8 column using gradient elution to separate the amine derivatives. Use of the method results in a considerable saving with respect to both time and costs.

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Eine Screening-Methode für die gleichzeitige Bestimmung von Putrescin, Cadaverin, Histamin, Spermidin und Spermin im Fisch mittels Hochdruck-Flüssigchromatographie ihrer 5-Dimethylaminonaphthalin-Sulfonyl-Derivate

Zusammenfassung Eine einfache und schnelle Methode für die Extraktion, Derivatisierung und Bestimmung von Putrescin, Cadaverin, Histamin, Spermidin und Spermin als 5-Dimethylaminonaphthalin-1-sulfonyl-Derivate mit Hilfe der Hochdruck-Flüssigchromatographie (HPLC).Die Amine werden mit einer wäßrigen Trichloressigsäure-Lösung aus dem Fisch extrahiert und mit Hilfe von 5-Dimethylaminonaphthalin-1-sulfonyl (Dansylchloride) derivatisiert. Die Reaktionsmischung wird auf eine RP-8-Säule injiziert und durch Gradientelution getrennt. Die beschriebene Methode bring einen beträchtlichen Zeitgewinn und eine Verringerung der Analysenkosten.

     

Automatische Vors?ulenderivatisierung mit o-Phthaldialdehyd (OPA) Eine neue RP-HPLC-Methode für die Bestimmung von biogenen Aminen in Lebensmitteln

Zusammenfassung Eine einfache, selektive und hochsensitive HPLC-Methode für die routinemäßige Bestimmung aller in Lebensmitteln relevanten biogenen Aminen wird beischrieben. Sie beruht auf einer raschen Extraktion der Amine mit 10%iger Trichloressigsäure und Extraktreinigung über einen Kationenaustauscher, Vorsäulenderivatisierung mit OPA/2-Mercaptoethanol und Trennung der OPA-Amin-Derivate auf einer RP-18-Säule mit anschließender Fluoreszenz-Detektion (Ex 345 nm, Em 440 nm). Die Optimierung verschiedener Einflußfaktoren wird diskutiert. Die Gesamtdauer einer Aufarbeitung mit anschließender HPLC-Bestimmung von 15 biogenen Aminen beträgt 70 min. Für Histamin, Tyramin, Putrescin, Cadaverin, Tryptamin und -Phenylethylamin, die in Lebensmitteln überwiegend vorkommen, liegen die Wiederfindungsraten über 95%. Die Nachweisgrenzen liegen je nach Amin bei 0,1–0,5 pMol/Injektion (20 l) und der Fluoreszenz-Meßbereich ist für 0,5–500 pmol linear (r >0,99). Die Anwendbarkeit und Wiederholbarkeit der Methode wird am Beispiel von Hartkäse, Rohwurst, Milch, Bier und Wein überprüft. Die Methode ist für alle getesteten Lebensmittel sehr gut geeignet.

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Automated pre-column derivatisation with o-phthal-dialdehyde (OPA). A new RP-HPLC-method for the determination of biogenic amines in food

A simple, selective und highly sensitive HPLC method for the routine determination of the biogenic amines in food is presented. Sample preparation is based on a rapid amine extraction using 10% trichloroacetic acid and a cation exchange column for extract purification. For the RP-HPLC analysis OPA/2-mercaptoethanol is used for the pre-column derivatisation, followed by fluorescence detection (Ex 345 nm, Em 440 nm). The effects of several factors are discussed. A separation of 15 biogenic amines is achieved within 70 min. The recoveries for histamine, tyramine, putrescine, cadaverine, tryptamine and -phenyl-ethylamine are higher than 95%. The detection limits lie between 0.1–0.5 pMol/injection (20 l), depending on the amine and a good linearity is achieved in the range from 0.5–500 pMol (r>0.99). The method has been applied for the determination of biogenic amines in Swiss cheese, salami, milk, beer and wine, the repeatability is very good.

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Herrn Prof. Dr. A. Montag zum 65. Geburtstag gewidmet     

Determination of wine amines by HPLC using automated precolumn derivatisation with o-phthalaldehyde and fluorescence detection

Summary A method was developed for the determination of the most important wine amines, histamine, tyramine, putrescine, cadaverine, isoamylamine und-phenethylamine in wine. Amine derivatives were formed automatically by drawing 1 l of wine, 1 l ofo-phthalaldehyde reagent and 5 l of pH 10.4 buffer solution into an injection needle. The reactants were mixed by drawing the liquid back and forth in the needle for 2 min. The derivatives were determined by liquid chromatography using the reversed-phase technique and fluorescence detection. The detection limit for amines ranged from 0.006 to 0.05 mg/L and the determination limit for amines in wine ranged from 0.5 to 1 mg/L, depending on the amine. The total time required by the analysis is 30 min.

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Automatisierung der Bestimmung von Weinaminen mit Hilfe der in der Injektionsspritze erfolgenden OPA-Derivatbildung und Fluorescenz-Flüssigchromatographie

Zusammenfassung In der Untersuchung wurde eine Methode für die wichtigsten im Wein vorkommenden Amine entwickelt: Histamin, Tyramin, Putrescin, Cadaverin, Isoamylamin und-Phenethylamin. Von den zu bestimmenden Aminen wurden durch Aufnahme von 1 l Wein, 1 l OPA-Reagens und 5 l Pufferlösung, pH 10,4, in der gleichen Injektionsspritze deren Derivate gebildet. Die Reaktionspartner wurden durch 2 min Hin- und Herziehen in der Spritze miteinander vermischt. Die Bestimmung der Derivate erfolgte flüssigchromatographisch unter Anwendung von Umkehrphasentechnik und Fluorescenznachweis. Die Nachweisgrenze der Aminen variierte je nach Amin zwischen 0,006 und 0,05 mg/L und die entsprechende Bestimmungsgrenze im Wein zwischen 0,5 und 1 mg/L. Die für die Analyse benötigte Gesamtzeit beträgt 30 min.

     

HPLC-Bestimmung von Oxacillin, Cloxacillin und Dicloxacillin in Muskelfleisch vom Rind mit automatischem Cleanup durch on-line Festphasenextraktion

Zusammenfassung Beschrieben wird ein HPLC-Verfahren mit automatischem Cleanup durch on-line Festphasenextraktion zur quantitativen Bestimmung von Oxacillin-, Cloxacillin- und Dicloxacillinrückständen in Muskelfleisch. Die Penicilline werden aus dem Fleisch mit Acetonitril extrahiert, in Phosphatpuffer überführt und an einer RP-18 Phase automatisch angereichert und gereinigt. Nach Elution auf die analytische HPLC-Säule (RP-18) werden die Penicilline isokratisch chromatographiert und über UV-Detektion (=225 nm) quantitativ bestimmt. Im Bereich der Höchstmenge (0,3 mg/kg) lagen die mittleren Wiederfindungen bei 92% für Oxacillin, 92% für Cloxacillin und 86% für Dicloxacillin. Der Variationskoeffizient für den Bereich von 0,15–0,6 mg/kg lag für die drei Penicilline bei 13,8%, 11,0% bzw. 7,3%. Die Anwendbarkeit des Verfahrens für die Bestimmung von Cloxacillinrückständen in Milch wird gezeigt.

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HPLC determination of oxacillin, cloxacillin and dicloxacillin in bovine muscle with automated cleanup by on-line solid phase extraction

A high-performance liquid chromatographic (HPLC) method with automated cleanup by on-line solid phase extraction was developed for the determination of oxacillin, cloxacillin and dicloxacillin in bovine muscle tissue. The penicillins were extracted from the matrix with acetonitrile, transfered to phosphate buffer and automatically trapped on a RP-18 solid phase extraction column. After on-line elution onto the analytical HPLC-column, penicillins were quantified by UV (=225 nm) after isocratic separation. Mean recoveries at the MRL (0,3 mg/kg) were 92% for oxacillin, 92% for cloxacillin and 86% for dicloxacillin. The coefficients of variation for the three penicillins in the range of 0.15–0.6 mg/kg were 13,8%, 11,0%, and 7,3%, respectively. The applicability of this method for the determination of cloxacillin in milk was demonstrated.