基因技术在医药研究和生产中的应用进展

综述了重组微生物、转基因微生物、基因工程菌、转基因动物以及植物的基因技术在改造抗生素、生产激素类药物、生产氨基酸和酶等方面应用的最近进展 .     

基因工程菌的发酵条件研究

为了获得商品化基因工程产品，要求所选用的基因工程菌高效表达重组蛋白，然而，随着发酵规模的扩大，诸多因素影响基因工程菌蛋白的表达，成功的大规模发酵有两个问题是重要的，一是质粒的稳定性，二是高密度发酵，本文从理论上阐明了ｐＨ，温度、溶氧、比生长速率等条件对重组蛋白产生影响的研究进展。     

Lrrcl0蛋白表达载体的构建

为了构建重组质粒pET～Lrrcl0和Lrrcl0蛋白表达,利用NcoI和BamHI双酶切载体pMDl8-T-Lrrcl0,回收目的片段与经同样酶切后的表达载体pET-30a（＋）,转入E．colistrainDH5d．茵落PCR筛选阳性茵落,提取阳性茵质粒并进行PCR和酶切鉴定;将重组子转入E．colistrainB121（DE3）,于37℃振荡培养,用1mmol／LIPTG诱导目的蛋白的表达。结果表明,成功构建了融合表达载体并命名为pET-Lrrcl0。转入E．colistrainBL21（DE3）进行目的蛋白的表达,获得与预期分子量大小相一致的融合表达蛋白Lrrcl0;Lrrcl0蛋白以包涵体形式存在于宿主菌中,且IPTG诱导4小时,目的蛋白表达量最大。     

人γ-干扰素基因工程菌培养条件的研究

对表达重组人γ-干扰素的基因工程菌的培养条件进行了较详细的研究．确定了最佳的培养及诱导时间，并利用正交试验设计，对影响工程菌生长和重组人γ-干扰素表达的条件如培养基中葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物的量及摇床转速、装液量、接种量、pH等进行了优化．结果表明，在优化条件下，表达的γ-干扰素包涵体占菌体总蛋白的60％以上，每升发酵液可获得包涵体约为1．6g．     

人C-反应蛋白(CRP)基因的克隆及表达研究

人C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)参与人体炎症反应,是临床诊断中的重要检测指标。利用家蚕杆状病毒表达系统构建重组人CRP病毒vBmHis-CRP,接种家蚕五龄幼虫表达重组人CRP蛋白。利用自制抗CRP血清Western Blot检测重组蛋白得到目的条带,纯化后BCA法测定蛋白含量为30μg/mL,质谱检测进一步确定该蛋白为目的蛋白。这为家蚕生物反应器规模化制备重组人CRP蛋白打下了基础,为解决临床CRP相关炎症反应快速诊断试剂盒中标准抗原的来源问题提供了依据。     

HPV16 E6基因在大肠杆菌中的表达

在大肠杆菌中表达HPV16 E6重组蛋白.利用自行构建的重组质粒pET28a(+)-HPV16 E6,经IPTG诱导表达HPV16 E6重组蛋白.实验结果表明,重组质粒pET28a(+)-HPV16 E6在大肠杆菌中经IPTG诱导成功表达出HPV16 E6重组蛋白.HPV16E6重组蛋白的制备为宫颈组织中HPV16型感染的早期诊断和宫颈癌治疗性疫苗的研制奠定了物质基础.     

大肠杆菌生产重组极耐热木聚糖酶的诱导条件及其酶学性质

构建重组菌(JM109／pTre-99A-xylIV)作为极耐热木聚糖酶的生产菌株，研究了IPTG诱导时间、IPTG浓度、重组菌生长的不同阶段加IPTG和温度对重组菌生产极耐热木聚糖酶的影响以及它的酶学性质．结果表明，IPTG诱导8h后极耐热木聚糖酶的表达量基本维持不变，0．5～5mmol／L浓度的IPTG诱导重组菌表达极耐热木聚糖酶的效果基本相同；当重组菌生长到OD600为1．2左右时加IPTG诱导最好，诱导温度对极耐热木聚糖酶表达水平的影响不大．重组耐热木聚糖酶的最适反应pH值为5．4～5．8，重组极耐热木聚糖酶的最适反应温度大于100℃，重组极耐热木聚糖酶在pH值4．2～7．5都比较稳定，重组极耐热木聚糖酶的温度稳定性好，在90℃下保温2h后残存酶活还有90％。     

中温α-淀粉酶基因的克隆及在枯草芽孢杆菌中的高效表达

利用高效表达载体pWB980,实现了Bacillus subtilis BF7658中温α-淀粉酶基因amy在B．subtilis DB403中的高效表达,活力达到770U／mL．经多步纯化,重组酶AMY的比活达到35．8U／mg,纯化倍数为1．7,获得凝胶电泳条带单一的蛋白样品,经SDS—PAGE检测,重组酶AMY相对分子质量为4．8×10^4．对酶学性质进行分析,重组酶AMY的最适反应温度为60℃,最适反应pH为6．0．     

基于RD-BmBacmid载体构建表达GFP蛋白的重组杆状病毒的方法

研究构建一种快速表达GFP蛋白的重组杆状病毒的方法。在复制缺陷型的家蚕杆状病毒(BmNPV)穿梭载体RD-BmBacmid基础上,利用PCR方法合成两端分别含有50bp左右同源臂的绿色荧光蛋白基因(AcGFP)片段和线性化的RD-BmBacmid共转染BmN细胞或家蚕幼虫,可以一步获得重组病毒,表达绿色荧光蛋白。实验结果表明,含有AcGFP基因的重组杆状病毒构建成功,在BmN细胞和家蚕幼虫中分别表达了绿色荧光蛋白。因而,本研究成功建立了一种快速构建重组杆状病毒并能够表达GFP蛋白的新方法。     

人溶菌酶基因在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性检测

将PCR扩增的人溶菌酶编码基因克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,双酶切和测序鉴定表明,重组载体构建正确。电转化毕赤酵母GS115菌株,通过G418筛选获得高拷贝重组菌株后,用甲醇诱导表达;通过SDS-PAGE检测证明上清中有目的蛋白,表达产物与预期大小的人溶菌酶蛋白分子质量15ku一致,其表达量占分泌总蛋白的32%。体外抑菌实验证实重组人溶菌酶蛋白对溶壁微球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草杆菌均有明显的抑菌作用,表明在毕赤酵母中成功表达了重组人溶菌酶。     

极低密度脂蛋白受体结合功能片段的克隆与表达

建立具有正常极低密度脂蛋白（VLDL）受体结合功能的小分子受体片段模型并借助此模型研究VLDL受体与配体结合的作用机制。PCR扩增获得LBR1-3和LBR1-8两个DNA片段并将其克隆至原核表达载体pET-28a（＋），转化大肠杆株Rosetta（DE3），利用IPTG诱导蛋白表达。表达产物经Ni^＋-NTA亲和层析柱纯化，为VLDL受体的进一步功能与应用研究，特别是针对该受体的配体识别、结合作用机制研究奠定了基础。     

MPS-245型磨煤机煤粉细度测试及分析

神头第二发电厂两台500MW机组自投产试验以来,磨煤机电耗大,给煤机调节范围窄,同时锅炉频繁掉焦、塌灰引起主保护动作灭火。经过技术人员对磨煤机煤粉细度等的分析、试验、总结和调整,机组运行状态有了明显改观,节电效益显著,给煤机可调范围由0-30％达到0-100％,磨煤机排渣量急剧下降,达到了调整的预期效果。     

锚梁静压桩操作规程探讨

文章主要介绍苏州建院营造有限公司企业标准《锚梁静压桩操作规程》中有关设计、施工、测试质检等常见问题的认识与处理,以及技术设备的更新作了一定探讨。     

模糊数学法和污染指数法在水质评价中的应用比较

根据哈尔滨制药厂有关地面水监测数据，以其中三个监测断面为例，选择四个评价因子，分别以污染指数法和模糊数学法对水质进行评价，比较两种评价方法的异同。     

苯胺分离装置的节能研究

针对苯胺分离装置中存在的问题如生产工艺操作参数裕度较大，系统的热效率低，进行了系统调优计算，并采取了合理利用能量的热集成措施，提出了建议采用的工艺参数     

制药废活性炭再生及焦化废水深度处理试验研究

针对制药厂产生的废弃活性炭,采取了烘干再生、水洗再生、酸溶液再生和碱溶液再生方法研究。利用再生后的活性炭对焦化废水进行了三级处理试验研究。研究结果表明,经过二级生物处理的焦化废水,CODcr为584mg/L,NH3-N为1146mg/L。废水经过水洗再生活性炭三级串联吸附处理后,CODcr降为53mg/L,NH3-N降为325mg/L。用再生的制药废活性炭深度处理焦化废水是一种非常有效的"以废治废"环保新技术。     

嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶基因定向进化研究

为得到具有催化活性的重组亚油酸异构酶,对嗜酸乳杆菌AS1.1854菌株亚油酸异构酶基因进行体外定向进化.经过两轮连续易错PCR扩增及一轮DNA改组获得了突变基因片段,并克隆到pET30a质粒载体上,转化大肠杆菌,构建了该酶的基因突变文库.经IPTG诱导表达后筛选出一株重组菌,可表达可溶性重组酶蛋白,经紫外分光光度计法测定,重组酶蛋白活力为8.2 U.     

制药企业生产计件工资管理系统的设计与实现

针对目前制药企业普遍存在的计件工资核算繁杂的问题,从企业的实际需求出发,利用企业已有信息开发平台,很好的实现了计件工资核算的自动化管理.该系统已在某药业公司成功应用,系统运行良好.     

1700热轧平整机液压压下系统的技术改造与开发

介绍对某厂热轧平整液压压下系统技术改造工作．分析了系统存在的主问题,提出用电 液伺服阀控方式取代原来伺服变量泵的系统．实现稳定的恒压力压下控制,技改取得完 全成成．