深海独岛枝芽孢杆菌A493产活性物质特性与发酵条件优化研究

以一株抗菌谱较窄并且稳定拮抗水稻黄单胞菌的深海独岛枝芽孢杆菌(V.dokdonensis)A493为研究对象,研究了其产活性物质特性及发酵条件的优化。A493产抗菌活性物质可以耐受100℃的高温,在pH值4～10和紫外照射环境中活性稳定,可以通过3kDa的超滤管,对蛋白酶不敏感,只能溶解于水和甲醇。酸沉淀和硫酸铵沉淀实验结果排除了活性物质是脂肽类物质的可能性,初步研究显示该活性物质可能是极性较强的水溶性活性小分子新化合物。确定A493最佳发酵条件为:接种菌龄12h、接种量1%、发酵时间48h、发酵温度28℃、培养转速180r·min-1、250mL锥形瓶中的装液量为70mL。优化后,其单位体积发酵液抑菌效果提高了18.7%,活性物质对水稻黄单胞菌的抑菌效价相当于15.6μg·mL-1的标准链霉素。     

深海枝芽胞杆菌A493产生的新活性物质Z11的抗菌机理

以一株抗菌谱窄的深海枝芽胞杆菌（Virgibacillus dokdonensis）A493为研究对象,对其产生的新的氨基糖苷类抗菌活性物质Z11抑制水稻黄单胞菌的浓度范围和抗菌作用机理进行了研究。结果表明Z11抑制水稻黄单胞菌的浓度范围为14-56μg·mL^-1;机理研究显示Z11不改变水稻黄单胞菌细胞膜的通透性,但能影响其蛋白质的合成及细胞壁合成关键酶N-乙酰葡糖胺-1-磷酸尿苷酰转移酶（GlmU）的活性。     

拮抗油菜菌核病的海洋细菌筛选及其活性物质的分子检测

以油菜核盘菌为病原指示菌,对1021株海洋细菌进行抗菌筛选,从中得到了144株具抗菌活性的菌株.在建立筛选新型特异性拮抗化合物资源库的同时,重点分析了筛选的302株海洋假单胞菌,对其中具有较强抗菌活性的19株假单胞菌进行了产活性物质合成基因的分子检测.结果表明,菌株1A06832和SH-46扩增获得了2,4-二乙酰基间...     

海洋解淀粉芽孢杆菌GM-1菌株发酵液抗菌谱及稳定性测定

[目的]研究海洋解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌株GM-1发酵液的抗菌谱及稳定性。[方法]以10种植物病原菌为供试菌,生长速率法测定GM-1菌株发酵液的抗菌谱;以油菜菌核病菌为指示菌,生长速率法测定发酵液在不同条件下的稳定性。[结果]GM-1菌株发酵液对供试的10种植物病原菌具有较好的抑制作用,抗菌范围较广,其中对葡萄白腐病菌(Coniella diplodiella)和小麦根腐病菌(Bipolaris sorokiniana)的抑菌率均达85%以上;其发酵液的抗菌作用有较好的热稳定性,在光照和紫外线照射下稳定性较好,在pH值6～8的条件下抗菌作用稳定,对蛋白酶不敏感。[结论]GM-1菌株具有广谱抗菌活性和较强的稳定性。     

水生黄杆菌及其代谢产物对防治水稻白叶枯病的研究鉴定会

安徽省化工研究所为了探索应用微生物防治水稻白叶枯病的新途径,一九七八年于水稻白叶枯病叶上分离到37个菌株。经过对菌株筛选,得到水生黄杆菌(简称31号),并进一步进行了分类鉴定、生产工艺流程、剂型加工、萃取、室内活体测定、盆栽和大田试验与应用方法等研究工作。     

防治蔬菜灰霉病解淀粉芽胞杆菌的分离鉴定及抑菌特性

[目的]为研制防治蔬菜灰霉病的新型生物农药,进行高效生防菌的分离筛选及抑菌特性研究。[方法]通过形态学、生理生化和16S rDNA序列分析,对拮抗菌进行鉴定;采用平板扩散法测定发酵液的抑菌特性。[结果]分离筛选出1株对黄瓜灰霉病具有高效拮抗作用解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens);该菌株在生长对数期产生抗菌物质,并在30-38 h达到最大值;产生的抗菌物质有很好的热、酸碱稳定性,紫外线照射不敏感,常温储存6个月活性保持在80%以上;抗菌谱测定表明其对黄瓜灰霉病菌(Botrytis cinerea)、番茄叶霉病菌(Fulvia fulva)、黄瓜炭疽病菌(Colletotrichum orbiculare)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)等多种病原菌具有显著抑菌效果。[结论]该菌株所产抗菌物质性能稳定,抗菌谱宽,抑菌力强,具有开发成新型广谱生物农药的潜力。     

解淀粉芽孢杆菌SY-FX-69的生物活性

[目的]明确供试菌株解淀粉芽孢杆菌SY-FX-69的离体杀菌活性以及活体盆栽的生物活性。[方法]采用离体抑制菌丝生长速率法、活体盆栽喷雾等方法对菌株SY-FX-69的生物活性进行研究。[结果]供试菌株SY-FX-69的杀菌谱较宽,对水稻纹枯病原菌(Rhizoctonia solani)、棉花黄萎病原菌(Verticillium dahliae)、番茄早疫病原菌(A lte rnaria solani)和黄瓜炭疽病原菌(Colletotric hum lagenarium)的离体防效分别为86.93%、81.43%、82.93%和83.78%,且活体盆栽试验对水稻纹枯病的防效达到96.88%,对玉米锈病防效达到85.56%。[结论]供试菌株SY-FX-69具有较宽的杀菌谱,且对水稻纹枯病和玉米锈病的保护活性较好。     

根围细菌次生代谢物的生物活性筛选

从全国7个地区采集的植物根围土壤样品中分离得到1700余株植物根嗣细菌.采用室内离体筛选的试验方法,以5种植物病原细菌作为靶标,筛选研究得到有生物活性的菌株840株.其中10%的菌株对5种植物病原细菌都具有拮抗活性,其余菌株则仅对1种或几种病原细菌具有拈抗活性.从中进一步筛选得到对小麦白粉病也具有防治效果的菌株,其防治效果最高可达60%.将最终获得的同时对病原细菌有拮抗效果和真菌病害有防治效果的根围细菌作为以后深入研究的对象.     

海洋微生物源农用抗生活性物质的筛选

对134株海洋微生物(其中49株海洋放线菌、54株海洋细菌、31株海洋真菌)进行农用抗生活性物质筛选,分别测定其发酵上清液和菌丝体浸提液的活体抗植物病源真菌、杀虫、除草活性,发现共有77株菌株具有农用抗生活性,其中7株海洋放线菌的代谢产物的活性较高:3株对植物病原真菌具有较好抑制活性的海洋放线菌代号为Y12–26、P10–16、JWH–09;两株具有较高杀蚜虫活性的海洋放线菌是P10–23、P12–21;两株除草活性较好的海洋放线菌是YY01–17和HH1901–45。     

水稻黄单胞菌生物抑制剂的发酵及条件优化

本研究通过分析不同的培养基条件下海绵放线菌对水稻黄单胞菌的抑菌效果,以获取最优的发酵培养基配方。研究发现7种培养基中,ISP2培养基是最优的海绵放线菌的发酵培养基,添加不同种类和浓度的附加碳源和氯化钠对发酵液的抑菌效果没有明显的改善。由实验结果可知,添加15 g/L硫酸铵的ISP2培养基是用于产活性物质抑水稻黄单胞菌生长的海绵放线菌发酵培养的最佳配方。     

放线菌TL05-22菌株发酵液的抑菌谱及稳定性

[目的]研究放线菌TL05-22发酵液的抑菌谱及稳定性。以16种植物病原真菌和6种细菌为供试菌,采用菌丝生长速率法、杯碟法测定拮抗放线菌TL05-22发酵液的抑菌谱;以苜蓿尖镰孢根腐病菌为指示菌,杯碟法测定发酵液的传代稳定性、热稳定性、酸碱稳定性及紫外线稳定性。[结果]放线菌TL05-22发酵液对16种植物病原真菌和6种细菌均具有不同程度的抑菌活性,其中供试真菌以对苜蓿尖镰孢根腐病菌的抑菌效果最好,抑菌圈直径达33.68 mm;供试细菌中以对大白菜软腐病菌的抑菌效果最强,抑菌圈直径达29.12 mm。将发酵液于60~100℃处理30、60 min,抑菌活性没有明显变化;发酵液在pH值6~14时抑菌活性未发生明显变化,但在pH<6条件下抑菌活性明显下降;连续培养10代,发酵液抑菌活性无明显变化。[结论]放线菌TL05-22的代谢产物具有广谱抑菌活性和较强的稳定性,具有一定开发价值。     

海洋放线菌Y-0117农用活性代谢产物的研究

在农用抗生素筛选中发现代号为Y-0117的海洋放线茵菌株所产生的代谢产物对植物病原真菌具有良好的抑制作用。对Y-0117发酵液进行萃取、硅胶柱层析、制备薄层色谱、制备HPLC,分离纯化得到两个活性组分0117A和0117B。通过紫外光谱、质谱、核磁共振等手段,确定0117A的分子式为C35H58O8,分子量为604。结构与已知化合物Bafilomycin D相同;0117 B的分子式为C42H60O12．分子量为756,结构与近期发现具有抗癌活性的已知化合物Hygrobafilomycin相同。研究发现0117B对多种植物病原真菌具有良好的抑制活性,对稻瘟病菌的最小抑制浓度为15．63μg·mL^-1。     

两株红树内生真菌混合发酵液提取物抗植物病原菌活性及LC-MS研究

将混合发酵技术用于南海红树内生真菌E33和K38的培养,发酵液乙酸乙酯和正丁醇萃取物对多种植物病原菌显示强烈抑制作用,抑制率比单独发酵平均增加1～3倍。LC-MS检测显示混合发酵时代谢物种类显著增加,表明两菌发展出不同于单独发酵的代谢途径,产生了强效抗菌活性物质。     

蓝莓溃疡病生防链霉菌CX3的抑菌效果及其鉴定

[目的]为了明确从吉林省长白山保护区池西保护站马鞍山云杉人工林林下土壤分离,所获得1株拮抗菌株(编号记为CX3)的生防效果及分类地位。[方法]分别采用平板对峙法和杯碟法测定该菌株活菌及其发酵液的抑菌活性和抑菌谱;并通过形态学、生理生化特征、16S rRNA序列分析等方法研究了其分类地位。[结果]该菌株对13种供试植物病原菌均有抑制作用,抑菌谱广,其中对蓝莓溃疡病菌有极强的抑制作用,抑菌带达25.91 mm,发酵液的抑菌圈直径达31.73 mm;根据其菌株形态、生理生化特性、16S rRNA序列比对,最终鉴定菌株为链霉菌属Streptomyces sp.。[结论]该菌株对蓝莓溃疡病菌有显著的抑制效果,应用开发前景良好,此次是国内首次报道该菌株杀真菌活性。     

新型糖肽类抗生素达巴万星

达巴万星是一种新型注射用半合成糖肽抗生素,适用于复杂感染及多重耐药菌造成感染的抗菌治疗。其对革兰阳性病原体有抗菌活性,且对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)具有特别强力的活性;对耐G+病原菌包括耐青霉素和头孢曲松肺炎链球菌、替考拉宁不敏感CoNS、非vanA型肠球菌具有活性;对G+厌氧菌也具有活性。介绍了达巴万星的特性、制备工艺以及临床试验,指出了达巴万星具有独特的药动学性质,通过微生物发酵获得,在治疗导管相关的血源性感染以及皮肤和软组织感染已取得了良好的效果,是理想的第二代糖肽抗生素。     

公、母丁香乙醇提取物离体抑菌活性比较

采用生长速率法和孢子萌发法测定了公丁香和母丁香的乙醇提取物对5种病原菌（番茄灰霉病菌、水稻稻瘟病菌、黄瓜炭疽病菌、苹果轮纹病菌和玉米小斑病菌）的菌丝生长和3种病原菌（番茄灰霉病菌、稻瘟病菌和玉米小斑病菌）孢子萌发的影响。结果表明，提取物对两者均有一定的抑制作用：对于同一种病原菌来说，丁香的乙醇提取物对其孢子萌发的抑制效果好于对其菌丝生长的抑制效果；在相同的供试浓度下，公丁香的抑菌效果优于母丁香。     

真菌发酵酒精废弃物合成单细胞蛋白基质及菌种筛选

为了优选利用酒精废弃物生产单细胞蛋白（single cell protein,SCP）的最佳基质和菌种组合,从而实现其高值化利用,本文选取了黄酒加工废弃物（黄酒糟和米浆水）以及木薯酒精加工废弃物（木薯原糟和木薯酒糟上清液）4种基质作为发酵底物,并以产朊假丝酵母（Candida utilis）和白地霉（Geotrichum candidum）2种常见菌种作为筛选对象,通过摇瓶发酵实验,考察不同基质对菌种产SCP的影响,同时对比不同菌种利用酒精废弃物发酵合成SCP的能力,从而选出最优发酵基质和菌株。结果表明,以黄酒糟和米浆水按质量分数6%配比,同时接种产朊假丝酵母和白地霉进行混菌发酵4天时,SCP的产率及产量均达最优值,干物质产率可达3.91,产量可达90.22g/L,粗蛋白含量可达53.3%,且发酵产物中的氨基酸成分齐全,作为蛋白饲料具有良好的应用前景。