古尼拟青霉小孢变种的主要有效成分分析

对古尼拟青霉小孢变种RCEF0864的深层发酵产物进行了有效成分分析,结果表明,菌丝体和发酵液中氨基酸总量明显高于冬虫夏草生药;菌丝体中粗蛋白、总糖、麦角甾醇、甘露醇及腺苷等多种物质的含量亦高于冬虫夏草生药;RCEF0864深层发酵菌丝体和发酵液中均含有丰富的对人体健康非常重要的Zn、Fe、Ca等元素,尤以Ca的含量最高;用二苯代苦味肼基自由基(DPPH)-TLC法和酶标仪法对RCEF0864菌丝体和发酵液冻干粉甲醇提取物中的清除自由基活性物质进行了分析,发现2种提取物均具有较强的清除自由基活性,在浓度为5.0 mg/mL,37℃下保温10 min时,2种提取物对0.4 mg/mL的DPPH自由基的清除率分别为53.86%和59.66%。     

蛹拟青霉代谢产物清除自由基和抑制单胺氧化酶活性的研究

用二苯代苦味肼基自由基(DPPH)—TLC法和酶标仪法对1株蛹拟青霉RCEF0892摇瓶发酵菌丝体及发酵液甲醇-乙酸乙酯[V(甲醇)∶V(乙酸乙酯)=1∶1]提取物清除自由基活性进行了定性和定量分析,发现该菌株发酵液提取物具有较强的清除自由基活性,在浓度为5.0mg/mL,于37℃下保温10min时,它对0.4mg/mL的DPPH自由基的清除率可达79.92%。同时,以大鼠肝脏线粒体单胺氧化酶为靶标的体外实验发现,RCEF0892菌株菌丝体提取物具有较强的抑制单胺氧化酶活性,且其活性和浓度呈量效关系,其对大鼠肝脏线粒体单胺氧化酶的半数抑制浓度IC50为81.39μg/mL。     

细脚拟青霉深层发酵菌丝体核苷类成分分析

以已知核苷为标样,并以冬虫夏草生药作对比,利用反相高效液相色谱法对细脚拟青霉RCEF0441 深层发酵菌丝体中核苷类化学成分进行分析。结果表明,细脚拟青霉RCEF0441 菌丝体中主要含有胞苷、尿苷、鸟苷、肌苷、胸苷和腺苷6 种核苷,其中胞苷的含量为冬虫夏草生药的3 倍左右,肌苷和鸟苷的含量则分别是冬虫夏草生药的7 和9 倍左右,尿苷和腺苷的含量也显著高于对照品冬虫夏草生药(p<0.05)。     

蛹拟青霉液体深层发酵菌丝体抗氧化活性和抑菌活性分析

采用二苯代苦味肼基自由基(DPPH)酶标仪法和FOX试剂法对蛹拟青霉液体深层发酵菌丝体进行抗氧化活性研究;用滤纸片法和牛津杯法对菌丝体提取物进行抑菌活性分析。研究结果显示,菌丝体水相提取物具有较强的抗氧化活性,在样品浓度为2 mg/mL时,它对0.2 mg/mL的DPPH自由基的清除率达到92.35%,在FOX试剂法中活性达到了90.24%,明显高于其他溶剂提取物;抑菌试验结果表明,菌丝体水相提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉、绿色木霉的抑制效果优于其他溶剂提取物,乙酸乙酯相提取物对枯草芽孢杆菌的抑制作用最强,牛津杯法测定其抑菌圈直径达到17.86 mm。     

蝉拟青霉代谢产物抑制单胺氧化酶和抗肿瘤活性研究

以单胺氧化酶(MAO)为靶标对蝉拟青霉RCEF0947菌株发酵液和菌丝体甲醇乙酸乙酯提取物体外抑制单胺氧化酶活性进行研究,结果发现,RCEF0947 发酵液提取物对MAO-A 具有较强的抑制活性,其对单胺氧化酶MAOA的半数抑制浓度(IC50)为272.97μg/ml。而对于MAO-B 的抑制活性而言,当样品反应浓度为400μg/ml 时,发酵液和菌丝体提取物对MAO-B的IC50 分别为538.37μg/ml 和509.36μg/ml,经统计分析二者之间无显著性差异(p ＞ 0.05)。以中国仓鼠卵巢(CHO)细胞株作为模型,用Resazurin 法检测生长抑制率,对RCEF0947 菌株发酵液和菌丝体提取物进行体外抗肿瘤活性实验,结果发现,两种提取物均具有较强的体外抗肿瘤活性,两种提取物对CHO 细胞株的IC50 分别为122.35μg/ml 和171.93μg/ml。     

红曲菌发酵中添加紫苏叶提取物对其抗氧化活性的影响

通过将紫苏叶提取物添加到红曲菌GM075发酵培养基中进行发酵,考察了发酵产物中抗氧化活性物质Dimerumic acid (DMA)的含量变化以及发酵液离心后上清液的DPPH自由基和ABTS自由基清除活性.结果表明,添加超声法提取的紫苏叶滤液对红曲发酵产DMA的影响最为明显,使发酵液中DMA浓度达到了(3.104±0.086) g/L,与对照相比提高了46.94%;且红曲发酵液的自由基清除活性也有显著提高,对DPPH自由基清除活性的TEAC值为(1.800±0.306) mmol/L,比对照提高了157.96%,对ABTS自由基清除活性的TEAC值为(7.124±0.061) mmol/L,比对照提高了37.86%.     

羊肚菌液体发酵培养基的优化及发酵产物抗氧化活性研究

为提高羊肚菌液体发酵产物中多酚的含量，探究发酵液的抗氧化活性，通过优化液体发酵培养基的成分及碳源、氮源和无机盐物质的添加量，采用单因素和响应面设计得到羊肚菌发酵液中多酚含量最高的发酵培养基为:0.5%土豆淀粉、4%大豆蛋白、0.3%磷酸二氢钾。在此条件下，羊肚菌发酵液中多酚含量可以达到1.02 mg/mL。采用体外抗氧化试验评价发酵产物的抗氧化活性，结果表明发酵产物具有较强的自由基清除作用及还原能力，具体表现为发酵液冻干粉对DPPH自由基清除率的IC50值为1.83 mg/mL，对ABTS自由基清除率的IC50值为4.81 mg/mL，对羟自由基清除率的IC50值为0.78 mg/mL，对铁离子的还原能力在发酵液冻干粉浓度为15 mg/mL时，FRAP值为0.75 mmol/L。研究结果为羊肚菌液体发酵产物的开发提供参考。     

响应面法优化黄浆水发酵液制备工艺及其抗氧化活性研究

采用植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)和清酒乳杆菌(Lactobacillus sakei)3种乳酸菌对黄浆水进行组合发酵,以发酵液DPPH自由基清除率为评价指标,研究发酵温度、发酵时间、脱脂乳粉添加量、葡萄糖添加量和接种量对发酵液的影响。在单因素试验基础上,采用响应面法优化制备高抗氧化活性黄浆水发酵液的工艺条件。结果表明最佳发酵参数为:接种量1%、发酵温度37℃、发酵时间37.50 h、脱脂乳粉添加量8%、葡萄糖添加量5%。在此条件下制备的黄浆水发酵液DPPH自由基清除率为82.36%。抗氧化活性试验表明:黄浆水发酵液提取物抗氧化能力得到显著提升,其清除DPPH自由基、羟自由基和ABTS自由基的半抑制质量浓度(IC50)分别为2.03 mg/mL、1.12 mg/mL和0.30 mg/mL。     

灵芝双向发酵液冻干粉抑制环氧化酶-2及抗氧化活性的研究

该研究通过液体深层发酵制备灵芝、灵芝-玉竹、灵芝-桦树茸、灵芝-人参以及灵芝-三七发酵液冻干粉，采用显色法结合紫外分光光度法测定发酵液冻干粉总糖、总皂苷及总多肽的含量，同时测定其对DPPH自由基及ABTS阳离子自由基清除能力以及环氧化酶-2(cyclooxygenase, COX-2)的抑制能力，评价其体外抗氧化及抑制COX-2的活性，以此筛选出抑制COX-2及抗氧化活性最优的灵芝发酵组合方式。研究结果表明，相较于灵芝发酵液冻干粉，灵芝-玉竹发酵液冻干粉的DPPH自由基及ABTS阳离子自由基清除能力及COX-2抑制能力最强，并且其总皂苷及总多肽的含量分别为灵芝发酵液冻干粉的1.26、1.27倍，含量显著升高(P<0.05)。因此该研究得出结论，灵芝-玉竹发酵液冻干粉抑制COX-2及抗氧化活性能力的显著增强，与其总皂苷及总多肽含量的显著升高存在一定的关系，通过添加玉竹进行灵芝发酵为最优的抑制COX-2及抗氧化发酵组合方式，这为灵芝双向发酵工业化生产提供了思路，也为进一步研究发酵液各个成分含量与其活性的关系奠定了基础。     

中国弯颈霉提取物抗氧化和抗肿瘤体外活性研究

中国弯颈霉(Tolypocladium sinense)分离自冬虫夏草,其生长最适温度25～28℃,最适pH6～7。在液体培养基(葡萄糖 4%、蛋白胨 0.5%、酵母膏1%、KH2PO4 0.1%、MgSO4 0.05%)中,经过28℃下摇床(150r/min)培养4～10d 后,菌丝体生物量达8.49～9.73g/L。其菌丝体石油醚、乙酸乙酯、无水乙醇和蒸馏水提取率分别为3.51%、1.62%、4.84%、23.33%,菌丝体多糖提取率为5.31%。各提取物对DPPH 自由基均具有清除作用,2mg/ml 多糖具有较强的清除作用,清除率为49.13%;菌丝体多糖(0.08mg/ml)能显著地清除羟自由基,清除率为82.5%。MTT 法检测发现乙酸乙酯提取物具有较强的抑制白血病细胞增殖作用;作用于K562 和SHI-1 细胞2d 后,乙酸乙酯提取物IC50 分别为26.55、17.75μg/ml;该提取物对正常细胞(人PBMC 和小鼠骨髓细胞)的抑制作用较弱;AO/EB 双染和TUNEL 法检测提示菌丝体的乙酸乙酯提取物可以诱导K562 细胞凋亡。上述实验结果表明,中国弯颈霉具有抗氧化和抗肿瘤方面的应用开发前景。     

油茶蒲不同溶剂粗提液的总黄酮提取率与抗氧化活性比较

为探索油茶蒲的有效利用途径,采用各具5个体积分数梯度的5种有机溶剂对油茶蒲进行超声辅助浸提而得到25种粗提液,研究比较了各粗提液的总黄酮提取率和清除DPPH·的能力。结果表明:总黄酮提取率最高的5种溶剂及其对应的总黄酮提取率依次是60%丙酮溶液(6. 28%)、60%乙醇溶液(5. 24%)、80%甲醇溶液(4. 82%)、60%1,3-丁二醇溶液(4. 40%)、60%乙酸乙酯-乙醇溶液(4. 13%);清除DPPH·能力最强的5种粗提液及其对应的清除率依次是100%乙醇溶液提取物(92. 78%)、60%乙酸乙酯-乙醇溶液提取物(92. 69%)、100%1,3-丁二醇溶液提取物(89. 68%)、100%甲醇溶液提取物(86. 54%)、100%丙酮溶液提取物(81. 99%)。黄酮提取率最高的油茶蒲提取物所对应的DPPH·清除能力并不是最强的,说明油茶蒲提取物中除了黄酮以外,可能还有多酚、皂素、多糖等其他抗氧化活性成分。适合油茶蒲黄酮利用的最佳提取剂是60%乙酸乙酯-乙醇溶液,总黄酮提取率达4. 13%,所对应提取物对DPPH·清除率达92. 69%,是一种适应工业化开发利用油茶蒲黄酮的理想溶剂。     

蛇菰提取物体外抗氧化活性研究

采用DPPH·法及Fe3+ 还原力法对蛇菰提取物的抗氧化活性进行研究,分别测定蛇菰乙醇提物、石油醚提取物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、水层部分、水提粗多糖及碱提粗多糖的抗氧化作用,同时以VC 作为阳性对照。结果表明：蛇菰提取物具有较强的抗氧化活性,尤其是乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、总醇提取物及水提粗多糖;它们对DPPH·的清除作用与VC 相当,其中乙酸乙酯提取物IC50 值为6.0μg/mL,活性略高于VC,同时以上提取物对Fe3+ 也具有很强的还原能力。     

20种多孔类真菌乙醇提取物体外抗氧化和抗肿瘤活性的比较研究

采用清除DPPH自由基的方法和Alamar Blue法比较20种多孔类真菌乙醇提取物抗氧化活性和对3株癌细胞体外增殖的影响,对它们的子实体和菌丝体乙醇提取物进行测定。结果表明：20种多孔菌子实体乙醇提取物清除自由基和抗肿瘤活性大部分都强于菌丝体乙醇提取物,其中有10株多孔类真菌子实体乙醇提取物质量浓度在5mg/mL时,自由基清除率超过70%;质量浓度在500μg/mL时,对人非小肺癌细胞NCI-H460和人肝癌细胞HepG2两株癌细胞抑制率在90%左右,而对耐药细胞株Bel-7402/5-Fu抑制率略低于正常细胞株。     

荷叶离褶伞子实体、菌丝体和发酵液营养成分比较分析

检验荷叶离褶伞子实体、菌丝体及菌丝体发酵液中的营养成分。粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、粗多糖、维生素、氨基酸、矿物质的种类与含量分别按食品营养成分测定的国家标准方法进行;粗多糖含量按《保健食品检验与评价技术规范》(2003 版)检验。结果表明：该菌子实体、菌丝体和菌丝体发酵液中分别含有粗蛋白21.4%、28.3%、0.084%;粗脂肪1.44%、2.78%、0.11%;粗纤维9.52%、5.32%(菌丝体发酵液未测);碳水化合物53.04%、54.7%、2.82%;粗多糖3.55%、1.77%、0.12%;氨基酸总和分别为16.82、19.8、0.088g/100g,氨基酸种类分别为17、18、6 种;其中含赖氨酸1.13、1.18、0g/ 100g;维生素种类分别为5 、5 、4 种,其中含烟酸21.2、25、0.084mg/100g;矿物质分别含有7、5、1 种,其中含硒0.013、0.080、0mg/kg。该菌子实体、菌丝体及菌丝体发酵液营养丰富,开发利用价值大。     

桑黄菌丝体与子实体成分的比较分析

为进一步开发和利用桑黄（Phellinus igniarius）,通过发酵获得桑黄菌丝体,并对桑黄子实体和菌丝体的一般营养成分及主要功能成分含量进行分析比较,利用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率和对SW620、HepG2肿瘤细胞的抑制率进行主要成分活性的比较。结果表明,桑黄菌丝体和子实体均含有蛋白质、多糖、氨基酸、脂肪、纤维、矿物元素等多种营养成分,其组成基本一致。主要营养成分中,桑黄菌丝体中水分、灰分含量显著低于桑黄子实体（P＜0.05）,粗纤维含量极显著低于桑黄子实体（P＜0.01）,而粗蛋白、粗脂肪含量极显著高于子实体（P＜0.01）;在所测定的17 种氨基酸中,二者氨基酸种类一致,菌丝体氨基酸总量为25.11%,子实体氨基酸总量为4.69%;多糖、黄酮、三萜3 种活性成分在桑黄子实体中含量极显著高于菌丝体（P＜0.01）,其中子实体多糖、黄酮、三萜DPPH自由基最高清除率分别为77.14%、61.37%、49.97%;桑黄菌丝体、子实体多糖对结肠癌SW620细胞的抑制率最高可达21.45%和32.86%,对肝癌HepG2细胞的抑制率最高可达37.91%和51.29%。这些结果进一步说明桑黄菌丝体和子实体营养成分组成基本一致,含量丰富,液体发酵所得菌丝体可以缓解野生桑黄子实体匮乏的局面,具有同样的应用价值和开发前景。     

女贞果实的抗氧化性测定

以南京产女贞果实为原料,考察不同提取剂对女贞果实不同部位(全果、果皮、核壳和果仁)提取所得提取液对DPPH 自由基的清除效果,比较向阳面和向阴面不同生长期女贞果实的乙醇提取液对DPPH 自由基的清除效果,研究固体状乙醇提取物的抗氧化性,测定女贞果实抗氧化的主要化学成分和固体状乙醇提取物的感官指标。结果表明：极性溶剂提取液表现出较强的清除DPPH 自由基的能力;不同提取剂对女贞果实不同部位的提取物清除DPPH 自由基能力的顺序为：甲醇、水的提取物为果皮＞全果＞核壳＞果仁,丙酮、乙酸乙酯、乙醇的提取物为果皮＞全果＞果仁＞核壳;提取物在低浓度区对DPPH 自由基的清除作用与浓度成正相关,且斜率大大高于高浓度区,而高浓度区对DPPH 自由基的清除作用与浓度的关系较复杂,表现为与提取剂密切相关。另外果实以成熟初期的提取物对DPPH 自由基清除率最高,在成熟中期和过成熟期后均有不同程度下降,而且向阳面生长果实提取物对DPPH 自由基的清除率显著高于向阴面果实提取物。抗氧化比较实验得到所制备的固体状女贞全果乙醇提取物抗氧化效果(IC50=5.38～10.46)与VC(IC50=8.59)相当,低于茶多酚(IC50 =1.70)。另外,水溶性好、呈深咖啡色固体状的乙醇提取物有望成为一种新型高效抗氧化剂。     

拐枣不同提取物的体外抗氧化作用

对拐枣子、拐枣和拐枣枝体积分数为80%的乙醇溶液浸提物抗氧化性进行比较,再选取拐枣为试验材料,经体积分数为80%的乙醇浸提浸膏分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇萃取,福林酚法测定不同极性部位多酚含量,通过测定DPPH自由基、ABTS自由基的清除率,研究拐枣萃取物的抗氧化作用。结果表明,拐枣对DPPH和ABTS自由基清除率分别为87.07%和95.67%,其抗氧化性高于拐枣子及拐枣枝;拐枣乙醇提取物浸膏不同极性萃取物中,乙酸乙酯萃取物的抗氧化能力最强,其多酚含量为202.8 mg/g,对DPPH和ABTS自由基清除作用的IC50分别为182 μg/mL和60 μg/mL,最大清除效率分别为94.0%和98.57%。试验表明拐枣具有较好的抗氧化能力,具有开发利用的价值。     

头孢霉AL031真菌固体发酵产物抗氧化、抑菌活性研究

基于原有固体发酵条件,以提取物清除DPPH自由基的能力为评价指标,探讨头孢霉AL031真菌固体发酵的最佳时间和次生代谢产物的提取条件。用DPPH法和光敏化合物微生物法测定其次生代谢产物的抗氧化活性,微生物纸片法测定其抑菌活性。结果表明:头孢霉AL031真菌固体发酵的最佳培养时间为9d,最佳提取条件为以乙酸乙酯浸泡,其提取物对DPPH自由基的EC50为5.84μg/mL,光敏化合物微生物法亦证明其具有良好的抗氧化活性。抑菌实验表明头孢霉AL031真菌的次生代谢产物具有广谱抑菌作用。