分子筛固定氨基酰化酶I的研究

以Y型分子筛为载体,分别采用吸附法、吸附-戊二醛交联法、偶联法和偶联-重氮法4种方法对氨基酰化酶I进行固定化。 研究发现偶联法获得的分子筛固定化酶的活性最高,达0.258 IUmg-1,并对分子筛固定化酶最适pH值、最适反应温度、重复使用性和米氏常数进行了测定;结果表明该载体适合氨基酰化酶I的固定,可以获得较高的酶活力,分子筛固定化酶的最适pH值、最适反应温度都有所拓宽。     

弱碱性大孔树脂固定化氨基酰化酶的性能研究

对以弱碱性大孔阴离子树脂二乙胺基乙基羟乙酯(DEAE-E/H)为载体制备得到的固定化氨基酰化酶的性质进行系统研究。结果表明,DEAE-E/H固定化氨基酰化酶具有很好的热稳定性。与自由酶相比,固定化酶的最适反应温度分别由47℃变为57℃,pH值由7.0变为6.5,并且最适反应条件范围明显变宽。Co2+对固定化酶活力具有较强的激活作用,其最佳浓度为1×10-3mol/L。分别对其在间歇和连续操作过程巾的反应进行研究,结果表明,固定化酶具有较高的操作稳定性。     

大孔树脂D380固定化硫酸软骨素裂解酶

目的以大孔树脂D380为载体,戊二醛为交联剂,进行硫酸软骨素裂解酶(ChSase)的固定化,并考察固定化酶的酶学性质。方法分别考察加酶量、吸附温度、吸附时间、吸附pH值、戊二醛交联浓度、交联时间及交联温度对ChSase固定化效果的影响,并分析该固定化酶的最适反应温度、最适反应pH值、米氏常数(Km)及其操作稳定性。结果ChSase的最佳固定化条件为:加酶量150U/g树脂,吸附温度15℃,吸附时间6h,吸附pH值7.0,戊二醛交联浓度0.01%,交联时间3h,交联温度4℃。以此条件制备的固定化酶,其酶结合效率可达79.1%。该固定化ChSase的最适反应温度为45℃;最适反应pH值为7.0;Km达1.46×10-1g/L,较游离酶高;具有较好的操作稳定性。结论以大孔树脂D380为载体固定化ChSase是可行的,所得固定化酶有较高的使用效率和稳定性,适合于工业化生产。     

漆酶在介孔分子筛MCM-41上的固定化研究

以介孔分子筛MCM-41作为漆酶固定化的载体,采用物理吸附法进行固定化,考察了时间、pH和给酶量对固定化效果的影响,并对固定化酶的活性及其稳定性进行了研究,讨论了影响固定化过程和固定化酶性质的主要原因.结果显示,在pH为3时,酶和载体比例为62.5 mg·g-1时吸附12 h固定化效果最好,固定化酶活性回收率为50%;与游离漆酶相比,MCM-41固定化漆酶的最适反应pH略有升高,最适温度没有变化,其pH稳定性和热稳定性都显著优于游离漆酶,固定化漆酶具有可重复操作的性质,与底物反应反复操作10批次后剩余活性为40%.以上表明,MCM-41作为固定化漆酶的一种新型载体材料,有利于改善漆酶的稳定性和实用性.     

SBA-15固定化漆酶及其稳定性研究

以大孔径介孔分子筛SBA-15为载体,用吸附法对漆酶进行固定化,以2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐为底物考察了漆酶的最适pH值以及固定化体系中给酶量对固定化漆酶活性及其稳定性的影响。结果表明,在pH值为3时,漆酶具有较好的活性;固定化漆酶的活性随着酶和载体质量比的升高先升高后降低,当酶和载体质量比为48 mg/g时,固定化漆酶的活性最高;与游离漆酶相比,固定化漆酶可以重复利用,经过8批次的反应后,固定化漆酶的剩余活性仍然达到85%以上,表现出良好的操作稳定性。     

Cu2+改性SBA-16固定化漆酶的研究

以介孔分子筛SBA-16为载体,用浸渍法将Cu2+负载于SBA-16上制备了Cu/SBA-16,然后用吸附法固定化漆酶,以2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐为底物考察了漆酶的最适pH值、固定化体系中的载酶量以及Cu2+对固定化漆酶活性的影响。结果表明,在p H值为3时,漆酶具有较高的活性;固定化漆酶的活性随着酶和载体质量比的升高先快速升高然后趋于稳定,当酶和载体质量比为96 mg/g时,固定化漆酶的活性达到较高值;负载Cu2+后,Cu/SBA-16固定化漆酶的活性与Cu2+负载量呈现一定的正相关性。     

氨基酰化酶固定化细胞光学拆分DL-丙氨酸

用具有氨基酰化酶基因的大肠杆菌工程菌构建固定化细胞,并对DL-丙氨酸进行酶拆分进行了实验研究。考察了温度、pH、底物浓度、金属离子和时间对酶促反应的影响。确定了氨基酰化酶固定化细胞光学拆分DL-丙氨酸中酶促反应的最佳工艺条件:pH=7.5,温度50℃,反应时间6h,Co2+离子浓度5×10-4mol/L,在该条件下,D-丙氨酸产率为87.2%,光学纯度为98.0%。     

以壳聚糖为载体固定化青霉素酰化酶的研究

介绍了以壳聚糖为载体固定化青霉素酰化酶需首先制备壳聚糖颗粒 ,使用戊二醛、甲醛、乙二醛 3种活化剂处理所得的壳聚糖颗粒 ,确定了以戊二醛为活化剂交联其上的氨基共价结合青霉素酰化酶的固定化方法。从戊二醛的浓度、pH值、固定化时间、固定化pH值、酶用量等条件摸索了最佳固定化条件 ,获得了酶活力为4 0 0 0 0U/ (g·h)、回收率为 5 0 %左右的固定化青霉素酰化酶。     

琼脂包埋法固定化α-淀粉酶特性的研究

以琼脂作为载体材料,采用包埋法固定化α-淀粉酶,并对其特性进行了研究.结果表明,该固定化酶最适pH 值为7.5、最适温度为55～ 58℃,具有较好的贮存稳定性和反应稳定性,18 d后该固定化酶的残余活力仍保留原酶活的71.6%左右,重复使用7次,酶活力下降不大,其酶活回收率达到78.8%.     

α-淀粉酶的固定化及其在邻硝基对甲基苯酚还原反应中的应用

以尼龙作为酶固定化载体材料,采用化学键合法固定α-淀粉酶,并对固定化前后酶的特性进行了研究。结果表明,与游离酶相比,固定化酶最适pH值从6．3提高到7．2,并且在较宽的pH值范围内显出较高的酶活性;固定化α-淀粉酶的最适温度为70℃,比游离酶的最适温度60℃高10℃,显示出较高的热稳定性;将固定化α-淀粉酶应用于邻硝基对甲基苯酚的还原反应,产率为37．09％;将固定化酶在4℃的水溶液中保存14d仍保留79．89％的酶活。     

用氨基化硅胶和甲醛固定脂肪酶的研究

以甲醛为偶联剂,将脂肪酶固定在3-氨基丙基硅胶上。以差热分析法测试了自然酶和固定化酶的热稳定性,并研究了反应介质的温度和pH值对自然酶和固定化酶活性的影响。自然酶和固定化酶的最适pH值都在7.5附近,但固定化酶的最适温度较自然酶低。另外,还测试了固定化酶在37℃的磷酸盐缓冲溶液中贮存的稳定性,与自然酶相比其贮存的稳定性有显著的提高,同时发现固定化酶在37℃的磷酸盐缓冲溶液中有一个恢复活力的过程。     

固定化漆酶对二氯酚的脱氯作用

采用活性炭吸附与海藻酸钙凝胶包埋相结合的方法使Coriolus versicolor漆酶固定化.利用固定化漆酶对2,4-二氯酚进行脱氯反应,其最适pH值为4.5、最适温度为40℃.与游离酶相比,固定化酶反应的pH值和温度范围更宽,其稳定性得到了明显改善.使用柱式固定化酶反应器处理2,4-二氯酚,在批式反应工艺条件下,当底物浓度为1 mmol•L^-1、反应3～5 h, 2,4-二氯酚的去除率可达99.5%以上（脱除的氯离子浓度达0.5 mmol•L^-1）.连续8批反应的结果表明：固定化漆酶性能稳定、催化效率高,在环境污染废水治理方面具有良好的应用前景.     

磁性微粒对青霉素G酰化酶的固定化研究

将无机磁性粒子Fe3O4与有机材料海藻酸钠结合起来制成一种复合的磁性微粒,并将其进行表面修饰,通过化学共价法来固定青霉素G酰化酶。通过扫描电镜等对微粒进行形态学观察,并用傅立叶红外图谱表征微粒表面修饰基团。酶学性质研究表明,该微粒固定化的青霉素G酰化酶的最适pH值为7.5,最适温度为40℃。固定化酶与底物的亲和力有所降低,但是稳定性显著提高。重复催化研究结果表明,固定化酶具有比游离酶更广泛的温度及pH值适用范围,并且具有良好的热稳定性、可循环使用性和贮存稳定性。     

青霉素酰化酶在新型复合载体上的固定化研究

在反应温度为45℃、反应时间为6 h、丙烯酰胺(AM)质量浓度为40 g/L、引发剂用量为单体质量1%的条件下制得PAM-SiO2复合载体,利用红外光谱表征了其化学结构,热失重法测定其接枝量为21%。在所制PAM-SiO2复合载体上固载青霉素酰化酶,其固载最适条件为:戊二醛用量0.1 mmol/L,pH值7.64,给酶量1%,温度42℃,时间11 h~12 h。此条件下所得固定化酶的活力为34000 U/mL;测得所制固定化酶的最适pH值为7.82,最适温度为45℃。     

多孔玻璃珠固定化脂肪酶及其催化合成生物柴油

以多孔玻璃珠为载体,采用共价法对假丝酵母99-125脂肪酶进行了固定,对比了固定化酶与游离酶的最适反应温度、pH值以及热稳定性.并以所制备的固定化酶为催化剂,在微水体系中利用菜籽油合成生物柴油,考察了溶剂量、体系水含量、甲醇等因素对固定化酶催化性能的影响,研究了固定化酶的操作稳定性.     

磁性聚胺基微球固定化脂肪酶催化性质

以平均粒径为62.44μm,等电点为9.6的磁性聚胺基微球为载体吸附固定化猪胰腺脂肪酶。结果表明:固定化酶的最适反应pH比自由酶低,最适反应温度比自由酶高,对金属离子和温度具有更好的耐受性。固定化后,脂肪酶动力学米氏常数减小,最大反应速度下降,酶催化反应活化能分别为17.16 kJ/mol(固定化酶)和15.28 kJ/mol(自由酶)。     

介孔分子筛SBA-16固定化木瓜蛋白酶性质的研究

以介孔分子筛SBA-16为载体采用物理吸附的方法对木瓜蛋白酶进行了固定化,研究了固定化条件对酶的相对活性的影响及在不同pH值下游离酶和固载酶的pH稳定性。实验结果表明当1 g载体的給酶量为30 mg,固定化时间为2.5 h,pH值为7.0时,固定化木瓜蛋白酶的相对活性最好。与游离酶相比,固定化酶的pH稳定性有明显改善。     

重组头孢菌素C酰化酶的固定化研究

将含头孢菌素C(CPC)酰化酶的重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET28-CPCAcy在50L发酵罐中发酵,发酵液OD600可达19.5,酶活达到11 542U·L~(-1);CPC酰化酶粗酶液经1%活性炭纯化后,比酶活由6.56U·mg~(-1)提高到10.77U·mg~(-1);然后将纯化的CPC酰化酶共价结合固定在氨基载体LX-1000HA和环氧基载体LX-1000EPC上,并对固定化酶的热稳定性及pH值稳定性进行考察。结果表明,LX-1000HA固定化酶的初始酶活较LX-1000EPC固定化酶低,但其热稳定性、pH值稳定性以及酶与载体的结合强度均高于LX-1000EPC固定化酶;并且在固定化酶投加量相同时,LX-1000HA固定化酶的催化性能优于LX-1000EPC固定化酶。对LX-1000HA固定化酶进行催化批次实验,在催化39批次时达到半衰期。     

多孔玻璃微珠的制作及其固定α-淀粉酶的研究

用分相法和填充法分别制作了两种载体多孔玻璃微珠FXBL和TCBL,用共价偶联法分别固定α-淀粉酶,确定了其最佳固定条件和最佳应用条件,并研究了固定化酶的性质。主要结论如下:①最佳固定条件为:温度10℃;pH=6.2;给酶量TCBL 2.6 g/LF、XBL 2.4 g/L;时间12 h;②最佳应用条件为:温度75℃,比自由酶高5℃;pH值TCBL固定化酶为5.2、FXBL固定化酶为5.4,分别比自由酶的最适pH值6.0低0.8和0.6个pH值单位;③固定化酶的主要性质为:在80℃受热1 h,固定化酶的活力下降小于7%,而自由酶活力则下降至63%;FXBL固定化酶和TCBL固定化酶分别使用5次和8次还可以保持60%的活力。     

AS1.398中性蛋白酶的固定化研究

利用壳聚糖为载体，戊二醛为交联剂，对AS1．398中性蛋白酶进行了固定化研究，固定化反应的最佳条件是采用1％的戊二醛浓度，壳聚糖和戊二醛的交联反应时间为4h，加入酶固定化反应12h，固定化酶的最适温度35℃，最适pH值8．0。得到的固定化酶的活力回收平均为82．5％，固定化酶的稳定性能好于游离酶。