基于微滴数字PCR技术的婴幼儿配方乳粉中双歧杆菌定量检测及应用

应用微滴式数字聚合酶链式反应（droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR）技术,建立婴幼儿配方乳粉中双歧杆菌定量检测方法。以双歧杆菌的单拷贝特异性基因rpsL为目标基因设计引物探针,对ddPCR条件进行优化,考察方法的特异性、灵敏度和重复性,并与平板计数方法进行对照验证。结果表明,建立的方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性。细菌纯培养液的检出限为296 CFU/mL,模拟样品检出限为7 300 CFU/g,不与10 种近缘乳酸菌发生交叉反应,且重复性较好,采用已建立的ddPCR方法和平板计数方法对市售婴幼儿配方乳粉样品进行检测,2 种方法测定值结果偏差小于10%,结果一致性较好。本研究建立的ddPCR方法对婴幼儿配方乳粉中的双歧杆菌定量检测能够更快速、灵敏、准确,具有一定的应用前景。     

多重real-time PCR技术快速鉴别特种乳中的乳源动物成分

建立一种特种乳中乳源动物成分快速鉴别多重实时聚合酶链式反应技术。通过筛选建立8?种不同乳源物种检测的多重实时聚合酶链式反应方法,在一个反应体系里可同时检测4?种乳源的特异性靶基因,绝对灵敏度达0.1～5?pg/μL,检出限可达0.1%。同时,建立了高效的DNA提取方法,样品裂解后可在12?min左右完成96?个样品的DNA提取,大大缩短了样品前处理时间。采用该方法对市售特色乳产品进行调查,结果显示标识不准确的产品比例达36.36%。     

一种羊乳粉的微滴式数字PCR定量分析方法

基于市场上对乳品溯源技术的迫切需求,以微滴式数字聚合酶链式反应技术对羊乳粉中的乳源进行准确判别。基因检测技术对判别乳源来源方面克服了成分复杂、检测时间长等的缺点,更加精准地针对本源进行检测,减少了误判的可能性。本实验以羊乳粉质量、DNA质量浓度及其拷贝数为实验指标,建立了以羊乳粉拷贝数与质量的关系式,准确地判断出羊乳粉的质量,其公式为M=（C－4.75）/3.56,其中,M代表羊乳粉的质量（mg）,C代表每微升的拷贝数（copies/μL）,该方法的建立对现有市场上的羊乳粉定量检测提供了新的方法和思路。     

婴幼儿配方乳粉中强化维生素工艺的研究

一前言自从国务院1980年以国发[80]262号文批转了轻工、粮食、商业三部《关于解决婴幼儿食品问题的报告》以来,婴幼儿食品得到了迅速发展,除全国有29个儿童食口厂生产儿童食品外,还有近50家乳品厂生产婴幼儿配方乳粉,到1990年全国婴幼儿配方乳粉的年产量已达25000T。这些配方乳粉的营养素比较全面。几乎所有的配方乳粉中都强化了维生素。维生素分为脂溶性和水溶性两大类,前得包括维生素A、D、E、K;后者有B_1(又称硫胺素)、     

我国婴幼儿配方乳粉抽检结果研究

本文通过汇总我国2015-2018年对婴幼儿配方乳粉的监督抽检结果,概述婴幼儿配方乳粉的监督抽检情况,并分析生产企业的研发、配方设计、生产及检验等环节,提出婴幼儿配方食品安全监管对策。     

我国婴幼儿配方乳粉的营养素分布

目的对我国婴幼儿配方乳粉产品的营养素进行统计分析,为相关营养和产品研究提供参考。方法选取获注册的1195个婴幼儿配方乳粉产品,分析其营养素分布情况。结果我国婴幼儿配方乳粉的能量集中在2000～2100 kJ/100 g, 1段配方蛋白质、脂肪和碳水化合物含量集中在10.5～12.0 g/100 g、23.7～28.1 g/100 g和50.8～58.0g/100g,供能比近似1:4.5:4.5;2、3段配方蛋白质、脂肪和碳水化合物含量基本集中在13.8～19.2 g/100 g、16.9～25.6 g/100 g和48.7～58.6 g/100 g,供能比近似1:2.9:3.1;同适用年龄段配方的维生素和矿物质指标差异比较大, 2、3段配方的维生素和矿物质差异比较接近;超过80%的配方会选择5～11种营养强化成分。结论婴幼儿配方乳粉产品的营养素分布差异性较大,考虑产品推荐摄入量的差异,婴幼儿摄入的营养素具有较大差异,可跟踪评价这种差异对婴幼儿生长发育的影响。     

近红外光谱快速检测婴幼儿配方乳粉中主要成分的方法研究

目的研究利用近红外光谱技术快速检测婴幼儿配方乳粉中主要成分的方法。方法收集12个品牌的婴幼儿配方乳粉共100份样品,采集10 000~4 000 cm-1波数范围内的近红外光谱,采用主成分回归和偏最小二乘法建立校正模型,并对比光谱预处理方法对模型的影响。结果采用偏最小二乘法建模,光谱采用标准正态变量变换预处理,模型预测效果最佳,主要成分蛋白质、脂肪、膳食纤维、水分、灰分、可获得碳水化合物和能量的预测方差分别为98.44%、97.40%、96.18%、96.74%、96.97%、96.55%和95.35%,估计标准误差分别为0.354 2、0.473 8、0.201 4、0.105 8、0.093 61、0.520 7和13.64。对模型进行外部验证,将预测样品的7项主要成分的预测结果与实验室检测结果进行比较,相对误差及相对偏差均在5.00%以下,7项主要成分符合国家标准的精密度的要求。结论本方法能快速有效的测定婴幼儿配方乳粉中蛋白质、脂肪、膳食纤维、水分、灰分、可获得碳水化合物的质量分数及能量的含量。     

我国婴幼儿配方乳粉配方工艺及注册情况分析

婴幼儿配方乳粉生产工艺直接影响婴幼儿配方乳粉的质量安全。根据我国《婴幼儿配方乳粉产品配方注册管理办法》要求,婴幼儿乳粉生产工艺说明是需提交的婴幼儿配方乳粉产品配方注册材料之一。本文系统梳理我国婴幼儿配方乳粉的生产工艺现状及各生产工艺特点,并对我国婴幼儿乳粉注册配方进行多维度统计汇总,进一步掌握我国婴幼儿配方乳粉注册生产工艺情况。通过研究,可指导婴幼儿配方乳粉生产企业根据配方选择合适的生产工艺,并为监管部门了解配方工艺,开展日常监督管理检查提供数据支撑。     

市售婴幼儿配方乳粉中脂肪酸组成分析

对市售的10种不同品牌婴幼儿配方乳粉中脂肪酸组成进行了检测及分析。结果表明:共检出脂肪酸24种,不同品牌乳粉的脂肪酸组成及含量差别很大,棕榈酸含量介于14. 77%与35. 72%之间,亚油酸含量最高达27. 07%,最低仅有4. 68%,7种产品可检出DHA、AA,均未检出EPA;除了1种产品的亚油酸及α-亚麻酸含量偏低,其余脂肪酸含量均符合国家标准,检测结果与母乳之间仍存有差异。婴幼儿配方乳粉的脂肪酸仍需要进行优化以接近母乳来满足婴幼儿的营养需求。     

婴幼儿配方乳粉中污染物风险评估体系的探讨

在国内外婴幼儿配方乳粉安全问题频发的背景下,针对乳粉的污染物风险分析并进行评估在保障食品安全方面有着极为重要的意义.本文以婴幼儿配方乳粉为研究对象,分别从原料、加工和包装环节对污染物的风险评估进行探讨,探讨内容包括了原料乳中常见的微生物污染,乳粉加工过程中可能存在的各类元素或重金属污染,以及包装过程中存在的化学物质迁移...     

实时荧光聚合酶链式反应检测肉制品中的鸭源性成分

通过鸭的肌动蛋白β-actin保守基因设计可特异检测鸭肉成分的引物和探针,建立实时荧光聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）技术检测鸭肉的方法,并通过模拟肉样和市售样品检测方法的准确性和适用性。结果表明：该方法可以特异性检测出麻鸭和草鸭成分,而对猪、牛、羊、鸡等DNA均没有扩增,检测灵敏度可达到1 pg DNA;通过模拟肉样检测确定最低质量分数检测限为0.01%;市售样品的检测结果表明,该方法能很好地应用于市场,满足市场检测需求。     

三重real-time PCR同步检测黄牛、水牛和牦牛成分

为准确快速地鉴定黄牛、水牛和牦牛的成分,研发具有这3 种牛特异性的引物和探针,并建立单重、双重和三重实时聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction,real-time PCR）方法,同步检测上述3 种牛的成分。单重real-time PCR检测时,3 种牛的检测灵敏度均为0.025 ng/μL;双重real-time PCR检测时,两两组合的引物探针含量比例为1∶1时,黄牛的检测灵敏度降低至0.1 ng/μL,而水牛和牦牛仍为0.025 ng/μL;对三重real-time PCR检测体系进行优化,当黄牛、水牛和牦牛3 组引物探针的含量比例为3∶3∶2时,检测灵敏度最佳,黄牛和水牛的检测灵敏度可达到0.1 ng/μL,而牦牛的灵敏度仍可达到0.025 ng/μL。但上述双重和三重real-time PCR检测的灵敏度,是建立在3 种牛的含量比例为1∶1∶1的情况下,若3 种牛的比例差异较大,特别是黄牛和牦牛的含量比例差异较大时,如比例为9∶1时,含量低的成分会存在漏检。因此,在对整块肉的样品进行检测时,可采用三重real-time PCR的方法同步检测3 种牛的成分;若样品可能为上述3 种肉的为混合物,如肉糜、肉松等,则建议采用单重real-time PCR检测。     

G-四联体与聚合酶链式反应联用可视化检测沙门氏菌

建立对沙门氏菌的G-四联体与聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）联用可视化检测方法。以沙门氏菌属特异性基因invH为检测目标,设计5’端含有G-四联体互补序列的上下游引物,通过PCR的特异性识别并扩增目标序列,获得大量含G-四联体的双链DNA,变性后与氯高铁血红素结合生成具有过氧化物酶活性的模拟酶（DNAzyme）,并催化H2O2与2,2’-联氮-双(3-乙基-苯并噻唑琳-6-磺酸)二胺盐由无色变为绿色,实现G-四联体与PCR联用对沙门氏菌的可视化检测。在优化的检测体系下,沙门氏菌基因组的质量浓度对数与421 nm处的吸光度具有良好的线性关系,其回归方程为y=0.129 9x＋0.217 9,R2=0.994 5,线性范围0.07～771.6 ng/μL,灵敏度为0.07 ng/μL。特异性分析表明：此方法适用于沙门氏菌属的检测,可成功应用于人工污染沙门氏菌牛奶的检测,检出限为1.2×102 CFU/mL。通过检测30 种市售样品,发现其结果与国标检测方法结果一致。本研究为食源性致病菌的检测提供了新的策略。     

我国市售婴儿配方乳粉油脂配料使用情况分析

目的:了解我国市售婴儿配方乳粉的油脂配料使用情况及脂肪酸提供情况,为提升婴儿配方乳粉的营养水平及制定产品相关标准提供参考。方法:多渠道收集婴儿配方乳粉标签信息,统计分析油脂配料的种类、组合、最高添加量构成比及标识含量,比较全脂乳产品与脱脂乳产品、牛乳基产品与羊乳基产品、高必需脂肪酸产品与全部产品间的差异。均数和率的比较分别采用t检验和卡方检验。结果:共纳入269个婴儿配方乳粉。配料表分析显示,85%的产品使用了4种及以上的油脂配料,葵花籽油和椰子油在全部产品中的添加率最高,分别为88%、76%。牛、羊乳基配方粉的油脂配料使用情况存在差异,牛乳基配方粉中脂肪、亚油酸及α-亚麻酸的标识含量略高于羊乳基配方粉(P<0.05)。脱脂乳配方粉中,棕榈油添加率为32%,显著高于全脂乳产品(P<0.05)。44例使用了棕榈油的产品中仅有4例强化了1,3-二油酸2-棕榈酸甘油三酯。结论:牛、羊乳基配方粉中的必需脂肪酸标识含量基本一致。现市售婴儿配方乳粉以多种油脂组合使用的方式,以尽可能模拟母乳脂肪酸模式,但有些油脂类原料使用的科学性还有待进一步研究。     

2种检测变形杆菌PCR方法的比较研究

选取atpD基因作为靶序列设计了2对引物,分别采用不同的PCR扩增条件,对3株变形杆菌属标准菌株,67株样品分离株及13株非变形杆菌属菌株进行扩增实验,结果2种PCR方法对3株标准菌株和66株样品分离株分别扩增出348 bp和596 bp的特异性片断,实验结果呈阴性的1株分离株经全自动微生物鉴定仪鉴定为阴沟肠杆菌。13株非变形杆菌属菌株均未有特异性条带产生。2种PCR方法检测变形杆菌,均具有快速、准确、灵敏、特异的优点。建立的引物2的PCR方法在检测时间、特异性、灵敏度方面比引物1的PCR方法更具优势。     

同时检测速冻食品中鸡、鸭、猪和牛源性成分实时荧光聚合酶链式反应方法的建立及应用

以鸡转化生长因子β-3(transforming growth factor beta-3,TGFB3)基因、猪朊蛋白(prion protein,PRNP)基因和鸭、牛生长激素(growth hormone,GH)基因为靶基因,设计合成特异性引物和TaqMan探针,通过对实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)体系和反应条件的优化,建立同时检测速冻食品中鸡、鸭、猪和牛源性成分的实时荧光PCR检测方法。结果表明:本研究所建立的方法只在鸡、鸭、猪或牛源性成分存在时才产生特异性扩增曲线,表明该方法具有良好的特异性;且对鸡、鸭、猪和牛源性成分的最低检测质量浓度分别可达到10.0、1.0、10.0、10.0 pg/μL,具有良好的灵敏性;应用建立的检测方法对市售34份速冻食品鸡、鸭、猪和牛源性成分进行同时检测,能够实现对速冻食品中4种动物源性成分的有效检测,进一步分析发现,15份速冻食品源性成分测定结果与外包装标注成分不一致。本研究所建立的同时检测速冻食品中鸡、鸭、猪和牛源性成分的实时荧光PCR检测方法具有良好的特异性和灵敏性,且操作简单、适用范围广,能够满足日常检测需求。     

一种基于双重ddPCR的肉制品中牛源性成分的定量分析方法

将低价肉类原料掺入高价肉制品是一种典型的肉类掺假方式,为准确鉴别牛肉及牛肉制品的真伪,建立一种基于双重微滴式数字聚合酶链式反应（droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR）的牛源性成分定量分析方法。通过对14 种动物的Beta-actin单拷贝基因序列进行分析,设计牛源性特异性引物、探针与动物源性成分通用引物、探针并建立双重ddPCR体系,推导出牛源性成分质量与其特异性扩增拷贝数之间的计算公式,对牛源性成分进行定量检测该方法得到牛源性成分质量M牛（mg）与其特异性扩增拷贝数浓度C牛（copies/μL）之间的计算公式为M牛=0.033C牛＋2.37,对已知牛肉质量的混合肉样品与不同部位的牛肉样品进行检测,结果显示牛肉定量检测值与实际质量基本一致。同时拷贝数相对含量可辅助判断肉制品中是否存在非牛源性的其他动物源性成分掺假。对市售样品的检测发现,存在目标肉样含量不达标以及不同程度的动物源性成分等掺假现象,说明该检测方法可为牛肉制品掺假量化判定和混合源性产品分级鉴定提供技术支撑。     

豉香型白酒酒饼中细菌PCR-DGGE分析方法的建立

本研究以豉香型白酒酒饼中的细菌类群为对象,针对PCR-DGGE分析方法中DNA提取、PCR扩增、DGGE电泳时间和凝胶染色方法等重要环节开展了相关技术参数的比较和优化。结果显示:试剂盒法、CTAB法、SDS法和SDS-CTAB结合法等四种DNA提取方法中,SDS-CTAB结合法提取的DNA得率最高,蛋白质去除干净,完整性好,虽然步骤稍繁琐,但优于其他方法;经均匀设计法优化后,PCR反应中退火温度为50℃,引物浓度为0.4μmol/L,模板2.5μL(约34 ng)时所扩增出的条带最清晰、产物量最高,对应的DGGE分析中DNA条带的多样度和丰度最佳;以进程法比较了不同时长的DGGE电泳效果,发现在变性剂梯度范围为30%~60%、电压85 V、温度60℃条件下,电泳9 h DGGE胶中的DNA条带分离充分,分布位置适中;同时还发现,利用银染色法对胶进行染色,效果优于Goldview染色法。综合上述因素,初步建立了豉香型白酒酒饼微生物PCR-DGGE技术的分析方法。