维生素C通过胰岛素信号通路增强秀丽隐杆线虫抗氧化作用

目的:利用秀丽隐杆线虫为模式生物,研究维生素C在秀丽隐杆线虫体内的抗氧化效应及其机制.方法:分别以含有0.05、0.25、0.5 mg/mL维生素C的NGM培养基饲养秀丽隐杆线虫,测定不同浓度维生素C饲养线虫体内超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的含量,同时检测0.25 mg/mL的维生素C饲养线虫age-...     

固态发酵法制备罗非鱼皮胶原蛋白肽及其抗氧化活性研究

以罗非鱼鱼皮为原料,利用枯草芽孢杆菌固态发酵(solid-state fermentation,SSF)制备胶原蛋白肽。以胶原酶酶活力为评价指标,优化产酶发酵条件,并对发酵产物进行氨基酸组成分析、超滤分离及体外抗氧化活性的研究。结果表明,最佳发酵条件为培养基初始pH值为7,种子液菌龄为14 h,加水量为10 mL,发酵温度为35℃,发酵时间为24 h,在此条件下胶原酶酶活力为90.05 U/mL,水解度高达41.73%。经超滤分离得到3种不同分子质量(molecular weight,MW)范围的胶原蛋白肽组分:TSCP-a(M_W> 10 kDa)、TSCP-b(M_W5 k～10 kDa)、TSCP-c(M_W<5 kDa)。其中TSCP-c的抗氧化活性最高,其羟自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(·O₂^-)和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1-diphenyl-2-picrylhydrazy,DPPH)自由基清除率的半抑制浓度(half inhhibitory co...     

罗非鱼皮胶原肽的制备及抗氧化活性研究

采用酶法从罗非鱼皮中制取胶原肽,选用动物蛋白水解酶,当酶的添加量为0.5%,61℃,pH 6.7下水解3 h时,蛋白质的回收率为92.97%,水解度为9.37%.水解产物90%以上相对分子质量低于10 kD的胶原肽.胶原肽对由Fe^2＋引发的卵磷脂脂质体过氧化有一定抑制作用,同时对·OH具备一定的清除作用.     

罗非鱼皮胶原蛋白肽酶解液的制备及其抗氧化特性研究

以罗非鱼皮为原料,采用直接酶法提取胶原蛋白肽,用正交试验对罗非鱼皮胶原蛋白肽的制备工艺进行优化,并测定了罗非鱼皮的基本组成成分和鱼皮胶原蛋白肽的氨基酸组成。结果表明,碱性蛋白酶添加量为0．5％,固液比1：3,酶解时间为3h,酶解温度50℃时鱼皮胶原蛋白肽的提取率最高为13．5％。并对产品胶原蛋白肽的抗氧化特性进行了分析。     

罗非鱼皮胶原蛋白肽亚铁螯合修饰及螯合物性质的研究

以罗非鱼皮为原料制备胶原蛋白肽(TSGP),胶原蛋白肽与亚铁盐进行螯合反应,对TSGP亚铁螯合物的理化性质及功能特性进行研究。实验优化得出最佳螯合反应条件是m多肽∶mFeCl2·4H2O=500∶1,pH为6.0,反应时间50min,温度35℃。通过荧光光谱、紫外光谱和红外光谱测定发现Fe2+与TSGP的羧基与氨基均可发生配位反应。抗氧化活性测定实验表明,螯合物具有较强的清除DPPH自由基和ABTS+自由基的能力。     

罗非鱼皮胶原蛋白水解产物的体外抗氧化活性和体内抗衰老作用

对罗非鱼皮胶原蛋白水解制备水解产物（tilapia skin gelatin hydrolysate,TSGH）,分离得到3 个肽组分（TSGH-1、TSGH-2和TSGH-3）,分析肽组分氨基酸组成,并对TSGH-3的体外抗氧化活性和体内抗衰老能力进行评价。结果表明：TSGH-3的分子质量低,疏水性氨基酸含量高,从自由基清除和金属螯合两个方面证实了TSGH-3具有很好的体外抗氧化活性。TSGH-3能显著增加由D-半乳糖诱导衰老大鼠的血清、肝脏和肾脏组织的总抗氧化能力、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性,并且能显著降低丙二醛的含量。此外,TSGH-3的摄入可以保护大鼠的肝脏和肾脏指数。因此,TSGH-3在抗氧化、抗衰老方面具有较好的应用潜力。     

大孔树脂对罗非鱼皮胶原蛋白抗氧化肽脱盐作用的研究

为了探索罗非鱼皮胶原蛋白抗氧化肽的最佳脱盐工艺,本文采用DA201-C大孔吸附树脂对抗氧化肽进行脱盐试验。结果表明:DA201-C大孔吸附树脂对抗氧化肽的静态吸附率和吸附量分别为82.56%和54 mg/g;动态吸附和解吸最佳的上样浓度为60mg/mL,最佳上样流速为1 mL/min,解吸剂为75%乙醇。抗氧化肽经过DA201-C大孔吸附树脂处理后脱盐率为97.13%,回收率为81.16%,质量浓度为0.245 mg/mL时对ABTS自由基的清除率提高至39.58%。采用DA201-C大孔吸附树脂对罗非鱼皮胶原蛋白抗氧化肽进行脱盐处理是一种简便有效的方法。     

碱性蛋白酶水解罗非鱼皮提取胶原蛋白肽的最佳条件研究

以罗非鱼皮为原料,采用酶法提取胶原蛋白肽,用正交实验对罗非鱼皮胶原蛋白肽的提取工艺进行优化,并测定了罗非鱼皮的基本组成成分和鱼皮胶原蛋白肽的氨基酸组成.结果表明,碱性蛋白酶添加量为0.5%,固液比1:3,酶解时间为3 h,酶解温度为50℃时鱼皮胶原蛋白肽的提取率最高为13.5%.     

利用线虫模型评价乳酸菌体内抗氧化能力及其与体外抗氧化参数的对比

通过对24株乳酸菌(Lactobacillus)羟自由基清除能力、DPPH自由基清除能力以及还原能力的测定,比较其体外抗氧化能力的大小,而后将乳酸菌喂食秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans),并用质量分数为0. 003%的过氧化氢对线虫进行刺激,比较喂食不同乳酸菌的线虫寿命,分析乳酸菌在线虫体内缓解氧化损伤的能力。结果显示,植物乳杆菌(L. plantarum) Lp11不仅具有较高的体外抗氧化能力,还能有效缓解线虫体内因过氧化氢刺激引起的氧化应激,且缓解效果最好。体外抗氧化指标与线虫LT50值的相关性分析结果显示羟自由基清除能力这一体外抗氧化指标与缓解线虫氧化应激的效果具有较强相关性(P 0. 01),能较好反映乳酸菌在线虫体内的抗氧化效果。     

枸杞对秀丽隐杆线虫寿命和产卵的影响及其抗氧化作用

目的：研究枸杞对秀丽隐杆线虫（以下简称线虫）寿命和产卵的影响,探讨其抗氧化的相关机制。方法：采用铁离子还原/抗氧化能力法体外检测,比较了宁夏中宁、青海、甘肃3 个产地的枸杞抗氧化能力的差异。采用活性氧（reactive oxygen species,ROS）-敏感染料2’,7’-二氯-二氢荧光素乙酰乙酸盐检测枸杞对线虫体内ROS的影响,同时采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测枸杞对线虫体内相关抗氧化酶水平的影响。将同步化后L4时期的线虫分别放置于对照或添加枸杞提取物的NGM平板上培养,检测枸杞对线虫产卵和寿命的影响。采用两种转基因（Pmyo3::HyPer和roGFP2::Orp1）线虫为模型检测枸杞提取物对线虫胞质中H2O2的清除能力,采用荧光染料MitoSox Red检测枸杞提取物对线虫细胞线粒体中超氧阴离子自由基的清除能力。结果：3 个产地的枸杞均具有很强的体外抗氧化能力,它们之间没有明显差异。枸杞可以降低线虫体内ROS水平以及提高抗氧化酶的水平。枸杞对线虫寿命和产卵能力并没有明显的影响。枸杞可以清除线粒体超氧阴离子自由基,但不影响胞质H2O2水平。结论：枸杞在体外与体内均有一定的抗氧化能力,其主要通过清除线粒体超氧阴离子自由基在体内发挥抗氧化作用,枸杞对线虫的寿命和产卵数没有明显影响。     

三酶法制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽及活性研究

为了探索制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽的最佳工艺,在碱性蛋白酶和胰蛋白酶酶解的基础上,以酶解温度、酶解时间、酶解pH值和酶与底物质量比([E]/[S])为试验因素,以水解度和DPPH自由基清除率为响应值,采用响应面分析法优化Orientase 20A酶的酶解条件。结果表明:最优工艺参数为:酶解温度为41.74℃、pH3.97、酶解时间为6h、[E]/[S]为1.5%,酶解液水解度和DPPH自由基清除率的预测值分别为9.42%和35.01%,验证值分别为9.57%和35.21%。响应面对酶解法制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽的酶解条件的优化是可行的,可以用于实际预测。抗氧化活性实验表明,酶解肽具有较强的清除DPPH自由基和ABTS+.能力,其IC50值分别为10.78mg/mL和8.26mg/mL。     

罗非鱼皮胶原酶解物对HaCat细胞生长的影响

研究经不同商业酶水解后得到的罗非鱼皮胶原酶解物对人皮肤角质细胞HaCaT生长的影响,并对胶原酶 解物的抗氧化活性与促进细胞生长作用的关系进行探讨。结果表明：罗非鱼皮经中性蛋白酶（neutral enzyme, NE）、碱性蛋白酶、胰蛋白酶水解得到的酶解产物中,NE酶解物（neutral enzymatic hydrolysate,NEH）具有显著的 体外抗氧化活性和促进HaCaT细胞增殖的活性（P＜0.05）;NEH（1～5 ku）在质量浓度为25 mg/mL时对HaCaT细胞 的生长具有显著的促进作用（P＜0.05）,并在24 h内能显著促进细胞划痕处伤口愈合（愈合率（81.10±5.77）%, P＜0.05）。经氨基酸组成分析和凝胶色谱分析发现,NEH（1～5 ku）主要包含2 个肽组分,NEH（1～5 ku）的 抗氧化氨基酸苯丙氨酸、亮氨酸、酪氨酸、赖氨酸、精氨酸和组氨酸的质量分数要显著高于其他分子质量的肽 组分（P＜0.05）。研究认为,经NE水解得到胶原肽分子质量为1～5 ku组分对HaCaT细胞生长具有促进作用,这可 能与肽组分中抗氧化氨基酸质量分数较高有关。     

鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽的抗氧化活性

选取铁离子还原体系和3 种自由基体系为指标,研究鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽体外清除自由基效果和抗氧化作用。采用超滤膜分离鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽组分,筛选出体外清除•OH活性最好的组分,再建立小鼠衰老模型,将分离得到活性最好的组分采用灌胃法,测定小鼠皮肤中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、过氧化氢酶（catalase,CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）及丙二醛（malondialdehyde,MDA）和羟脯氨酸（hydroxyproline,Hyp）的含量,研究鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽体内抗氧化和清除自由基作用。结果表明：鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽具有较强的还原能力且对O－2•、DPPH自由基、•OH具有清除效果,质量浓度为10 mg/mL时对•OH、DPPH自由基、O－2•的清除率和对Fe3+ 的还原能力分别为70.48%、68.78%、42.53%和0.676;分子质量小于2 000 D的鮟鱇皮胶原蛋白肽组分对•OH具有较好的清除效果,IC50为15.7 mg/mL;剂量为100 mg/（kg•d）时,显著提高了皮肤中SOD、GSH-Px、CAT的活性,较模型组分别增加20.9%、41.3%和58.1%,且显著抑制MDA的形成。     

微射流-酶处理对罗非鱼皮胶原蛋白结构和理化特性的影响

为了研究微射流-酶复合改性方法对罗非鱼皮胶原蛋白结构及理化性质的影响。本文采用3种蛋白酶分别协同微射流处理鱼皮胶原蛋白,研究不同处理方法对其质构特性、流变特性及微观结构的影响。结果表明:微射流-酶处理的鱼皮胶原蛋白粒径变小,分布更加均匀及黏度上升的特点,微射流-胰蛋白酶和微射流-胃蛋白酶处理的胶原蛋白的网状结构致密均一,凝胶强度、硬度和黏性分别提高75.17%和14.44%,27.26%和77.66%,67.87%和8.90%,但是微射流-木瓜蛋白酶处理的胶原蛋白的网状结构稀疏且分布不均,凝胶强度、硬度和黏性分别降低21.06%,35.96%,28.28%。其中,微射流-胃蛋白酶处理的鱼皮胶原蛋白感官评分最高,具有更容易被人们接受的感官要求。研究结果有利于提升罗非鱼加工副产物的高值化利用水平。     

牛骨胶原低聚肽促进皮肤切口手术模型小鼠术后伤口愈合的机制研究

探讨牛骨胶原低聚肽促进皮肤切口手术模型小鼠术后伤口愈合的可能机制。96只SPF级ICR雄性小鼠随机分为空白对照组和3个牛骨胶原低聚肽剂量组(低剂量、中剂量、高剂量,灌胃剂量分别为0.375、0.75、1.5 g/kg·bw),每组24只。建立小鼠背部皮肤切口手术模型,术后连续灌胃11 d,并在术后第3、7、11 d分批处死8只小鼠进行相关指标的检测。结果发现,术后第11 d,牛骨胶原低聚肽高剂量组小鼠抗张力强度显著高于空白对照组(p<0.05);术后第3、7和11 d,低剂量、中剂量和高剂量牛骨胶原低聚肽能够显著增加小鼠血清中白蛋白和前白蛋白浓度(p<0.05);术后第3、7和11 d,中剂量和高剂量牛骨胶原低聚肽能够显著促进血清白细胞介素-10的表达水平(p<0.05),术后第7、11 d,牛骨胶原低聚肽能够显著抑制肿瘤坏死因子-α的表达水平(p<0.05)。因此,牛骨胶原低聚肽可以有效促进小鼠伤口愈合,其作用机制可能与其提高小鼠营养状况及抑制炎症反应有关。     

响应面法优化罗非鱼皮胶原多肽螯合锌的制备工艺

以罗非鱼皮胶原多肽(TSP-I)为配位体,采用水合体系法与硫酸锌螯合,制备可用于补锌剂的多肽螯合锌产品。以响应面法优化罗非鱼皮胶原多肽螯合锌工艺。结果表明:最佳螯合工艺条件为:反应温度60℃、pH5.3、TSP-I与硫酸锌摩尔比2:1、TSP-I浓度3.4g/100ml水、反应时间40min。在此条件下螯合率理论值为92.57%,验证实际螯合率为92.17%。     

罗非鱼皮胶原蛋白肽制备的工艺优化

以罗非鱼鱼皮为原料,研究利用酶法制备胶原蛋白肽制品。测定了罗非鱼皮的基木组成成分,利用低温连续相变萃取技术进行脱脂处理;以水解度、水解产物分子量和感官评定为指标,研究蛋白酶种类对酶解的影响;以水解度为指标,研究酶解条件对水解度的影响,并采用响应面试验对鱼皮胶原肽制备工艺进行优化;用凝胶过滤色谱法测定酶解液分子质量分布。结果表明:采用碱性蛋白酶水解鱼皮效果最好,酶解的最佳工艺条件为:时间7 h、加酶量7%、温度60℃、pH值10.38,在此条件下碱性蛋白酶水解罗非鱼皮的水解度最高可达23.01%。由本法所得胶原肽是以分子质量180~1000 u之间的寡肽(约2~8个氨基酸残基)为主的物质,具有较好的生理活性,可作为功能因子广泛应用于保健食品、化妆品、医药等各个行业当中。     

几种生物大分子对罗非鱼皮Ⅰ型胶原自聚集性的影响

研究海藻酸钠、硫酸软骨素、透明质酸和壳聚糖对罗非鱼皮Ⅰ型胶原自聚集动力学和聚集后微观结构的影响。结果表明:在海藻酸钠、硫酸软骨素、透明质酸和壳聚糖存在的情况下,胶原自聚集过程仍然包含两个阶段:成核阶段和生长阶段,但是各物质对两阶段的动力学参数影响不同。海藻酸钠、透明质酸和壳聚糖均能够降低生长阶段的速率常数,然而对成核阶段的影响各有差异。海藻酸钠对成核阶段的速率常数没有显著影响,但是随着含量的增加能够延长成核时间;壳聚糖能够提高成核阶段的速率常数,同时缩短成核时间;透明质酸对成核阶段的速率常数和成核时间却没有显著影响。而硫酸软骨素对成核阶段和生长阶段均没有显著影响。扫描电子显微镜结果表明海藻酸钠、硫酸软骨素、透明质酸易使胶原纤维横向聚集形成纤维束,影响其直径大小的顺序为硫酸软骨素海藻酸钠透明质酸,而壳聚糖却未表现类似作用。