SKLZΔspiC鸡白痢沙门菌减毒活疫苗候选株的遗传稳定性分析

目的分析鸡白痢沙门菌减毒活疫苗候选株SKLZΔspiC的遗传稳定性。方法将疫苗株SKLZΔspiC与其亲体株S06004进行体外混合培养、体内共同感染,同时将重组质粒pMD20-spiC电转化导入疫苗株SKLZΔspiC,连续传至20代后,进行PCR及测序鉴定。结果在体外混合培养、体内混合感染条件下,疫苗株SKLZΔspiC均无法从野生株S06004获得靶基因spiC;疫苗株SKLZΔspiC无法从外源质粒获得靶基因spiC。结论疫苗株SKLZΔspiC具有良好的遗传稳定性。     

鸡白痢沙门菌减毒疫苗候选株冻存条件的优化及冻存菌株的遗传稳定性

目的优化鸡白痢沙门菌减毒疫苗候选株冻存条件,并检测冻存菌株的遗传稳定性。方法采用平板活菌计数方法检测添加不同保护剂(5%蔗糖水溶液、5%蔗糖脱脂乳液、5%蔗糖脱脂奶粉液、1.5%明胶水溶液),并于不同温度(常温、4℃、-20℃)及不同保存时间(常温冻存0、15和30 d,4及-20℃冻存0、30、60、90、120、210和540 d)条件下冻存的减毒疫苗候选株S06004Δspi C的活菌数,确定最佳冻存条件。检测经体内、外传代5、10、15、20代及原代减毒疫苗候选株S06004Δspi C的生化特性,并对经体内、外传代20代及原代减毒疫苗候选株S06004Δspi C进行PCR及测序鉴定。结果最佳冻存条件为:添加5%蔗糖脱脂奶粉溶液,于-20℃下冻存,保存时间至少可达1.5年。经体内、外传代后,减毒疫苗候选株S06004Δspi C的生化特性与原代一致,其目的基因序列均未发生变化。结论成功优化了鸡白痢沙门菌减毒疫苗候选株的冻存条件,该候选株具有良好的稳定性,为后期研究其安全性及免疫学特性奠定了基础。     

不同生产工艺制备水痘减毒活疫苗(VZV 84-7株)的比较

目的采用细胞工厂替代传统转瓶工艺制备水痘减毒活疫苗(VZV 84-7株)。方法分别用细胞工厂和3 L转瓶培养2BS细胞,制备水痘减毒活疫苗(VZV 84-7株)各6批,采用Countstar全自动细胞计数仪进行细胞计数,并以计数结果中的单位面积细胞数、成活率及消化后细胞的平均直径为指标,考察细胞质量,同时采用蚀斑法检测原液、成品及成品37℃放置7 d后(热稳定性)的病毒滴度。结果采用细胞工厂连续制备的6批2BS细胞的平均单位面积细胞数、细胞平均成活率均略优于3 L转瓶培养工艺,平均直径变动范围小于3 L转瓶;细胞工厂制备的6批疫苗,平均原液滴度为5.58 lg PFU/ml,平均成品滴度为4.78 lg PFU/0.5ml,37℃放置7 d后的平均病毒滴度为4.13 lg PFU/0.5ml,优于3 L转瓶。结论利用细胞工厂制备水痘减毒活疫苗(VZV 84-7株),可获得更高滴度病毒液,降低疫苗生产过程中的劳动强度及污染风险,并提高了疫苗产量及质量的稳定性,适合于水痘减毒活疫苗(VZV 84-7株)的规模化生产。     

甲型肝炎减毒活疫苗(L-A-1株)扩大人群的反应及效果观察

为进一步研究甲肝减毒活疫苗的安全性及免疫原性,在小量人体观察(30名志愿者)获得满意结果的基础上,进行了扩大人群的再观察。选350名8～11岁健康学龄儿童,随机分成5个组,对不同接种剂量、不同接种途径及不同滴度的疫苗接种后的反应及效果进行了观察。结果表明,所有受试者均无局部和全身反应,亦无肝酶的异常升高。免后4周,不同剂量、不同途径的抗体阳转率为70～100%,免后8周为98～100%,进一步证实该实验性疫苗是安全的,其免疫原性是良好的。     

乙型脑炎减毒活疫苗(SA14-14-2株)的纯化

目的建立纯化乙型脑炎减毒活疫苗(SA14-14-2株)的方法。方法应用超滤浓缩和分子筛凝胶柱层析纯化乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)SA14-14-2病毒液,检测其病毒滴度、原代地鼠肾细胞残留蛋白含量、牛血清白蛋白残留量、庆大霉素残留量,并进行小鼠脑内致病力试验、乳鼠传代返祖试验、异常毒性试验,制备纯化冻干疫苗,进行热稳定性试验。结果纯化后的JEV病毒滴度高于7.0 lg PFU/ml,平均回收率为23%;牛血清白蛋白残留量、庆大霉素残留量及安全性试验均符合《中国药典》三部(2010版)相关规定,去除了约95%的原代地鼠肾细胞残留蛋白;制备的冻干疫苗及热稳定性试验中的病毒滴度均高于5.7 lg PFU/ml,且热稳定性试验中病毒滴度下降未超过1.0 lg,符合《中国药典》三部(2010版)规定。结论建立了乙型脑炎减毒活疫苗(SA14-14-2株)纯化工艺,但病毒回收率较低,不适宜规模化生产,对乙型脑炎病毒减毒活疫苗质量控制具有指导意义。     

流行性乙型脑炎减毒活疫苗生产毒种(SA14-14-2株)及其疫苗的表型和E基因稳定性研究

目的　对乙脑减毒活疫苗SA14 14 2株生产毒种及其疫苗病毒滴度、脑内毒力和E区核苷酸序列进行回顾性测定。方法　应用乳金黄地鼠肾传代细胞 (BHK 2 1)结晶紫蚀斑法进行病毒滴度的测定 ,小鼠脑内法检测疫苗脑内毒力。应用RT PCR方法扩增SA14 14 2生产毒种和疫苗E区的核苷酸 ,经凝胶层析纯化的PCR产物直接用于测序或克隆到pGEM T载体中 ,经酶切和PCR鉴定后进行测序。结果　疫苗在 - 2 0℃保存长达 10多年 ,疫苗病毒滴度下降不超过 0 5lg;脑内毒力未见毒力回升。病毒蚀斑形态仍保持较SA14野毒株形态小的特性 ;以不同批次疫苗和生产毒种提取的病毒RNA作为模板进行RT PCR扩增 ,扩增的基因片段与预期大小一致 ;E区基因序列与野毒株差异的 8个氨基酸没有一个发生回复突变。结论　SA14 14 2生产毒种及其不同年度不同批次疫苗的生物表型和E区核苷酸的特性是十分稳定的