心肌损伤标志物肌酸激酶同工酶荧光检测方法的建立

肌酸激酶同工酶(Creatine kinase isoenzyme,CK-MB)是早期诊断急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)的重要标志物,该研究以荧光微球为标记物研究快速、灵敏的CK-MB荧光免疫层析检测方法。通过N-羟基琥珀酰(NHS)和1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)将荧光微球与市售的抗体共价偶联,优化抗体与荧光微球的偶联条件,对偶联获得的抗体荧光标记物进行表征,制备了CK-MB的荧光免疫层析检测卡,建立了CK-MB荧光免疫层析检测方法。荧光微球偶联率91.7%,CK-MB检测卡定量检测线性范围为1ng/ml~1000ng/ml,灵敏度达到了1ng/ml,CV值8%,回收率84%~108.3%。利用间接ELISA法对市售抗体进行筛选,获得了包被抗体以及标记抗体,建立了心肌损伤标志物肌酸激酶同工酶荧光检测方法,实现血清中CK-MB定性与定量检测,为心肌损伤标志物荧光免疫层析检测方法的研发提供了实验技术基础。     

大豆球蛋白间接竞争ELISA检测方法的建立

建立了大豆球蛋白间接竞争酶联免疫检测法(ELISA),为食品中主要的大豆蛋白过敏原的检测提供技术基础.以纯品大豆球蛋白免疫新西兰大白兔,自制得到兔抗大豆球蛋白的多克隆抗体,并以大豆球蛋白包被抗原、自制抗体作为一抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为酶标二抗,四甲基联苯胺(TMB)显色液为底物,建立了大豆过敏原中大豆球蛋白的间接竞争ELISA检测方法.确定了抗原的包被浓度为0.025μg/mL,一抗最佳稀释度为1∶3 200,酶标二抗稀释度为1∶10 000.检测结果达到板内误差3.82%,板间误差10.22%,在允许的误差范围之内;其检测的线性范围为0.01~0.05μg/mL.结果表明本试验所建的大豆球蛋白间接ELISA方法具有一定的重复性和灵敏度,可用于大豆蛋白制品过敏原的检测.     

抗氨甲酰化蛋白抗体的制备及其ELISA检测方法的建立

为了制备抗氨甲酰化蛋白抗体,探讨了氨甲酰化与瓜氨酸化之间的关系,开发氨甲酰化蛋白检测试剂盒。以牛血清白蛋白(BSA)和氰酸钾(KCNO)为原料合成人工完全抗原(Hcit-BSA),然后免疫新西兰大白兔和BALB/c小鼠,获得抗血清,间接ELISA测定抗体效价,用方阵实验确定抗体最佳稀释倍数和包被抗原的最佳包被浓度,间接竞争ELISA检测抗体特异性。结果表明:抗体效价大于1∶8 000,抗体最佳稀释倍数为1∶4 000,包被原最佳包被浓度为0.25μg/mL,抗体能特异性识别氨甲酰化产物(carbamylation-derived products,CDPs)。Hcit-BSA具有较强免疫原性,使BALB/c小鼠产生抗氨甲酰化蛋白抗体,也为建立一种简便、快速、特异性强的免疫分析方法奠定了基础,为一些疾病的早期快速检测提供了可能。     

血清C反应蛋白荧光免疫层析检测方法的建立

针对人体急性炎症反应的快速检测,建立了基于量子点碲化镉(CdTe)的荧光免疫层析分析方法及快速定量检测卡,实现血清中炎症标志物C反应蛋白(CRP)的快速定量检测.该检测卡采用双抗体夹心法,首先利用酶联免疫方法筛选出CRP测定最佳包被抗体与标记抗体,然后通过N-羟基琥珀酰(NHS)和1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)共价偶联法,将CdTe量子点与CRP鼠源单克隆抗体偶联,制备抗体荧光标记物,同时优化不同条件下单克隆抗体与CdTe量子点的偶联效果,琼脂糖凝胶电泳进行鉴定,进而构建CRP荧光免疫层析检测卡,通过建立量子点荧光强度与CRP标准品浓度之间的定量关系,从而实现人体血清中CRP的定量检测.结果表明,CRP检测卡定量检测线性范围为0.1~1000ng/ml,临床样本测试结果显示与进口试剂具有良好的相关性.因此研究为急性炎症反应的快速诊断,及荧光免疫层析检测卡的研发提供了技术基础.     

牛乳酪蛋白双联胶体金免疫层析试纸条的研制

原料羊乳中掺入牛乳会对其制品的食品安全造成损害.本研究的目的是建立一种免疫层析试纸条的检测方法检测羊乳原料乳的掺假.以牛乳αs1-CN及牛乳β-LG为检测对象,制备两者的特异性抗体,建立双联胶体金免疫层析试纸条.该实验制备的多克隆抗体α-CN IgG和β-LG IgG蛋白质浓度分别为4.86和5.99 mg/mL,两种抗体的效价为1∶25 600和1∶204 800,制备的胶体金溶液最适pH值为8.0,最佳蛋白标记量为10μL,且β-LG IgG中α-CN IgG的最适掺入量为20%.试纸条以玻璃纤维素膜VL68作为金标垫、硝酸纤维素膜SarteriesCN 95作为NC膜,分别用6μL,1 mg/mL的α-CN IgG,6μL,1 mg/mL的β-LG IgG包被NC膜T线、用6μL,1mg/mL二抗包被C线.该试纸条可特异性的检测出α-CN和β-LG,无明显的交叉反应,且可检出的牛乳最低掺入量为5%.     

COVID-19抗体检测试剂盒的制备与应用

将重组表达的新冠N和S蛋白通过化学反应,偶联到聚苯乙烯微球上,并置换到合适的保存液中,制备出新冠检测试剂2(R2).结合抗原抗体反应特性及降低血清中非特异性吸附,制备出新冠检测试剂1(R1).R1与R2搭配使用构成了定量检测人血清中新冠抗体检测胶乳试剂盒.通过条件可知:制备20 m L胶乳R2,包被新冠病毒N蛋白与S蛋...     

猪流行性腹泻病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

为开发一种快速、准确检测猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)的实时荧光定量PCR方法,根据引物设计原则在病毒基因组序列保守区设计了一对PEDV特异性引物,通过系统优化建立了EvaGreen实时荧光定量PCR方法,对其特异性、灵敏度和重复性进行了分析,并将该方法应用于90份临床样品检测。结果表明:该实时荧光定量PCR可以特异性地检测PEDV,对其他非靶标病毒无交叉反应,最低检测限为5 copies/μL;使用3个不同浓度的标准品进行批内和批间重复,Ct值的变异系数在2.8%以下,表明该方法重复性好;临床样品中PEDV的阳性率为48.9%。建立的实时荧光定量PCR是一种快速、准确、高度灵敏且特异的检测方法,可用于PEDV流行病学调查和临床诊断。     

花生制品中金黄色葡萄球菌SYBR Green qPCR快检方法的评价研究

金黄色葡萄球菌是花生及其制品中常见的一种食源性致病菌,针对金黄色葡萄球菌的快速检测方法对实现花生及其制品中的食品安全防控有重要意义.根据金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因(nuc)设计了3对特异性引物,同时优化了退火温度,成功建立了一种特异性引物的SYBR Green实时荧光定量PCR(qPCR)快速检测方法,进一步对该方法的特异性、重现性及灵敏度进行了验证.以8种模拟污染花生加工产品为实验对象,对该方法与荧光定量PCR试剂盒-探针法及商品化Baird-Parker干粉培养基法进行了评价研究.结果表明,建立的SYBR Green qPCR快速检测方法特异性和重现性良好,最低检测限为8.99 copies/μL,其灵敏度比荧光定量PCR试剂盒-探针法高2个数量级. SYBR Green qPCR快速检测方法具有成本低、检测快速、特异性好、灵敏度高的优点,可用于花生及其制品中金黄色葡萄球菌的快速检测,也可为防控其他食品中的金黄色葡萄球菌污染提供参考.     

恩诺沙星多克隆抗体制备及阻断ELISA检测方法的研究

采用混合酸酐法将恩诺沙星(ENR)分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原(ENR-BSA)和包被抗原(ENR-OVA).将免疫原免疫家兔,制备多克隆抗体(ENR pAb),应用ENR pAb研制ENR残留阻断ELISA快速检测方法,并对其灵敏度、半数抑制浓度IC50特异性、准确度进行测定.结果阻断ELISA的线性检测范围为1～205 ng/mL,灵敏度1 ng/mL,半数抑制浓度(IC50)为11 ng/mL,与其他化合物的交叉反应率(CR%)均<0.1%,鸡肉样的平均添加回收率分别为87.35%,平均变异系数均<10%.本检测方法具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合ENR残留快速检测的推广应用.     

聚谷氨酸苄酯-co-聚谷氨酸共聚物的制备

为了改善聚谷氨酸苄酯的亲水性和提供可反应的功能基团，在聚谷氨酸苄酯的二氯甲烷和苯的混合溶液中通入干燥的溴化氢气体，通过脱酯反应得到了聚谷氨酸苄酯的部分水解产物．经FTIR、^1H—NMR、XPS、XRD分析表明，经过脱酯反应，聚谷氨酸苄酯失去一部分的苄基，成功地得到了聚谷氨酸苄酯-co-聚谷氨酸共聚物（PBLG-co-PGA）．元素分析结果表明，与溴化氢作用的时间越长，聚谷氨酸苄酯的水解程度越高，则羧基含量也越高．     

万向节的运动学（续）

本文将详细地讨论这样一个问题:当主动轴和从动轴的轴线,与其叉面的十字头孔中心线共面但不垂直时,单万向节传动比的表达式将会具有怎样的形式。     

红麻全秆高白度化学浆的研究

系统地对红麻全秆烧碱－ＡＱ法间隙蒸煮工艺进行了研究。研究认为,烧碱－ＡＱ法比ＫＰ法更适合于红麻全秆的蒸煮;同时首次在实验室条件下模仿连续蒸煮的实际生产过程进行了连续蒸煮的研究,并对连续蒸煮纸浆进行了可漂性能的探讨。     

废钢料斗吊钩的计算机辅助设计

利用计算机对吊钩的强度进行分析，改进了原来的截面和形状，增大吊钩的强度，使用更加方便可靠．     

INFLUENCE OF Fe~(3 ) AND Fe~(2 ) ON THE STRUCTURE OF C_3S LATTICE

Analytical reagents have been used for preparation of pure C_3S and its solid solutions containing Fe_2O_3 or FeO. The data from M(?)ssbauer Spectra of samples suggest that 4Si~(4 ) are replaced by 4Fe~(3 ), 1Ca~(2 ) by 1Fe~(3 ), and 1Fe~(3 ) occupies one octahedron hole; Fe~(2 ) mainly replaced Ca~(2 ). Spectroscopic Study has indicated there may be extream distortion and higher orientation disorder in (SiO_4) tetrahedron, the reduction of lattice order and translation symmetry by results of ionic replacements of Fe~(3 ) or Fe~(2 ) in C_3S crystal lattice.     

《北京工业大学学报》2010年总目次

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《北京工业大学学报》2007年总目次

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