酶底物法在总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌检测的适用性研究

为探讨酶底物法在三峡库区水质检测中的适用性,用酶底物法对库区地表水、污水厂出水中的总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌进行检测,测定结果 RSD<4%,测定标准菌株结果符合要求,用酶底物法和多管发酵法对不同样品进行比对,结果无统计学意义上的显著性差异(P>0.05),满足水质监测技术要求。     

受污染缢蛏大肠埃希氏菌的净化研究

本研究探讨了受污染缢蛏在海水理化特性:水温:22℃,pH:7.9,盐度:31.2 ppt,溶解氧:7.02 mg/L,颜色及透明度:无色透明;实验室室温:25℃,湿度:65%的条件下充气放养几天才能使大肠埃希氏菌完全净化。试验结果表明该缢蛏样品经过海水的暂养和净化,可以降低其大肠埃希氏菌和菌落总数的数量,而且暂养的时间越长,样品中大肠埃希氏菌和菌落总数的数量越少。     

臭氧对水中大肠埃希氏菌和肺炎性军团杆菌的失活作用

臭氧是自然界中存在的强氧化剂。目前在许多发达国家和我国部分地区都有用作生活用水处理的最后消毒手段。本文利用近年来国外发表的文献资料和实验结果,简明扼要地介绍和讨论臭氧对大肠埃希氏菌(E Coli)和肺炎性军团杆菌(Legionella pneumophila)的失活作用。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药性分析

目的分析临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的分布情况及耐药性。方法收集吉林大学中日联谊医院临床标本中分离的221株大肠埃希菌和152株肺炎克雷伯菌,采用纸片扩散法检测抗菌素的敏感性;双纸片协同试验和纸片表型确证试验筛选并确证产超广谱β-内酰胺酶的菌株;按照美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)2005年版的标准判断结果。结果大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对亚胺培南和美罗培南的敏感性最高,均达100%;对头孢他啶、哌拉西林/他唑巴坦和头孢西丁的敏感性也较高,均大于70%,而对氨苄西林的耐药性均大于90%。共检出产超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌118株,检出率为53.4%;肺炎克雷伯菌21株,检出率为13.8%;产超广谱β-内酰胺酶的两种菌株与非产超广谱β-内酰胺酶的同种菌株相比,对抗菌素的耐药性均明显增加。结论大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌仍是产超广谱的β-内酰胺酶的主要菌株,且对常用抗菌素产生了较高的耐药性。     

大肠埃希氏菌荧光定量PCR法与酶底物法相关性分析

针对大肠埃希氏菌国标法中的酶底物法检测时间长的现状,使用荧光定量PCR法和酶底物法同步检测大肠埃希氏菌,并比较分析两种方法检测结果的相关性.结果表明:荧光定量PCR法能检出细菌数为50 CFU/(100 mL)及以上的样品,含量在50～2000 CFU/(100 mL)的大肠埃希氏菌与酶底物法相比具有较高的一致性,相关系数r=0.99,经t检验分析,两种方法的检测结果无差异.荧光定量PCR法具有操作简便和检测时间短的优势,能作为酶底物法的有效补充手段,在实际水样的应急检测中具有较强的应用价值.     

人工神经网络优化大肠埃希菌摇瓶培养基

目的 采用人工神经网络(artificial neural network,ANN)优化一种可获得高生物量及菌体活力大肠埃希菌(E.coli)的摇瓶培养基。方法 以葡萄糖(glucose,Glu)、酵母浸出物(yeast extract,YE)、酵母蛋白胨(yeast peptone,YP)、大豆蛋白胨(soy peptone,SP)和酵母基础氮源(yeast nitrogen base,YNB)占比为混料分量,菌体悬浮液A₆₀₀(A1)、培养物湿菌重(G,g/L)和菌体活力指标值(A2,A₄₆₀)为响应值,采用混料设计试验筛选对响应值具有显著影响的混料分量。以混料设计试验结果为训练和验证数据样本构建ANN模型,输入变量为混料分量且约束同混料分量上下限,输出变量为混料设计响应值。通过所构建ANN获得的优化后培养基配方和参考值,应用蒙特卡洛模拟进一步调整培养基配方,并获得E.coli摇瓶培养基配方,再对培养基配方进行10次验证试验。结果 E.coli摇瓶培养基配方：Glu 26 g/L、SP26 g/L、YNB 13 g/L,培养基总浓度为65...     

大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶基因型分析

目的研究临床分离产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌医院感染的临床分布及其基因型特征,为临床合理用药治疗大肠埃希菌引起的感染提供参考依据。方法采用聚合酶链反应(PCR)分别检测162株产ESBLS大肠埃希菌3种易常见的ESBLS基因TEM,SHV和CTX-M并对其标本来源和科室分布进行分析。结果ESBLS大肠埃希菌最多的科室为重外科(22.9%),可能与手术预防性用抗生素的因素有关。     

内蒙古通辽地区犊牛腹泻大肠埃希菌毒力基因检测及耐药性分析

目的 对内蒙古通辽地区犊牛腹泻大肠埃希菌(E. coli)的毒力基因进行检测,并分析其耐药性及耐药基因分布情况。方法 采用药敏纸片法检测从腹泻犊牛粪便样品分离鉴定的82株致病性E. coli对13种抗菌药物的敏感性,PCR法检测其13种毒力基因和12种耐药基因携带情况,并对其进行系统进化分群。结果 82株致病性E. coli中48.78%(40/82)、31.71%(26/82)、14.63%(12/82)和4.88%(4/82)分别属于A、B1、B2和D群,优势群系为A群(48.78%,40/82);共检测到11种毒力基因,未检测到tsh和LT1,其中irp2、fyuA、eaeA和STb的检出率较高,分别为79.27%(65/82)、63.41%(52/82)、53.66%(44/82)和50%(41/82),其他毒力基因检出率均低于50%。82株致病性E. coli对13种抗菌药物的耐药情况严重,其中对四环素、多西环素和阿莫西林的耐药性普遍较高,耐药菌株占比分别为100%(82/82)、97.56%(80/82)和90.24%(74/82);全部菌株表现出多重耐药,耐8种抗菌药物的...     

犊牛腹泻大肠埃希菌O-抗原血清型鉴定

目的对犊牛腹泻大肠埃希菌O-抗原血清型进行鉴定。方法收集内蒙古部分地区牛场患犊牛腹泻病的犊牛直肠内容物或粪便共165份,经细菌分离培养、动物致病性试验及16s RNA PCR检测,筛选出致病性大肠埃希菌,并进行O-抗原血清型鉴定。结果分离的大肠埃希菌共165株,115株有致病性,除7株未能确定分型及3株自凝集外,其余105株鉴定为O-抗原血清型。结论大肠埃希菌O-抗原血清型鉴定对流行病学调查及疾病预防均有重要意义。     

123株产ESBLs大肠埃希菌耐药监测结果分析

目的了解临床常用抗菌药物对我院临床分离产ESBLs大肠埃希菌的体外抗菌活性。方法采用法国梅里埃VITEK-2仪器微量稀释法测定抗菌药物对产ESBLs大肠埃希菌的体外抗菌活性,按CLSI2007版分析结果。结果20种抗菌药物对于所研究产ESBLs大肠埃希菌的敏感率依次为氨苄西林0.8%、哌拉西林0、氨苄西林/舒巴坦4.9%、哌拉西林/三唑巴坦95.1%、头孢唑林0、头孢呋肟0、头孢替坦98.4%、头孢他啶0、头孢曲松0、头孢吡肟0、亚胺培南100%、美罗培南100%、氨曲南0、庆大霉素36.6%、妥布霉素44.7%、阿米卡星95.1%、左旋氧氟沙星18.7%、环丙沙星16.3%、甲氧苄啶/磺胺恶唑28.5%、呋喃妥因82.1%。结论目前碳青霉烯类是对产ESBLs大肠埃希菌最为有效的一类抗菌药物。另外对产ESBLs大肠埃希菌较为有效的药物还有哌拉西林/三唑巴坦、头孢替坦、阿米卡星。     

1株牛源大肠埃希菌的分离及鉴定

目的分离及鉴定内蒙古自治区通辽市某牛场犊牛腹泻致病菌。方法无菌采集犊牛腹泻粪便,通过分离培养、染色镜检、致病性检测、药敏检测、生化鉴定、16S r RNA PCR鉴定、血清型鉴定及系统进化树的构建进行病原研究。结果致病菌的16S rRNA基因序列与大肠埃希菌的相似性在99%以上;生化鉴定该致病菌为大肠埃希菌的置信度为99%,在20种常用药品中仅对阿米卡星、庆大霉素、亚胺培南、美洛培南敏感;血清鉴定该大肠埃希菌菌株的血清型为O17。结论该致病菌鉴定为大肠埃希菌,该菌具有多重耐药性,有成为人畜共患病病原的潜在可能。该研究为通辽地区牛场流行的大肠埃希菌防控提供了参考。     

1例犊牛腹泻大肠埃希菌的分离鉴定及毒力基因检测

目的 对1例犊牛腹泻大肠埃希菌进行分离鉴定及毒力基因检测.方法 无菌采集发病牛肝脏、脾脏、肾脏及十二指肠等脏器,制备肝脾组织切片,HE染色后观察组织病理学变化,并对分离菌株进行动物试验、生化试验、药敏试验、16S rRNA的PCR鉴定、系统进化树分析、毒力基因检测及O抗原鉴定.结果 心脏、肝脏病理学组织切片有明显坏死及...     

酶底物法在食品中大肠埃希氏菌MPN计数的应用研究

目的：探讨酶底物法在食品中大肠埃希氏菌MPN计数的应用,并对市售的2种酶底物试剂EC-MUG和科立得（Colilert）MMO-MUG进行比较。方法分别用两种酶底物试剂检测菌悬液和对6类食品大肠埃希氏菌MPN计数,同时用参考方法GB 4789.38—2012大肠埃希氏菌MPN计数检测,用McNemar’s检验对结果进行分析。结果 EC-MUG和科立得MMO-MUG酶底物检测菌悬液和6类食品的大肠埃希氏菌MPN计数,与参考方法比较,无统计学差异（χ2=0.01,P﹥0.05）。EC-MUG 和科立得 MMO-MUG 酶底物检测无统计学差异（χ2=0.01,P﹥0.05）;科立得 MMO-MUG酶底物检测结果易判断。结论酶底物法检测食品中大肠埃希氏菌MPN计数方便、快捷,有良好的应用前景。     

大肠埃希菌与酿酒酵母偶联合成S-腺苷甲硫氨酸

目的为大规模工业化生产S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)提供一套经济合理的生产工艺。方法将经DNA序列测定正确的SAM合成酶基因(SAMS)片段,经Eco RⅠ和NotⅠ双酶切,亚克隆至大肠埃希菌表达载体p ET-28a上,构建SAMS基因重组表达质粒p ET-28a-SAMS。将重组表达质粒转入大肠埃希菌表达宿主BL21(DE3),构建大肠埃希菌表达菌株BL21(p ET-28a-SAMS)。采用混合悬浮培养法,利用含有SAMS基因的重组大肠埃希菌BL21(p ET-28a-SAMS)中的SAM合成酶系和酿酒酵母JM-310中的ATP生物合成酶系,构建一个以葡萄糖为能源的中间偶合ATP再生系统,并对两种细胞的偶联合成比例、偶联时间、通透剂的种类及浓度、偶联缓冲液主要成分的浓度进行优化。结果经双酶切及菌落PCR鉴定证明,重组表达质粒p ET-28a-SAMS及大肠埃希菌表达菌株BL21(p ET-28a-SAMS)构建正确。大肠埃希菌BL21(p ET-28a-SAMS)与酿酒酵母的最佳偶联合成比例为4∶1,最佳偶联时间为5 h,添加5%甲苯通透效果最好,200 mmol/L磷酸缓冲液、200 mmol/L葡萄糖、10 mmol/L腺苷、30 mmol/L Mg Cl2·6H2O、30 mmol/L L-甲硫氨酸为最适偶联缓冲体系。最佳偶联条件下,偶联系统中SAM的浓度最高达1.7 g/L,对照组中SAM的浓度为0.17 g/L。结论本研究建立的方法操作方便,工艺简单,为SAM的廉价生产提供了一条新的途径。     

肠出血性大肠埃希菌O157免疫磁珠的制备

目的制备可高效、特异性富集肠出血性E.coli O157(enterohemorrhagic Escherichia coli O157,EHEC O157)的免疫磁珠。方法分别用5种不同规格磁珠与E.coli O157特异性单克隆抗体偶联制备免疫磁珠,通过比较磁珠蛋白偶联量,选取包被效果最佳的磁珠规格;对制备工艺进行优化(包括活化时间、温度,偶联缓冲液p H值,偶联温度、时间);对制备的O157免疫磁珠选择性集菌的敏感性和特异性进行评价,并与进口磁珠吸附率进行比较。结果直径0.5~1.0μm羧基磁珠抗体包被效果及目的菌分离效果最好。加入NHS后,活化30 min为最佳时间;4℃磁珠活化温度、0.01 mol/L PBS(p H 7.4)构成的体系对磁珠偶联单克隆抗体效果最佳;偶联温度为37℃、偶联时间为120 min时,偶联蛋白量最高,且波动范围较小,为最佳偶联温度及时间。在复杂的微生物环境中,O157免疫磁珠的敏感性达到20 CFU/ml。在混合菌液中,E.coli O157菌含量在1.4×10~3 CFU/ml时,免疫磁珠特异性捕获率达到90%。结论获得羧基磁珠与E.coli O157单克隆抗体偶联的最佳条件。制备的免疫磁珠能够特异性富集EHEC O157,具有操作简便,分离速度快,捕获率高等特点,可用于临床样品或食品中EHEC O157的分离鉴定。     

大肠埃希菌表达的重组生物制品种子批质量控制

正近年来,DNA重组技术在生物医药领域获得了迅速发展~([1-2])。《中国药典》三部(2015版)中,对人用重组DNA蛋白制品进行了定义:人用重组DNA蛋白制品是采用重组DNA技术,对编码所需蛋白质的基因进行遗传修饰,利用质粒或病毒载体将目的基因导入适当的宿主细胞,表达并翻译成蛋白质,经过     

大肠埃希菌O157:H7新型多重PCR检测方法的建立及其初步应用

目的建立一种能够满足现场快速检测、完全脱离实验室仪器设备的大肠埃希菌O157∶H7多重PCR检测方法。方法利用大肠埃希菌O157∶H7抗原基因保守序列fli Ch7和rfb E设计2对引物,并对Palm PCR G1-12退火温度、循环数、引物浓度及引物最佳比例进行优化,建立微量快速检测大肠埃希菌O157∶H7的多重PCR方法,并对该方法的特异性、灵敏性、重复性进行验证。取疑似病牛粪便共9份,利用粪便DNA提取试剂盒提取DNA,按照建立的PCR方法进行扩增,扩增产物经微型电泳仪电泳检测并照相。结果确定大肠埃希菌O157∶H7 PCR的最佳退火温度为54℃,循环数为25个循环,上下游引物浓度为10μmol/L,2对引物最适比为fli Ch7∶rfb E=1∶3。大肠埃希菌O157∶H7扩增产物可见625 bp(fli Ch7)和213 bp(rfb E)的特异性片段,而大肠埃希菌(ATCC25922)、猪链球菌2型、金黄葡萄球菌、鲍氏不动杆菌、小肠耶尔森菌、单增李斯特菌、沙门菌的PCR检测结果均为阴性,最低扩增DNA浓度为10 pg/μl,重复扩增5次均可见目的条带。9份疑似病牛粪便样品中,共检测出7份大肠埃希菌O157∶H7阳性样品。结论建立了大肠埃希菌O157∶H7微量快速多重PCR检测方法,该方法特异性、灵敏性和重复性均良好,可在现场约1 h报告结果,对突发性传染病的防治具有重要意义。     

水中粪大肠菌群检测方法的对比

文中进行了多管发酵法和酶底物法检测水中(耐热)粪大肠菌群结果的对比。首先,试验通过对认证的商售IDEXXQC大肠埃希氏菌和绿脓假单胞菌分别作为阳性和阴性控制菌株进行检测,其结果显示均在置信范围。其次,用较清洁的水样和污水进水水样分别进行多管发酵法和酶底物法平行检测,并进行配对t检验。较清洁的水样结果显示P=0.818(0.05)、相关系数r=0.947;污水进水水样结果显示P=0.712(0.05)、相关系数r=0.602,差异无统计学意义。相关系数均大于0.6,两种检测方法相关性均较强,说明多管发酵法和酶底物法检测水中(耐热)粪大肠菌群具有一致性。     

黄芩苷对大肠埃希菌的抗菌活性及其作用机制

目的探讨黄芩苷对大肠埃希菌的抗菌活性及具可能的作用机制。方法在检测黄芩苷对大肠埃希菌最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)及抑菌活力的基础上,进一步检测1倍MIC的黄芩苷对大肠埃希菌胞外乳酸脱氢酶活力、前向散射光及DNA含量的影响。结果黄芩苷对大肠埃希菌的MIC为7 mg/mL,干预2 h时即可达到抑菌活性高峰。1倍MIC的黄芩苷作用大肠埃希菌后,菌液中乳酸脱氢酶活力逐渐上升,8 h时抑菌活力高达(201. 48±19. 06)U/L。1倍MIC的黄芩苷作用大肠埃希菌2 h后,细胞体积缩小、DNA含量减少,与对照组相比,差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论黄芩苷通过对大肠埃希菌细胞膜造成损伤而增加其通透性,使菌体物质大量外渗,从而实现其抗菌活性。