内质网应激通过C/EBP同源蛋白调控死亡受体5对肝星状细胞凋亡的影响

目的:研究内质网应激（ERS）与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对肝星状细胞凋亡的影响以及在凋亡过程中二者相互关系。方法:以大鼠肝星状细胞HSC-T6为研究对象，使用毒胡萝卜素作为内质网应激诱导剂，熊去氧胆酸作为内质网应激抑制剂，SP600125作为c-Jun氨基末端激酶（JNK）抑制剂，将HSC-T6分成正常组、DMSO组、TRAIL组、毒胡萝卜素组、熊去氧胆酸组、siCHOP组及SP600125组。利用流式法检测毒胡萝卜素诱导HSC-T6凋亡程度；应用小分子RNA干扰技术沉默CHOP基因；免疫组化法检测Caspase-8表达；RT-PCR与Western blot法检测ERS标志性蛋白C/EBP同源蛋白（CHOP）及肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)受体死亡受体5（DR5）的表达。结果:随着毒胡萝卜素浓度增加(1 μmol/L，2 μmol/L，4 μmol/L，8 μmol/L，16 μmol/L)，可诱导HSC-T6发生不同程度的凋亡。RT-PCR与Western blot结果表明ERS标志性蛋白CHOP可诱导TRAIL受体DR5及Caspase-8表达上调；同时，siCHOP及JNK抑制剂SP600125的应用，均可使HSC细胞中DR5及下游Caspase-8的表达随之减少。结论:CHOP和JNK可能是调节DR5表达的潜在因子，两者在诱导肝星状细胞凋亡的过程中发挥着重要的作用。     

地塞米松对顺铂诱导的HepG2细胞凋亡及Bcl-2和Caspase-3蛋白表达的影响

目的: 探讨地塞米松对顺铂诱导HepG2细胞凋亡的影响,并观察Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达。方法: HepG2细胞与顺铂及不同浓度的地塞米松共培养,RT-PCR检测Bcl-2、Caspase-3的mRNA表达,Western blot检测Bcl-2、Caspase-3蛋白表达,流式细胞术(FACS)检测各组HepG2细胞的凋亡情况。结果: 随着地塞米松浓度的增加,HepG2细胞中Bcl-2蛋白表达量升高,Caspase-3蛋白表达量下降。同时细胞凋亡率降低。结论: 地塞米松部分通过Bcl-2途径抑制肝癌细胞的凋亡,而Caspase-3又在调控细胞凋亡中起重要作用。     

木瓜三萜抗吲哚美辛诱导RGM-1细胞凋亡的作用

目的:观察木瓜三萜对吲哚美辛诱导RGM-1细胞凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法: 用吲哚美辛诱导RGM-1细胞建立细胞损伤模型,MTT法检测不同浓度木瓜三萜对RGM-1细胞增殖、流式细胞术和Hoechst33258染色分析木瓜三萜对吲哚美辛诱导细胞凋亡的影响,JC-1染色法测定细胞线粒体跨膜电位水平,Caspase试剂盒检测RGM-1细胞中Caspase-9和Caspase-3的活性,Real-time PCR检测RGM-1细胞中TFF1、p53、Bcl-2及Bax mRNA表达,Western blot检测RGM-1细胞中TFF1和p53蛋白表达。结果: 当木瓜三萜浓度低于100 μg/mL时,木瓜三萜对RGM-1细胞的生长无明显的影响;当木瓜三萜浓度低于50 μg/mL时,木瓜三萜与吲哚美辛联用对RGM-1细胞的生长有促进作用;木瓜三萜可显著增加吲哚美辛诱导RGM-1细胞损伤的活性(P<0.05,P<0.01),升高线粒体膜电位,抑制细胞凋亡和改善细胞形态,上调TFF1蛋白表达及TFF1、Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2与Bax的比值,下调p53蛋白表达及p53和Bax mRNA表达,降低Caspase-9及Caspase-3活性(P<0.05,P<0.01)。结论:木瓜三萜可有效抑制吲哚美辛诱导RGM-1细胞凋亡,其作用机制可能与上调TFF1、Bcl-2,下调p53、Bax、Caspase-3、Caspase-9表达有关。     

硒酸酯多糖诱导白血病多药耐药细胞凋亡的作用机制

目的: 观察硒酸酯多糖(Kappa-selenocarrag-eenan, KSC) 对 K562/ADM 耐药细胞的诱导凋亡效应, 并探讨其作用机制。方法: 应用噻唑蓝(MTT) 比色法、Wright-Giemsa 染色、DNA 琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术(Flow cytometry, FCM) 观察K562/ADM 细胞凋亡;FCM 测定 K562/ADM 细胞 Fas、P53 和 Bcl-2 蛋白表达水平;RT-PCR 检测 Caspase-3 mRNA 的表达。结果: 50 ~ 500 mg°L^-1KSC 抑制 K562/ADM 细胞增殖, 并诱导 K562/ADM 细胞凋亡, 细胞出现呈典型凋亡形态改变, DNA 电泳可见 DNA 梯状条带(DNAladder);FCM 分析出现亚 G 1 期细胞群, S 期细胞比例增高。Fas 蛋白表达上调, Bcl-2 蛋白表达下调,Caspase-3 mRNA 表达显著增强, 但 P53 蛋白表达无明显改变。结论: KSC 通过 Fas 依赖性 Caspase-3 激活途径诱导K562/ADM 细胞凋亡。     

胡椒碱脂质体的制备及对于胃癌细胞体外抗肿瘤活性的作用研究

目的: 研究胡椒碱脂质体的制备方法及胡椒碱脂质体体外抗胃癌细胞活性及作用机制。方法: 利用旋转薄膜冻融法制备胡椒碱脂质体,采用透射电镜（TEM）观察脂质体的形态,粒径分析仪和Zeta电位测定仪分析胡椒碱脂质体的粒径和Zeta电位,进行脂质体的稳定性实验、体外释药特性考察。体外培养人胃肿瘤MKN45细胞,分为正常组、对照组、实验组,对照组使用50 μmol/L的胡椒碱干预,实验组使用等剂量的胡椒碱脂质体干预。采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡水平,蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达水平,Hoechst 33342染色观察细胞染色。结果: 胡椒碱脂质体形态为类球状,平均粒径为(92.32±2.10) nm,Zeta电位为(-49.8±3.5) mV,体外释药实验显示胡椒碱脂质体释药速率显著高于胡椒碱原料药;细胞实验结果显示,对照组和实验组细胞活力相比正常组显著降低,具有时间依赖性（P<0.05）,而实验组相比对照组具有统计学意义（P<0.05）;流式细胞术检测,对照组和实验组细胞凋亡率高于正常组,而实验组显著高于对照组（P<0.05）;对照组和实验组中Bcl-2水平显著下调,而Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达显著上调,与正常组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论: 胡椒碱脂质体释药速率高于原料药,说明脂质体对于胡椒碱起到了增溶作用,而胡椒碱脂质体体外诱导MKN45凋亡能力高于原料药。     

TO901317促进人乳腺癌细胞凋亡的研究

目的: 研究肝X受体激动剂TO901317对人乳腺癌细胞凋亡的影响。方法: 不同浓度（0, 10, 20, 40 μmol/L）TO901317处理MCF-7和MDA-MB-231两种人乳腺癌细胞不同时间（0, 12, 24, 48 h）,用MTT法检测细胞活力,Hoechst 33342染色及流式Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot进一步检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase 3和cleaved-Caspase 3等的表达。 结果: 随着TO901317处理浓度的增加和时间的延长,对细胞活力的抑制作用逐渐增强,凋亡现象逐渐明显。进一步通过Western blot检测发现,TO901317可下调Bcl-2蛋白表达,促使凋亡蛋白Bax和cleaved-Caspase 3表达增多,进一步证实TO901317促进两种乳腺癌细胞凋亡。 结论: TO901317能促进MCF-7和MDA-MB-231两种人乳腺癌细胞凋亡。     

同源盒基因2在黑色素瘤细胞对于曲美替尼耐药中的作用

目的:研究同源盒基因2（MSX2）在黑色素瘤细胞A375对于曲美替尼耐药中的作用机制。方法:构建曲美替尼耐药的A375细胞株（A375-AR）,曲美替尼干预A375和A375-AR后采用CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达以及MSX2的表达。采用小干扰RNA（siRNA）沉默A375-AR中MSX2基因,设计A375、A375-AR、A375-AR-MSX2,曲美替尼干预后,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达以及MSX2的表达。构建MSX2过表达的A375细胞系（A375-OE）,设置A375、A375-OE和A375-AR组,曲美替尼干预后,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达以及MSX2的表达。结果:A375-AR对1.8 nmol/L的曲美替尼耐药,采用1.8 nmol/L曲美替尼干预后,A375细胞活力和细胞凋亡率显著高于A375-AR,A375细胞中Bcl-2基因表达水平低于A375-AR,而Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达水平高于A375-AR。A375-AR沉默MSX2后,细胞对于曲美替尼敏感性显著增高,且细胞活力下调,凋亡率上调,细胞中Bcl-2表达下调,Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达上调。A375过表达MSX2后,细胞对于曲美替尼敏感性显著下调,细胞活力上调,凋亡率下调,细胞中Bcl-2表达上调,Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达下调。结论:MSX2基因可以诱导黑色素瘤细胞对于曲美替尼的耐药,是治疗黑色素瘤耐药的潜在靶点。     

3-溴丙酮酸联合多西他赛对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

目的: 观察3-溴丙酮酸（3-Bromopyruvic acid,3-BrPA）联合多西他赛（docetaxel,DTX）对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响,并探讨相关分子机制。方法: MTT实验检测不同药物处理后乳腺癌MDA-MB-231细胞株存活情况;流式细胞术PI单染法检测用药后细胞凋亡情况;ATP试剂盒检测3-BrPA对细胞内ATP水平的影响;线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）检测3-BrPA对细胞线粒体膜电位的影响;Western blot 检测用药后HexokinaseⅡ、Bax、Bcl-2和Mcl-1蛋白的表达情况。结果: 3-BrPA、DTX均可抑制MDA-MB-231细胞的生长,呈现浓度依赖性,低浓度3-BrPA明显增强DTX对MDA-MB-231细胞的抑制作用;3-BrPA作用于MDA-MB-231细胞5 h后,随药物浓度递增细胞内ATP水平递减;3-BrPA作用于MDA-MB-231细胞24 h后,HKⅡ表达减少,且使细胞线粒体膜电位发生降低; 40 μmol/L 3-BrPA联合2 μmol/L DTX处理24 h后,MDA-MB-231细胞凋亡率为63.5%,较单独用药组的凋亡率明显提高(P＜0.01)。3-BrPA与DTX联合作用于MDA-MB-231细胞后,凋亡相关蛋白Bcl-2和Mcl-1的表达减弱,Bax的表达增强。结论: 3-BrPA可增强DTX对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用以及凋亡诱导作用,其机制可能与下调Mcl-1和Bcl-2表达、上调Bax表达有关。     

白杨素衍生物dFMAChR体外抗乳腺癌作用及其可能机制

目的 研究白杨素衍生物6,8－二－三氟甲基－5－羟基－7－乙酰氧基白杨素（dFMAChR）对体外培养人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响,并对其体外抗乳腺癌作用机制进行初步探讨。方法 MTT法测定dFMAChR对MCF-7细胞增殖活性的影响;Hochest染色观察dFMAChR诱导MCF-7细胞凋亡的形态学改变;进一步DNA凝胶电泳证实dFMAChR确有诱导MCF-7细胞凋亡作用;Western Blot检测凋亡相关蛋白PPARγ、PTEN、p-Akt、Caspase-3的表达水平。结果 dFMAChR可剂量依赖性抑制人乳腺癌细胞的增殖,IC50值为8.51μM;3.0,10.0,30.0 μM dFMAChR处理人乳腺癌细胞48 h后Hochest染色镜下可见核浓缩的凋亡细胞,10.0,30.0 μM dFMAChR处理人乳腺癌细胞48 h后DNA凝胶电泳显示“梯形”条带,说明dFMAChR可诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡;Western blot结果表明不同浓度的dFMAChR可浓度依赖性上调PPARγ、PTEN、 Caspase-3蛋白表达,下调p-Akt的表达。结论 dFMAChR具有体外抗乳腺癌作用,其诱导凋亡机制与激活PPARγ/PTEN信号通路,最终增加Caspase-3蛋白表达有关。     

灯盏花素对非小细胞肺癌A549细胞的促凋亡作用

目的: 分析灯盏花素对非小细胞肺癌细胞的促凋亡作用以及对移植瘤生长的影响及初步机制探讨。方法: 检测25、50、100 μmol/L灯盏花素处理后A549细胞凋亡、Caspase-3活性及促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2表达的改变,用A549细胞构建裸鼠皮下移植瘤模型,每日腹腔注射10 mg/kg和20 mg/kg灯盏花素,每周观察肿瘤的大小、裸鼠体质量,第21天时处死小鼠,获取瘤体,Western blot检测Bax和Bcl-2的表达,分析Bax/Bcl-2比值变化;免疫组化法检测组织内Caspase-3表达变化,TUNEL染色检测肿瘤组织内细胞凋亡情况。结果: 灯盏花素增加A549细胞凋亡率;酶标仪检测结果显示灯盏花素处理后,Caspase-3活性较对照组显著增加;Western blot结果显示灯盏花素能够显著抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表达,增加促凋亡蛋白Bax表达,致Bax/Bcl-2比值显著增加。体内实验中,第14和21天时,肿瘤大小较对照组明显减小;而裸鼠的体质量无明显降低。Western blot检测结果显示灯盏花素能够上调Bax的表达,下调Bcl-2的表达,而Caspase-3的表达明显增加。TUNEL染色结果显示灯盏花素处理后,细胞凋亡比例较对照组明显增加。 结论: 灯盏花素能够在体内外诱导A549细胞凋亡,其机制可能是灯盏花素通过上调Bax的表达和抑制Bcl-2的表达,增加Bax/Bcl-2的比值,激活Caspase-3,达到促凋亡作用。     

芦丁联合奥沙利铂对人胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡的影响

目的: 探讨芦丁联合奥沙利铂对人胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡的影响。方法:采取对数生长期的人胃癌SGC-7901细胞作为研究对象,应用MTT法检测药物对胃癌SGC-7901细胞生长抑制率;Hoechst33258核染色观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡率;Western blot方法分析SGC-7901细胞中caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白表达。结果:芦丁(100、200、300 μmol/L)、奥沙利铂均可抑制SGC-7901的增殖,且呈剂量相关性;芦丁联合奥沙利铂与相同浓度奥沙利铂单用处理SGC-7901细胞相比,前者对SGC-7901细胞的抑制作用更显著(P<0.05);不同浓度芦丁与奥沙利铂联合处理SGC-7901细胞与奥沙利铂单用相比,前者显著提高了SGC-7901细胞的凋亡率(P<0.05)。芦丁作用后,caspase-3蛋白表达明显升高,Bcl-2/Bax蛋白表达的比值则明显降低(P<0.05)。结论:芦丁和奥沙利铂均可抑制SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与上调caspase-3、Bax及下调Bcl-2等凋亡相关蛋白表达水平有关;两者联合应用具有一定的协同效应。     

黄芪甲苷通过SDF-1/CXCR4信号通路诱导人肾腺癌细胞的凋亡

目的:观察黄芪甲苷对人肾腺癌细胞ACHN增殖、凋亡的作用及其对SDF-1/CXCR4信号通路活化的影响。方法:采用20、60、120 μmol/L黄芪甲苷干预ACHN细胞后,CCK-8分析黄芪甲苷对细胞增殖抑制率的影响,流式细胞仪检测黄芪甲苷对细胞凋亡率的影响,Western Blot方法分析黄芪甲苷对细胞中凋亡相关蛋白Csapase-8、Bax、Bcl-2及SDF-1/CXCR4信号通路相关蛋白表达的影响。结果:黄芪甲苷干预ACHN细胞后,细胞增殖抑制率明显升高,表现出时间和剂量依赖性（P<0.05）;黄芪甲苷干预组ACHN细胞凋亡率也显著升高（P<0.05）;药物处理组中促凋亡蛋白Csapase-8、Bax表达显著升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2及SDF-1、CXCR4蛋白表达水平显著降低,表现出剂量依赖性（P<0.05）。结论:黄芪甲苷抑制人肾腺癌细胞株ACHN增殖、诱导其凋亡的作用机制可能与降低SDF-1/CXCR4信号通路活化相关。     

肉桂油活性成分(E)-肉桂醛对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨肉桂油主要活性成分(E)-肉桂醛对人结肠癌LOVO细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制。方法:采用CCK-8法测定(E)-肉桂醛对LOVO细胞增殖活性的影响。平板克隆形成实验检测(E)-肉桂醛对LOVO细胞克隆形成能力的影响。AnnexinV-PE/7-AAD双染色法测定(E)-肉桂醛对细胞凋亡的影响。Western blot分析细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达水平。结果:(E)-肉桂醛能显著抑制结肠癌细胞LOVO的增殖活力和克隆形成能力(P<0.05)，且细胞增殖抑制作用随时间的延长和剂量的增加而增强。与对照组相比(E)-肉桂醛作用LOVO细胞48 h后，细胞凋亡率升高(P<0.05)。Western blot检测结果显示(E)-肉桂醛作用LOVO细胞48 h后Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05)，Bax、Caspase-3表达水平明显增高(P<0.05)。结论:(E)-肉桂醛能抑制结肠癌细胞增殖并诱导凋亡，其机制可能是通过增加Bax、Caspase-3的活性及抑制Bcl-2的表达来实现的，(E)-肉桂醛是一种具有发展潜力的抗结肠癌药物。     

和厚朴酚等五种中药有效成分对CYP酶活性的体外抑制作用

目的: 观察和厚朴酚等五种中药有效成分对人及大鼠肝微粒体四种药物代谢酶活性的影响,为临床中西药联用进一步的研究提供依据。方法: 采用人、大鼠肝微粒体体外孵育方法,以紫杉醇、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗、香豆素分别作为CYP2C8、CYP2C9/CYP2C11、CYP2E1和CYP2A6/CYP2A1/2的探针药物,应用液相色谱仪检测探针药物代谢产物生成量,由此计算抑制率和IC50,分析五种中药有效成分对CYP酶的活性是否具有影响。结果: 和厚朴酚、厚朴酚对人肝CYP2C9 的IC50分别为7.7 μmol/L和7.6 μmol/L,对大鼠肝CYP2C11的IC50分别为13.0 μmol/L和3.8 μmol/L。和厚朴酚、厚朴酚对人肝CYP2C8 的IC50分别为19.2 μmol/L和84.5 μmol/L,对大鼠肝CYP2C8、CYP2E1和CYP2A1/2以及人肝CYP2E1和CYP2A6的IC50均大于100 μmol/L。栀子苷、绿原酸、黄芪甲苷对人及大鼠四种CYP酶的IC50均大于100 μmol/L。结论: 和厚朴酚对人肝CYP2C9、CYP2C8和大鼠肝CYP2C11具有明显抑制作用,厚朴酚对人和大鼠肝CYP2C9/CYP2C11具有明显抑制作用,对人肝CYP2C8有较弱抑制作用。     

曲格列酮对白血病 NB4 细胞的增殖抑制作用及其作用机制

目的: 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ) 激动剂曲格列酮(troglitazone, TGZ) 对白血病NB4 细胞的增殖抑制作用及其作用机制。方法: 以不同浓度的 TGZ(0~ 80 μmol/L)作用于体外培养的NB4细胞0、24、48、72 h,应用MTT 法检测细胞生长抑制率, Hoechst33258 染色法检测细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡时的 DNA梯状条 带。用免 疫印迹法(Western Blot) 检测Caspase-3及其裂解底物多聚(ADP-核糖) 聚合酶PARP[(poly(ADP-ribose) polymerase) ] 表达水平的变化, 并对凋亡调节蛋白 Bax 及 Bcl-2 的表达水平进行检测 。结果: 20 μmol/L 以上的 TGZ 可显著抑制细胞的生长, 在Hoechst 染色后可见典型的细胞凋亡现象, 并呈现出明显的量-效与时-效关系, 药物作用 72 h 后在琼脂糖凝胶电泳上可见明显的DNA 梯 状条 带。Western Blot 检测结 果表 明,Caspase-3 被活化出现 20000 的亚单位, 同时 PARP被裂解出现 89000的亚单位片段。药物作用 48 h后凋亡抑制蛋白 Bcl-2 的表达水平明显降低, 而促凋亡蛋白 Bax 的表达水平显著升高。结论: TGZ能显著抑制 NB4 细胞的生长并诱导细胞发生凋亡, 通过激活 Caspase-3 以及降低 Bcl-2、升高 Bax的表达水平是 TGZ 诱导细胞发生凋亡的重要作用机制 ;这些结果表明 TGZ 是一种潜在的抗白血病药物。     

冬凌草甲素通过PI3K/Akt通路诱导MDA-MB-231细胞的凋亡

目的: 研究冬凌草甲素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖产生的影响,初步探讨其作用机理。方法: 体外培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用6、12、24 μmol/L 冬凌草甲素对其进行处理,采用倒置显微镜进行细胞形态学观察,MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测凋亡相关蛋白procaspase-3、PARP及Akt、p-Akt、p-GSK3β表达的变化。结果: 冬凌草甲素作用MDA-MB-231细胞24 h后,可观察到细胞凋亡的形态学改变,以24 μmol/L组最为明显。实验组与对照组相比,细胞存活率显著降低、凋亡率显著升高(P<0.01),具有时间和剂量依赖性,凋亡相关蛋白procaspase-3下调,caspase-3底物PARP被逐步剪切,并伴随p-Akt、p-GSK3β蛋白水平下调(P<0.05)。结论: 冬凌草甲素可有效抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖,诱导其凋亡,机制与PI3K/Akt通路的抑制有关。