抗荧光素单克隆抗体免疫磁珠的制备及初步应用

目的制备抗荧光素单克隆抗体免疫磁珠,并进行初步应用。方法采用B淋巴细胞杂交瘤技术制备抗荧光素单克隆抗体;制备腹水,经50%硫酸铵粗提后,再经阴离子交换树脂DE52进一步纯化单克隆抗体;采用氧化共沉淀法制备纳米磁性粒子;乳液聚合法制备羧基磁性微球;用碳二亚胺将抗荧光素单克隆抗体共价偶联于磁性微球表面,制备抗荧光素单克隆抗体免疫磁珠。用制备的免疫磁珠检测乙肝表面抗原,并与市售ELISA试剂盒的检测结果进行比较。结果共获得5株杂交瘤细胞株,其中1F12细胞株分泌的抗体效价、相对亲和力较高,特异性较好;纯化的1F12株单抗的纯度达95%,蛋白含量为2.4 mg/ml,ELISA效价为106,相对亲和力为0.2 mg/L,与FITC标记的BSA可特异性结合;纳米磁性粒子的平均粒径为150 nm,铁含量为71.63%;羧基磁性微球的平均粒径为210 nm,羧基含量约为2.15 mmol/g;每克羧基磁性微球可结合抗荧光素单克隆抗体约12 mg,制备的免疫磁珠可有效结合荧光素标记的蛋白。应用抗荧光素单克隆抗体免疫磁珠检测乙型肝炎表面抗原的灵敏度高于ELISA试剂,检测限达0.1 ng/ml。结论成功制备了抗荧光素单克隆抗体免疫磁珠,其具有应用于免疫检测分析的价值。     

实验性T多凝集红细胞的血型检测

人红细胞经神经氨酸酶处理后,与A、B、A B、O型成人血清及人血清制备的血型试剂都出现血凝,抗A、抗B血型单克隆抗体只与相应红细胞凝集;抗T单抗和花生血凝素只与T激活红细胞反应;抗M、抗N单抗和兔免疫血清试剂与T激活红细胞无凝集。进一步证实了人血清及其制备的血型试剂中含有抗T抗体。用血型单克隆抗体检测T激活红细胞,能得到正确的ABO定型;T激活红细胞的MN抗原已被神经氨酸酶破坏,用单抗和兔免疫血清试剂抗M、抗N都不能判断其原来MN血型。     

沉积法制备Fe_3O_4/P(AA-DVB)磁性复合微球

通过静电吸附与机械力共同作用的沉积法制备得到了Fe3O4/P(AA-DVB)磁性复合微球。分别采用无皂乳液聚合和共沉淀法制备得到单分散的P(AA-DVB)胶体粒子及Fe3O4纳米粒子,在静电吸附和机械力作用下,将Fe3O4纳米粒子附着并嵌入P(AA-DVB)胶体粒子表面及内部,制备得到Fe3O4/P(AA-DVB)磁性复合微球。该方法的优势在于最终磁性复合微球的粒径及粒径分布可以由前驱体P(AA-DVB)胶体粒子调控。磁性复合微球表面和内部Fe3O4纳米粒子的分布及磁含量可以由机械力作用时间进行调节。所制备的Fe3O4/P(AA-DVB)磁性复合微球平均粒径为542 nm,磁含量范围在11%~33%内可调。     

抗D(IgM)血型定型试剂(单克隆抗体)国家参考品的研制

目的研制抗D(IgM)血型定型试剂(单克隆抗体)国家参考品。方法将抗D(IgM)杂交瘤细胞培养上清液经0. 22μm滤膜无菌过滤分装,冻干制备抗D(IgM)血型定型试剂(单克隆抗体)国家参考品(简称参考品)。按YY/T 1238-2014《RhD(IgM)血型定型试剂(单克隆抗体)》行业标准,检测其外观、pH、特异性、亲和力及效价;并由4家实验室进行协作标定,进行瓶间精密度及热稳定性试验。结果参考品外观为白色冻干粉末,复溶后为无色或淡黄色透明液体,无摇不散的沉淀及异物;pH为7. 2;效价为1∶64;与RhD阳性红细胞有凝集反应,与RhD阴性红细胞无凝集反应;凝集时间均在15 s以内,3 min凝集块均大于1 mm2。经各实验室协作标定,随机抽取的2支参考品效价均为1∶64;37℃放置3、7、14 d的效价均为1∶64。结论成功制备抗D(IgM)血型定型试剂(单克隆抗体)国家参考品,其瓶间精密度及稳定性均较好,可用于抗D(IgM)血型定型试剂(单克隆抗体)效价检测的质量控制。     

抗C(IgM)血型定型试剂国家参考品的研制

目的研制抗C(IgM)血型定型试剂(单克隆抗体)效价测定用国家参考品。方法筛选抗C(IgM)杂交瘤细胞,获得培养上清液,根据效价进行稀释,经冻干为国家参考品。对其进行分装均匀性、冻干后的外观、水分、效价检测,并联合多家实验室进行协作标定,同时进行瓶间精密度及热稳定性检测。结果国家参考品为白色冻干粉末,复溶后外观为无色或淡黄色透明液体,平均水分含量为1.70%,分装瓶间均匀性良好。经协作标定,抗C血型定型试剂(单克隆抗体)对CC红细胞的效价为1∶16,对Cc红细胞的效价为1∶8。瓶间精密度效价检测结果均一致。参考品于37℃放置3、7、14 d后,与-20℃保存的参考品效价一致。结论成功制备了抗C(IgM)血型定型试剂(单克隆抗体)国家参考品,可用于抗C(IgM)血型定型试剂(单克隆抗体)效价检测的质量控制。     

沉淀聚合法制备壳聚糖磁性微球

要用共沉淀法制备Fe3O4磁性纳米粒子,并对其用油酸进行表面改性,继而采用沉淀聚合法制备壳聚糖磁性微球。考察了沉淀剂浓度、乳化剂种类、Fe3O4的改性等条件对制备微球的影响。应用扫描电镜、红外谱图、接触角仪、粒径分析仪及磁铁吸附对壳聚糖磁性微球的形态与特性进行了表征。研究结果表明,在适宜的沉淀剂浓度、复合乳化剂、Fe3O4经油酸改性等条件下,可以制得平均粒径为150nm、单分散性好且磁性明显的壳聚糖磁性微球。     

β-环糊精磁性复合微球的合成及表征

以六水合三氯化铁为铁源、乙二醇为溶剂和还原剂,采用溶剂热法制备了Fe3O4磁性粒子,同时以正硅酸乙酯为硅源,在碱性条件下对其进行修饰,从而得到具有较好稳定性和分散性的Fe3O4磁性粒子。又以β-环糊精和该修饰的Fe3O4磁性粒子为原料,环氧氯丙烷为交联剂,煤油为油相,采用反相乳液聚合法成功合成了β-环糊精磁性复合微球,并通过SEM、EDS、IR及XRD等方法对该微球进行了表征。结果表明:所合成的β-环糊精磁性复合微球表面光滑,形状比较圆整,粒径大小比较均匀,平均粒径约7μm,具有磁性且保留了β-环糊精的基本结构。     

组装法制备巯基改性磁性SBA-15

采用热分解法制备了单分散、平均粒径约15nm的锰铁氧体磁性纳米粒子。通过正硅酸乙酯与磁性纳米粒子表面油酸盐的配体交换将磁性纳米粒子锚定在SBA-15表面。并且将负载过程与巯基改性过程耦合制备了巯基改性的磁性SBA-15。考察了合成SBA-15过程中干燥方式对其结构和性质的影响,研究了负载磁性纳米粒子和巯基改性顺序对巯基改性磁性SBA-15的结构和性能的影响。结果表明,喷雾干燥法合成的SBA-15介孔孔壁较薄,但具有更大的比表面积、孔体积和平均孔径。以其为载体时磁性纳米粒子负载量更大,所得磁性SBA-15的饱和磁强度更高。当将巯基改性和负载磁性纳米粒子分为前后两步时,巯基改性SBA-15的表面疏水环境有利于吸附疏水磁性纳米粒子,所得磁性SBA-15负载磁性纳米粒子量更大,饱和磁强度更高。磁性纳米粒子粒径大于SBA-15孔径,其主要负载于SBA-15外表面,有利于得到介孔孔道通畅的磁性SBA-15。巯基改性的磁性SBA-15的孔体积介于0.56~0.6cm³/g,比表面积介于353~432m²/g,饱和磁强度最高达到0.91emu/g,可作为一种大容量的吸附材料用于吸附分离、药物缓释等领域。     

Fe_3O_4/SiO_2核壳结构复合纳米粒子的制备研究

首先通过共沉淀法、还原沉淀法和水热法制备Fe_3O_4纳米粒子,对其进行表面改性,防止粒子之间的团聚,然后采用溶胶-凝胶法,以Fe_3O_4纳米粒子为种子,在醇和水的混合体系中,碱性条件下催化正硅酸乙酯水解,生成物包覆在磁性纳米颗粒表面,制备小粒径核壳结构的二氧化硅磁性复合微球。利用X射线衍射仪对所制备的二氧化硅磁性复合微球的粒径和物相组成进行表征。实验结果表明二氧化硅磁性复合微球在室温下表现出良好的稳定性。     

新型磁性聚苯乙烯微球的制备及表征

为了制备一种以四氧化三铁磁性纳米粒子为壳、聚苯乙烯为核的新型高分子功能材料,并有望应用于磁稳定流化床反应器,采用悬浮聚合法制备了四氧化三铁纳米粒子包覆聚苯乙烯的磁性微球。运用扫描电镜（SEM）、红外光谱（FT-IR）、振动样品磁强计（VSM）、热失重（TGA）等测试手段,分析并表征了磁性聚苯乙烯微球的形貌特征、粒径、磁学性能及四氧化三铁包覆量。实验结果表明,所得磁性聚苯乙烯粒子为球状微球,粒径为150~200 μm且分布较窄;磁性聚苯乙烯微球的四氧化三铁包覆量达到7.81%（质量分数）,最高饱和磁化强度为3.97 A·m2/kg。     

ABO血型反定型试剂质控方法和质量标准的建立

目的建立ABO血型反定型试剂的质控方法和质量标准。方法用抗P、抗M、抗N、抗C、抗c、抗E、抗e试剂检测O型血浆样本,选择分别与抗P、抗M、抗C、抗e试剂反应呈■强阳性样本,和与抗P、抗N、抗c、抗E试剂反应呈■强阳性样本各2份,配制ABO血型反定型用O型细胞。分别对两个厂家提供的和自制的ABO血型反定型用O型细胞进行抗原性检测,同时进行外观、特异性、ABH抗原性、亲和力、溶血率、稳定性检测,并检测35份含IgM类不规则抗体的阳性血浆样本,对比检出率。结果自制的ABO血型反定型用O型细胞与抗P、抗M、抗N、抗C、抗c、抗E、抗e试剂反应均呈■以上,而其他两个厂家提供的ABO血型反定型试剂均有部分抗体漏检;外观、特异性、ABH抗原性、亲和力、溶血率、稳定性检测均无明显差异,符合相关要求;自制的ABO血型反定型用O型细胞可检出所有IgM类不规则抗体,无漏检,而其他两个厂家提供的ABO血型反定型试剂均有部分血浆样本漏检。结论本研究建立的质控方法和质量标准适用于IgM类不规则抗体的检出。     

梯形微板法在ABO反定型中的应用

目的评价梯形微板法在ABO反定型中的应用。方法采用梯形微板进行血型抗原抗体免疫学反应,利用高科技摄像数码分析技术进行凝集判别,确定血型,分析该方法的准确性、可靠性、重复性和脂血抗干扰性,同时以U型微板法作平行对照。结果梯形微板法的准确性为99.97%,可靠性较高,重复性为100%,且能有效避免脂血的干扰,各项指标均优于U型微板法。结论梯形微板法在ABO反定型鉴定中是一项准确性高、稳定性好的检测手段,更适合于血站系统的大批量标本的结果处理。     

抗狂犬病马血清效价ELISA检测试剂的制备

目的制备检测抗狂犬病马血清效价的ELISA试剂。方法采用ELISA间接法。先用抗狂犬病病毒IgY包被酶标板,并确定其最适包被浓度;制备酶标二抗,并确定其最佳使用浓度。对试剂的灵敏度、特异性、精密性、稳定性及与小鼠中和试验结果的相关性进行考核。结果抗狂犬病病毒IgY和酶标二抗的最适浓度分别为10!g/ml和1∶1500,试剂灵敏度为0.072IU/ml,特异性良好,批间及试验间变异系数均小于11%,37℃放置3和5d检测样品结果与放置前差异无显著意义,与小鼠中和试验结果呈正相关。结论所制备的抗狂犬病马血清效价ELISA检测试剂盒,可用于抗狂犬病马血清效价的检测。     

1名Am亚型患者的血型血清学鉴定及输血策略

目的对Am亚型患者的血型进行血清学鉴定,并为其输血选择适合的血液成分。方法对1名ABO正反定型不相符患者,用抗-A、抗-A1、抗-B、抗-AB和抗-H单抗检测红细胞ABH抗原;A、B、O型红细胞与血浆反应检测ABO血型抗体及不规则抗体;吸收放散试验检测红细胞弱抗原;中和抑制试验检测唾液中ABH血型物质。根据患者血型血清学检测结果,选择相容血液成分进行输血。结果该患者符合Am亚型的血型血清学特征,输入O型少白细胞红细胞6U,A型单采血小板1治疗量后,均能达到预期疗效,无不良反应。输血后3个月的血型血清学检测结果与输血前完全一致。结论ABO血型鉴定时坚持正、反定型,可避免将Am亚型误定为O型,对Am亚型的准确鉴定有赖于多种血型血清学试验。Am亚型患者输血时可选择O型红细胞、A型血小板、A型或AB型血浆。     

破伤风抗体IgG酶联检测试剂盒的研制

目的 研制检测破伤风IgG的酶联检测试剂盒。方法 以精制破伤风类毒素进一步纯化后作为包被抗原,辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗人IgG作为抗体制备ELISA试剂盒,并进行敏感性、特异性及重复性检测。结果 试剂盒敏感性可达0.003 9 IU/ml,特异性达95％以上,重复性好,CV<7％,试剂盒置于37℃、7 d敏感性无明显改变。结论 成功地制备了破伤风抗体IgG酶联检测试剂盒。     

1份正反定型不符献血者标本的血清学及分子特性分析

目的对1份正反定型不符的献血者标本进行血清学及分子特性分析。方法采用吸收放散试验进行红细胞弱抗原检测,SSP-PCR方法进行基因分型,PCR产物克隆后进行测序分析。结果该标本血清学反应格局符合Ax亚型,分子生物学检测为A型。测序结果表明,Exon4含有2个连续碱基错义突变位点,分别为nt187G>A,nt188C>T,导致第63位氨基酸的改变(Arg63His)。结论该Ax亚型是由于Exon42个碱基突变,引起氨基酸的改变,导致糖基转移酶活性的降低,从而使红细胞上表达的A抗原大大减少。     

弱外磁场诱导氧化沉淀法制备Fe3O4纳米粒子

通过弱外磁场诱导氧化共沉淀法合成Fe3O4纳米粒子,并采用XRD、SEM、VMS表征产物晶型、形貌和磁性能。结果表明,弱外磁场可诱导加速α-FeOOH向Fe3O4的相转变,产物粒子为尖晶石结构,且结晶良好;产物粒子在外加弱磁场诱导后更倾向于向多面体形貌生长,且粒度分布变窄、粒径变大;产品的磁性能由于粒子晶化程度、形貌、粒度分布的变化,其饱和磁化强度、矫顽力均变大。     

树形高分子增强的高分子磁性颗粒的制备与表征

利用化学共沉淀法制备Fe3O4磁性纳米粒子;悬浮聚合的方法制备带有酰胺基的聚苯乙烯-丙烯酰胺磁性颗粒(NMP);发散法制备聚酰胺胺树形高分子(PAMAM)并与酰胺修饰聚苯乙烯磁性颗粒结合,得到树形高分子增强的磁性微粒。并对NMP和PAMAM-NMP的颗粒基质晶体结构、饱和磁化强度、表面官能团和微观结构以及各元素的百分含量进行表征。结果显示,Fe3O4磁核晶形完整,平均粒径为9 nm;PAMAM-NMP的红外图谱在3478 cm-1和3 300 cm-1处有吸收峰,证明存在胺基;经PAMAM增强后氮元素百分含量由0.225%增加到0.992%,证明PAMAM为NMP提供了更多的活性基团;在有无磁场存在时的沉淀时间分别为16 h和2112 h,证明PAMAM-NMP有良好的磁响应性和悬浮性。     

孕妇IgG类红细胞血型不规则抗体对早期诊断Non-ABO-HDN的意义

目的探讨孕妇IgG类红细胞血型不规则抗体对早期诊断Non-ABO-HDN的意义。方法筛查4200份孕妇血清中红细胞血型不规则抗体,阳性者检测抗体特异性、免疫球蛋白类型及效价;对检测出IgG类不规则抗体者,分娩时取脐血(或新生儿血)检测血清(浆)游离抗体,并进行红细胞直接抗球蛋白试验和红细胞放散试验,以诊断其是否发生HDN。结果4200份孕妇血清中检出红细胞血型不规则抗体44份(阳性率为1.05%),其中20份孕妇血清的抗体为IgG类或IgG及IgM混合抗体,脐血(或新生儿血)检测结果,10名婴儿发生了Non-ABO-HDN,1名发生了宫内死胎。致病的抗体特异性分布为:抗-D2例、抗-c1例、抗-E2例、抗-cE1例、抗-M4例(其中1例并有抗-A)。结论孕妇体内IgG类的Rh血型系统的抗体及抗-M易引起non-ABO-HDN,检测孕妇IgG类红细胞血型不规则抗体对早期诊断Non-ABO-HDN、鉴别引发HDN的抗体型别、评估HDN的严重程度及制定治疗方案均具有重要意义。