采用AFLP分析齐口裂腹鱼DNA指纹的技术探讨

AFLP（选择性扩增片断长度多态性）指纹技术被认为是当今最有效的DNA指纹分析技术之一,但是由于该技术操作流程较长,对模板DNA质量要求较高以及PCR反应成分等变数条件的影响,要获得高清晰的DNA指纹图谱比较困难。文中以齐口裂腹鱼为研究对象,对AFLP的分析条件作了一定的探索。结果表明：基因组DNA必须是高纯度、高分子量;酶切充分;PCR反应最佳条件为：引物E—XYZ,M—XYZ在体系中的浓度分别为1ng／mL,5ng／mL;dNTPs浓度为0．2mmol／L;MgCl2浓度为1．9mmol／L。银染时在NaOH条件下显色比在传统银染法中的Na2CO3条件下显色,图谱背景更干净,条带更清晰。     

PCR-核酸探针斑点杂交法检测痕量白斑综合征病毒(WSSV)

设计了2对引物用于检测对虾白斑综合征病毒(WSSV),外引物用于PCR扩增,内引物用于合成探针进行斑点杂交。结果表明,外引物PCR-电泳的检出极限为1pg WSSVDNA;PCR产物经内探针斑点杂交,可检出10fg的WSSV DNA;单纯的内探针斑点杂交只能检测出1ng以上的WSSV DNA。PCR-斑点杂交的检测灵敏度比PCR-电泳高2个数量级,比单纯斑点杂交高5个数量级。Southern杂交表明,PCR-斑点杂交检测WSSV特异可靠。该方法可用于痕量WSSV的检测。     

近江牡蛎16S rRNA基因片段序列变异分析

采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增了近江牡蛎Crassostrea rivularis(Gould)线粒体DNA16S rRNA基因,获得了大约为500bp的片段。PCR产物纯化后进行序列测定,经Clustal X同源排序,去除引物及部分端部序列,得到了415bp的核苷酸片段。比较并分析了该片段的钦洲湾、长沙湾、镇海湾和珠江口共105个近江牡蛎个体的核苷酸序列多态性,共检测到23个多态性核苷酸突变位点,包括16个转换位点和7个颠换位点,发现了1个核苷酸插入突变位点。4个群体可分为12种单倍型。结果表明：4个群体中广西钦洲湾群体遗传多样性最高,其次为长沙湾、珠江口群体,镇海湾群体最低。     

坛紫菜5.8S rDNA和ITS区片段的序列分析及应用

对坛紫菜(Porphyra haitanensis)野生(GL)和栽培(PXV)品系的5.8S rDNA-ITS兀区进行了PCR扩增和序列分析,扩增的GL和PXV的DNA片段长度分别为1213 bp和1221bp,包含完整的ITS1-5.8S-ITS2区.然后对紫菜7个种9个品系(其中6种7个品系从GenBank数据库中获得)的rDNA相应序列进行了排序和系统进化分析,结果表明:9个紫菜品系rDNA中5.8S区的长度和序列非常保守,而ITS区的长度和序列则变异较大;根据它们的序列差异,计算出这9个紫菜品系的遗传距离在0.010～0.551之间,遗传相似性在44.9%～99%之间;并且采用邻接法构建了这9个紫菜品系的系统发育树,发现可以明显分为4个进化枝,由此讨论了分子分类方法同传统分类方法的分歧.实验结果表明,5.8S rDNA.ITS区序列可以成为紫菜种质鉴定和系统进化研究的强有力工具.     

采用AFLP分析齐口裂腹鱼DNA指纹的技术探讨

AFLP(选择性扩增片断长度多态性)指纹技术被认为是当今最有效的DNA指纹分析技术之一,但是由于该技术操作流程较长,对模板DNA质量要求较高以及PCR反应成分等变数条件的影响,要获得高清晰的DNA指纹图谱比较困难.文中以齐口裂腹鱼为研究对象,对AFLP的分析条件作了一定的探索.结果表明:基因组DNA必须是高纯度、高分子量;酶切充分;PCR反应最佳条件为:引物E-XYZ,M-XYZ在体系中的浓度分别为1 ng/mL,5ng/mL;dNTPs浓度为0.2mmol/L;MgCl2浓度为1.9mmol/L.银染时在NaOH条件下显色比在传统银染法中的Na2CO3条件下显色,图谱背景更干净,条带更清晰.     

小冰麦异附加系TAI-27中附加染色体上 NBS同源序列的扩增

植物对病虫害的抗性主要是由抗病基因（resistance gene,R)决定的。目前已经克隆了20多个R基因,大部分都属于NBS－LRR类,这类基因编码NBS（nucleotide binding site,NBS)和LRR(leucine-rich repeat,LRR)两个比较保守的结构域。植物的NBS有几个保守区,本文根据其中的P－loop和GLPL两个保守区设计了简并引物,通过PCR扩增NBS序列。在PCR扩增中使用的DNA模板是从小冰麦异附加系TAI－27中微分离的附加的单条染色体,这条染色体上携带BYDV（barley yellow dwarf virus,BYDV)抗性基因。PCR扩增产物主要有三条带,200bp,400bp和950bp,将其中的200bp(nbsA)和400bp(nbsB)克隆到pGEM T-vector上并分别测序。3个nbsA克隆的测序结果完全一致;对nbsB的60多个克隆的不同酶切分析,只发现了一个克隆的酶切特性与其他不同。所以说,以单条染色体为模板PCR扩增产物组成比较简单,省去了RFLP作图的许多工作,可以为克隆R基因提供特异性探针。本文的实验设计将染色体微切割和微克隆技术与基因克隆联系在一起,为克隆R基因提供了一条捷径。     

供电企业完善计量检测体系的实践与思考

安徽省供电企业开展完善计量检测体系的工作始于1996年。在那一年的全省计量协会年会上．省质量技术监督局宣贯了GB／T19022．1-1994，鼓励协会会员单位创造条件，自愿申请。开展完善企业计量检测体系的工作。省电力公司计量办公室审时度势，积极宣传、引导各供电企业开展这项工作．到     

光学蛋白质芯片法测定甲胎蛋白的初步研究

采用微流道反应器系统，优化甲胎蛋白单克隆抗体浓度，并装配在醛基改性后的硅片表面上，经牛血清白蛋白封闭后形成检测AFP芯片阵列。通过制作AFP浓度梯度标准曲线标定光学蛋白质芯片，实现肿瘤标志物AFP的检测，结果表明，该方法的最低测定浓度可以达到1．Ong／mL，变异系数为3．1％，回收率在94．4～105．O％之间，与人纤维蛋白原的交叉反应率≤O．25％、与1％葡萄糖≤0．08％、与人源1gG≤0．16％和与人血清白蛋白≤0．20％，说明光学蛋白质芯片技术检测AFP，灵敏度高、重复性好、操作简便，有望应用于临床检测。     

C端带多聚组氨酸标签的重组小鼠基质细胞衍生因子-1α原核系统的表达及分离纯化

在构建SDF-1原核表达系统的基础上，探索对其活性表达产物分离纯化的技术路线。将从小鼠骨髓组织克隆出的SDF-1a成熟肽基因插入原核表达质粒pET101／D-FOFO，用以转化大肠杆菌B1221Star^TM菌株，经SDS-PAGE进行诱导表达。SDS-PAGE和Western Blot检测证实：其表达产物在约11．6kD处有明显条带显示，其大小与预测的重组SDF-1a／His分子量一致。采用Ni^2 -Resin固相亲和层析法对由该系统表达的C端带6Xhis标签的重组SDF-1a／His进行分离纯化，纯度达92％。体外活性检测结果表明：重组小鼠SDF1a／His对T细胞有明显趋化和促生存作用；能有效诱导Jurkat细胞ERK磷酸化。     

一种模拟游离DNA阳性质控品的制备方法及表征

通过优化一种新型的机理未明确的类酶解作用体系(reaction system, RS),直接作用带有KRAS G12C,KRAS G12D,EGFR L858R和EGFR T790M突变的肿瘤细胞系SW1573,SNU-C2B和NCI-H1975,通过对RS体系作用时间及作用的细胞数量的优化，可以裂解细胞基因组DNA制备得到一种可以高度模拟人体血浆游离DNA(cfDNA)阳性质控品。经芯片电泳检测获得的模拟cfDNA片段长度集中于(166±16) BP,与正常人体血浆cfDNA大小一致；通过微滴数字PCR检测显示RS制备的DNA片段和gDNA在目标突变位点处具有一致的突变丰度。表明经RS体系制备得到的DNA片段可以作为一种cfDNA的阳性质控品。     

牙鲆自然杀伤细胞增强因子(NKEF)全长cDNA的克隆及表达分析

采用快速扩增cDNA末端（rapid amplification of cDNA ends,RACE）的方法,分离和测定了牙鲆自然杀伤细胞增强因子（NKEF）cDNA的全长核苷酸序列,5’RACE扩增分离得到了400bp左右的片段,3’RACE扩增得到了800bp左右的片段,经过拼接得到了牙鲆NKEF全长cDNA序列。牙鲆NKEF cDNA全长1028bp（不包含polyA）,其中包括67bp的5’非翻译区、597bp的开放阅读框和364bp的3’非翻译区（不包含polyA）,整个开放阅读框编码198个氨基酸。RT—PCR分析表明,NKEF基因在牙鲆不同组织中普遍表达,但是表达水平存在着明显的差异。研究结果为提高牙鲆自身免疫防御能力的研究提供了理论依据。     

运用一步化体外转录—翻译系统筛查基因突变的新技术

报道了一种筛查基因突变的新技术－ＰＣＲ结合一步化体外转转录－翻译系统。该技术包括：（１）ＰＣＲ扩增靶ＤＮＡ片段，并使ＤＮＡ产物的一端或两端带上Ｔ７Ｔ１序列；（Ｔ１：翻译起始信号，ＣＣＡ ＣＣＡ ＴＧ）；（２）以核的为模板，利用一步化体外转录－翻译系统合成相应肽链；（３）用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及高分辨ｐＨ梯度ＰＡＧＥ（聚丙烯酰胺凝胶电泳）分离分析多肽产物，通过异常电泳图谱而发现基因突变，本文以已知突变的     

3D打印医用钛合金的抗菌性能和体外生物相容性

应用选择性激光熔融技术(SLM)制备出3D打印医用钛合金Ti-6Al-4V和Ti-6Al-4V-5Cu,用平板共培养法研究测定其抗菌性能,用CCK8细胞增殖测定法、鬼笔环肽细胞骨架染色法和Annexin-V/PI流式细胞术研究了这种合金的抗菌性能和对小鼠胚胎成骨前体细胞(MC3T3-E1)的体外生物相容性影响。结果表明,3D打印Ti-6Al-4V-5Cu合金具有较高的抗菌性能,对金黄色葡萄球菌的抗菌率达到(57.03±1.55)%。在CCK8细胞增殖毒性测定、细胞骨架鬼笔环肽染色实验和Annexin-V/PI双标记法流式分析三种研究中Ti-6Al-4V-5Cu表现的优越,具有更好的体外生物相容性。     

几种帘形目贝类rDNA ITS序列的比较

扩增并测序了4种帘形目和1种蚶目贝类(外群)核糖体DNA的转录间隔区(ITS)序列.帘形目贝类序列长度在874bp到1466bp之间,GC含量在62%到67%之间,ITS序列在相近的3种帘蛤科贝类之间表现出长度保守性和碱基组成的相似性.采用ITS1,ITS2,以及ITS1与ITS2的连接序列进行聚类,结果表明:2种蛤仔聚为一枝,表现出较近的亲缘关系,帘蛤科的3种贝类聚在一起,再与同属帘形目的缢蛏相聚.研究的结果揭示了帘形目贝类的系统发生关系.     

SARS病毒特异性靶基因的多重PCR检测技术研究

本研究探讨了多重PCR技术在SARS病毒检测中的应用。根据香港中文大学在GenBank上公开发表的SARS病毒基因组cDNA序列,人工合成克隆特异性靶基因DNA片段,以此片段作为阳性样品,根据世界卫生组织推荐的进行单PCR与多重PCR检测分析。以单PCR法获得了121bp、182bp及302bp的靶基因片段3条;以二重PCR法获得了121bp+182bp、121bp+302bp与182b+302bp的靶基因片段组合;以二重PCR法获得了121bp+182bp+302bp的靶基因片段组合。结果表明:多重PCR技术可成功应用于SARS病毒的检测。     

碳酸氢铵与金属阳离子摩尔比对共沉淀法合成铽镓石榴石纳米粉体及陶瓷性能的影响

本研究以碳酸氢铵(AHC)为沉淀剂, 采用共沉淀法制备了TGG粉体。以上述粉体为原料, 将素坯于1500 ℃空气预烧3 h, 然后于1550 ℃, 150 MPa氩气气氛下HIP后处理3 h获得TGG陶瓷。系统研究了碳酸氢铵与金属离子摩尔比(R值)对合成粉体的相组成、形貌以及TGG陶瓷的透光率和Verdet常数的影响。R=3.6, 4.0和4.4的前驱体在1100 ℃煅烧形成纯相TGG粉体, 而R=3.2的前驱体经相同温度煅烧后形成了TGG和Ga₂O₃的混合相粉体。R=4.0的TGG粉体分散性和均匀性最好, 故制备的陶瓷光学质量最佳。R=4.4的粉体具有较严重的团聚, 这与其前驱体形貌密切相关。以R=4.0的粉体为原料, 制备的TGG透明陶瓷在1064 nm处的直线透过率为80.1%。制备的TGG陶瓷在633 nm处的Verdet常数和商业TGG单晶(-134 rad·T ^-1·m ^-1)几乎相等。     

聚合物材料光稳定剂UV-326的生产和应用

本文概述了产品UV - 32 6的生产工艺过程 ,即 :将 4 氯 2 硝基苯胺 ( 1)用亚硝酸钠( 2 )和硫酸重氮化后与 2 特丁基 4 甲基苯酚 ( 3)进行偶合及应制成 2 硝基 4 氯 2’ 羟基 3’特丁基 5’ 甲基偶氮苯 ( 4 )。 ( 1)、( 2 )、( 3)的摩尔比为 1∶1.14∶1.18。将 ( 4 )用硫化钠还原为 2 ( 2’ 羟基 3’ 特丁基 5’ 甲基苯基 ) 5 氯苯并三唑氮氧化物 ( 5) ,然后用锌粉还原 ( 5)制成最终产品 2 ( 2’ 羟基 3’ 特丁基 5’ 甲基苯基 ) 5 氯苯并三唑 ( 6) (UV - 32 6)。光老化试验表明 ,UV - 32 6是聚烯烃、ABS、聚酯等树脂的优良光稳定剂     

Nonlinear dielectric response of AgNb(1-x)Ta(x)O3 in the vicinity of diffuse phase transitions

Linear and nonlinear dielectric studies of AgNb(1-x)Ta(x)O(3) (ATN) ceramics (x ≤ 0.6) were carried out in the temperature range of 80 to 673K. The temperature dependences of third-order nonlinear electric susceptibility X3'(T) exhibit two distinct maxima: at the temperature of the weak ferroelectric phase appearance, M(1)-M(2) transition, and at the temperature of the Nb/Ta ion dynamics freezing, Tf. For AgNbO3, they appear at 325K and 448K, respectively. With increasing Ta concentration, both maxima shift toward lower temperature: 4K/%Ta (M(1)-M(2)) and 5.6K/%Ta (T(f)). The X3' (T) maxima indicate changes of the Nb/Ta ion dynamics and their contribution to electric susceptibility. At T(f), a partial freezing of the Nb/Ta ion displacements to the disordered antipolar, antiferroelectric array takes place. At the M(1)-M(2) transition, further freezing of Nb/Ta displacements to polar weak relaxor ferroelectric or dipolar glass transition occurs. This polar state coexists with the ground antiferroelectric state. Studies of the aging process showed that below T(f) the aging influence on electric susceptibility is substantial, whereas above Tf it may be neglected. This means that for ATN ceramics in the concentration range used for applications, there is no aging process in the room temperature region, which is an additional advantage of this system.     

MS for identification of single nucleotide polymorphisms and MS/MS for discrimination of isomeric PCR products

ESI (electrospray ionization) MS and tandem mass spectrometry (MS/MS) were used for the analysis of single nucleotide polymorphisms (SNPs) and more complex genetic variations. Double-stranded (ds) PCR products were studied. PCR products of the proline [5'-x(G17)-x(C38)x-3'] and arginine variants [(5'-x(Gl7)-x(G38)x-3'] of the p53 gene are distinguished by an SNP (cytosine or guanine) and were discriminated using both quadrupole and quadrupole ion trap MS analysis. A 69 bp arginine mutant PCR product [5'-x(C17)-x(G38)x-3'] with a negating switch has the same mass as the proline variant but was readily distinguishable on ion trap MS/MS analysis; fragments containing the mutation site, but not the polymorphism, were identified. The 69 bp PCR products were restriction-enzyme-digested, to create 43 bp fragments. ESI quadrupole ion trap MS/MS analysis of the 43 bp product-ion spectra readily demonstrated both polymorphism and negating switch sites. MS and MS/MS are powerful and complementary techniques for analysis of DNA. MS can readily distinguish SNPs but MS/MS is required to differentiate isomeric PCR products (same nucleotide composition but different sequence).     

海带栽培品系和长海带ITS区的PCR扩增及序列分析

对遗传背景清晰且具有显著表型差异的海带6个栽培品系(CUL002,CUL860,CUL1170,CUE017,CUE018,CUL901)和长海带(L．longissia)的ITS区进行了PCR扩增和序列测定,并分析了8个种17个品系(其中7种共10株从GenBank中获得)海带之间的系统进化关系。结果表明：表型各异的6个海带栽培品系ITS区差别很小,其中ITS1 5．8S rDNA序列完全相同,部分品系间ITS2序列有个别碱基差异;进化树显示与日本海带(L．japonica,AF319018)聚在一起,相似性大于98％,其中CUL901、CUL860和CULll70的ITS序列完全相同。长海带(L．longissia)的ITS 5．8S rDNA和日本海带(L．japonica,AF319018)的完全相同。以Undaria peterseniana为外类群,根据ITS 5．8S rDNA序列构建进化树,6栽培品系及长海带与日本海带聚在一起;17株海带基本构成两个大的进化枝。研究结果揭示了我国海域栽培的长海带可能与日本海带(L．iaponica,AF319018)为同一个种。