一种鉴别粗品肝素钠不同种属来源的简便方法

目的采用SAX-HPLC快速鉴别不同种属来源的粗品肝素钠。方法通过肝素酶酶解不同种属来源的粗品肝素钠,以其酶解后的二糖组份为考察对象,通过SAX HPLC法比较二糖的相对组成,鉴定种属来源。同时在猪来源肝素中分别添加不同比例(5%,10%,15%,20%,25%)的牛来源肝素或羊来源肝素,经肝素酶酶解后,通过SAX HPLC法鉴别在猪来源肝素中是否能快速检出不同种属来源的其他肝素。结果对于不同种属来源的粗品肝素钠,它们的二糖组成具有显著差异;若猪来源肝素混入5%羊来源肝素,即可通过其二糖组成判断。结论此法操作简便,成本较低,可用于不同种属来源的粗品肝素钠的定性检测。     

7种肉类线粒体DNA的提取及鸭源性成分检测

探讨肉类线粒体DNA(mitochondrial DNA,mt DNA)提取方法,对7种生肉中的鸭肉成分进行鉴别。应用改良盐析法和柱层析法提取肉类mt DNA,紫外分光光度计检测mt DNA的浓度和纯度,设计鸭肉cyt b特异性引物,采用PCR对7种生肉中的鸭肉成分进行鉴别。结果:两种提取肉类mt DNA的方法均能保证DNA的浓度及纯度达到PCR的要求,柱层析法成本略高于改良盐析法;鸭引物可以从7种生肉中鉴别出鸭源性成分,经过多次重复试验证明了鸭肉引物的特异性,为肉制品质量监控的应用提供了实验基础。     

cyt b基因在肉制品种属来源鉴定中的应用

目的:利用cyt b基因设计分子探针并用于肉制品种属来源的鉴定。方法:对多种肉制食品进行总DNA提取,并基于cyt b基因设计的引物进行PCR扩增目的基因片段,测定cyt b基因片段的PCR扩增产物序列,使用BLAST搜索软件将其序列与Gen Bank中的同源序列进行比对分析。结果:采用设计的cyt b基因引物对我国10大类共计27种肉制品进行DNA扩增,均得到清晰单一的目的基因片段;测序及序列比对结果显示实验采用的cyt b基因作为分子标记得到的碱基序列,可以准确的实现物种鉴定。结论:实验中对肉制品种属来源的鉴定方法准确、简单、高效,适用于检测机构对肉制品种属来源的快速鉴定,并能为食品监管部门判定肉制品掺假造假提供有力的技术支持和依据。     

白花丹参内生真菌HBG16的抗凝血活性研究

目的:考察白花丹参内生真菌菌株HBG16的体外抗凝血活性。方法:采用形态学和分子方法进行属种鉴定;通过PDB培养基对HBG16进行液体发酵,采用甲醇、乙醇、乙酸乙酯和丙酮对菌丝体代谢产物进行提取,考察体外条件下甲醇、乙醇、乙酸乙酯和丙酮四种溶剂粗提物对家兔体外凝血时间(CT)、凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)以及活化部分凝血酶时间(APTT)的影响。结果:白花丹参内生真菌HBG16经鉴定为尖孢镰刀菌;HBG16的菌丝甲醇粗提物对于内源性、外源性凝血都具有一定的延长作用,并且内源性凝血途径最为明显;丙酮、无水乙醇粗提物只作用于内源性凝血途径。结论:白花丹参内生真菌HBG16具有很好的抗凝血作用,可为研制安全无毒的新型抗凝血类药物提供新的资源和方法。     

蚕蛹壳聚糖复合止血材料的制备及凝血性能初探

探讨以蚕蛹壳聚糖(CS)和明胶(GEL)为主要原料制备复合止血材料的工艺及凝血效果.首先从蚕蛹中提取出壳聚糖,与明胶共混溶解后添加助剂,通过冷冻真空干燥法制备海绵状复合止血材料,然后采用凝血指数BCI进行体外凝血测试,研究其制备工艺参数对凝血效果的影响.实验表明,最佳工艺参数为:-40℃下预冻1 h,共混溶液质量浓度为30 g/L,mCS∶mGEL=5∶5.0.01%的戊二醛、0.5%的氯化钙能有效提高样品的凝血效果.凝血指数BCI相对于医用纱布和明胶止血海绵分别降低了63.52%和34.85%,凝血效果得到显著提高.     

鱼鳔类肝素提取工艺优化及抗凝血活性研究

以鱼鳔为原料,采用酶法提取类肝素,研究其提取工艺参数和体外抗凝血活性。在单因素试验基础上,以加酶量、酶解时间和温度为影响因子,类肝素得率为响应值,采用响应曲面法优化鱼鳔类肝素(HSB)提取工艺,并通过测定活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)和血浆凝血酶时间(TT)评价其抗凝血活性。结果显示,最优提取条件为2709碱性蛋白酶添加量5.4 mg/mL,酶解温度50℃,时间20h,在该条件下类肝素得率为(1.79±0.05)%,与预测值相差3.24%;同时,所提取的类肝素具有一定的抗凝血活性,并通过外源性凝血途径和共同凝血途径发挥作用。     

广西市售婴儿食品中克罗诺菌分离株基因特征及进化分类鉴定

目的分析广西市售婴儿食品中的克罗诺菌分离株的种类、表型和基因特性。方法将保存的试验菌株进行复苏,通过API 20E生化条和omp A基因扩增检测进行初步鉴定,扩增16S r RNA基因后进行测序,将获得的全16S r RNA基因序列在Gene Bank数据库上比对,构建进化树,确认是否为克罗诺菌。将试验菌接种于显色平板观察其表型和黄色素的产生情况,通过手工生化进行分型,确定其种属。结果 9株分离菌确定为克罗诺菌,有5种生化型,属于4个克罗诺种。检出Cronobacter sakazakii 6株菌,C.malonaticus、C.muytjensii和C.dublinensis各有1株;7株菌符合API 20E鉴定结果,9株分离菌均可检测到omp A基因。结论广西市售婴儿食品中克罗诺菌的污染以C.sakazakii为主,生化表型、种属及基因型具有多样性;鉴定时仅以单一的生化或其他表型作为判别依据存在很大的局限,需辅以分子生物学手段加以鉴别。     

应用通用引物量化检测鲜肉及其制品中羊源性成分

分别以牛、羊、猪、鸡、鸭、马线粒体细胞色素b基因为研究对象,设计羊源性成分特异性引物和探针,同时结合实时荧光定量PCR技术,引入16SrDNA内参基因校正羊种属特异性基因测定方法,建立快速、高通量的鲜肉及鲜肉制品中羊源性成分确证方法,实现科学准确的食品掺假量化判定技术体系。通过特异性、通用性及模拟混合样品的检测,对所建立方法进行验证。结果表明:建立的羊源性成分含量测定方法具有良好的特异性和通用性,且通过标准曲线的构建,呈现良好的线性关系均达0.996以上;通过羊种属特异性基因与16SrDNA内参基因Quantity值及校正系数,可以计算出样品中所含羊源性成份的质量百分比含量,经模拟混合样品的检测,回收率平均值到达96.25%,说明量化研究结果具有较高的准确性。     

在明串珠菌中构建葡萄糖到甘露醇的转化体系

为了进一步提高甘露醇产量,在明串珠菌构建了葡萄糖到甘露醇的转化体系。通过2次同源重组,将mt1d-m1p表达盒串联体定点插入到染色体上。以90 g/L蔗糖为底物时,野生型菌株的甘露醇产量为31. 48 g/L,Δaldh::(mt1d-m1p)为42. 63 g/L,Δaldh::(mt1d-m1p)Δdts::amy为43. 47 g/L,Δaldh::(mt1d-m1p)Δdts::(mt1d-m1p)为45. 74 g/L,Δdts1ΔD-ldhΔpat::mdhΔstpk::mdhΔfk::mdhΔaldh::(mt1d-m1p)为47. 26 g/L。增加甘露醇的合成途径是增产的手段之一。     

鳕鱼皮明胶-Ca~(2+)复配止血粉的止血活性研究

利用超滤技术制备三个不同分子量段(Mr50 ku、10 kuMr50 ku、Mr10 ku)的鳕鱼皮明胶,分别与Ca~(2+)复配为明胶-Ca~(2+)复配止血粉。通过液体吸收倍率、大鼠体内、外止血实验,探究了不同分子量鳕鱼皮明胶-Ca~(2+)复配止血粉的止血性能,并对其止血机制做初步探讨。结果表明:高分子量鳕鱼皮明胶-Ca~(2+)复配止血粉的液体吸收倍率最大,且能显著(p0.05)缩短体外凝血时间(24 s),降低大鼠股动脉出血时间(114 s)和肝创面出血时间(97 s)。高分子量鳕鱼皮明胶-Ca~(2+)复配止血粉能显著(p0.01)缩短活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT),主要影响内源性凝血途径;并能促进血小板聚集,通过促进大鼠血小板第四因子(Rat Platelet Factor 4,PF4)、P-选择素(Rat P-Selection)和血栓素B2(Rat Thromboxane B2,TXB2)的释放来缩短凝血时间。高分子量明胶-Ca~(2+)复配止血粉可以作为一种有效的止血材料投入到止血产品的工业化生产中。