酶底物光谱法与酶底物法检测水中大肠菌群的比较分析

采用新型酶底物光谱法和酶底物法对不同类型水样中总大肠菌群、大肠埃希氏菌及粪大肠菌群指标进行同步检测。两种方法各有优势,采用SPSS软件对检测结果处理后进行配对t检验,结果显示：两组总大肠菌群的数据P=0.057,相关系数r=0.904;两组大肠埃希氏菌的数据P=0.593,相关系数r=0.972;两组粪大肠菌群的数据P=0.136,相关系数r=0.986,表明两种检测方法具有相关性,且没有统计学意义上的显著性差异。采用酶底物光谱法检测有证质控样品,总大肠菌群、大肠埃希氏菌、粪大肠菌群的检测结果均在质控样真值范围内,证明该方法检测准确度符合要求。酶底物光谱法与酶底物法相比,反应原理类似,操作更加简便,具有仪器自动化和智能化快速检测、判读、存储、联网传输数据等优点,可满足实验室常规检测需求,在应急突发事件现场检测方面有较强的运用前景和优势。     

酶底物法在食品中大肠埃希氏菌MPN计数的应用研究

目的：探讨酶底物法在食品中大肠埃希氏菌MPN计数的应用,并对市售的2种酶底物试剂EC-MUG和科立得（Colilert）MMO-MUG进行比较。方法分别用两种酶底物试剂检测菌悬液和对6类食品大肠埃希氏菌MPN计数,同时用参考方法GB 4789.38—2012大肠埃希氏菌MPN计数检测,用McNemar’s检验对结果进行分析。结果 EC-MUG和科立得MMO-MUG酶底物检测菌悬液和6类食品的大肠埃希氏菌MPN计数,与参考方法比较,无统计学差异（χ2=0.01,P﹥0.05）。EC-MUG 和科立得 MMO-MUG 酶底物检测无统计学差异（χ2=0.01,P﹥0.05）;科立得 MMO-MUG酶底物检测结果易判断。结论酶底物法检测食品中大肠埃希氏菌MPN计数方便、快捷,有良好的应用前景。     

大肠埃希氏菌荧光定量PCR法与酶底物法相关性分析

针对大肠埃希氏菌国标法中的酶底物法检测时间长的现状,使用荧光定量PCR法和酶底物法同步检测大肠埃希氏菌,并比较分析两种方法检测结果的相关性.结果表明:荧光定量PCR法能检出细菌数为50 CFU/(100 mL)及以上的样品,含量在50～2000 CFU/(100 mL)的大肠埃希氏菌与酶底物法相比具有较高的一致性,相关系数r=0.99,经t检验分析,两种方法的检测结果无差异.荧光定量PCR法具有操作简便和检测时间短的优势,能作为酶底物法的有效补充手段,在实际水样的应急检测中具有较强的应用价值.     

酶底物法检测粪大肠菌群

文章对检测水中粪大肠菌群的方法进行了探讨。通过采集50种地表水和污水厂水样,分别用酶底物法和多管发酵法进行比较,从检测结果发现,两种方法的数据无明显差异,相关性好。相比之下,酶底物法更加高效、简便、快速、准确、二次污染少,是取代传统方法的发展趋势。     

滤膜法与固定底物酶底物法测定地表水中粪大肠菌群的比较研究

通过比较滤膜法与固定底物酶底物法测定地表水中粪大肠菌群(耐热大肠菌群)的结果和方法,讨论固定底物酶底物法用于监测地表水中粪大肠菌群的可行性。     

受污染缢蛏大肠埃希氏菌的净化研究

本研究探讨了受污染缢蛏在海水理化特性:水温:22℃,pH:7.9,盐度:31.2 ppt,溶解氧:7.02 mg/L,颜色及透明度:无色透明;实验室室温:25℃,湿度:65%的条件下充气放养几天才能使大肠埃希氏菌完全净化。试验结果表明该缢蛏样品经过海水的暂养和净化,可以降低其大肠埃希氏菌和菌落总数的数量,而且暂养的时间越长,样品中大肠埃希氏菌和菌落总数的数量越少。     

臭氧对水中大肠埃希氏菌和肺炎性军团杆菌的失活作用

臭氧是自然界中存在的强氧化剂。目前在许多发达国家和我国部分地区都有用作生活用水处理的最后消毒手段。本文利用近年来国外发表的文献资料和实验结果,简明扼要地介绍和讨论臭氧对大肠埃希氏菌(E Coli)和肺炎性军团杆菌(Legionella pneumophila)的失活作用。     

特定底物技术快速检测水中大肠菌群相关指标

大肠菌群(Coliforms)、耐热大肠菌群(thermotolerant coliforms)和埃希氏大肠杆菌(E.Coli)都是判断水体是否存在粪便污染的重要微生物指标。文中介绍了一种特定底物技术可在 24h之内同时检测大肠菌群和埃希氏大肠杆菌数量,如果提高培养温度至44.5±0.2℃,则可检测耐热大肠菌群数量。     

酶底物法检测水中总大肠菌群影响因素的探讨

采用酶底物法测定水中总大肠菌群。通过正交实验从样品放置室温时间、培养温度、培养时间和稀释用水等方面探讨酶底物法测定水中总大肠菌群的各种因素的影响。实验表明样品放置室温时间对水中总大肠菌群的测定的影响因素最大,第二为培养温度,第三为培养时间,影响最低的为稀释用水。酶底物法测定水中总大肠菌群的条件为：室温放置时间在20～23 min,培养温度在35.0～38.0℃,培养时间在24～28 h,采用稀释溶液(爱德士公司)、灭菌生理盐水(自配)来稀释样品。     

大肠杆菌及其耐乙酸突变菌的连续培养和代谢流比较

在氮源限制基本培养基中连续培养大肠杆菌DH5α及其乙酸耐受突变株DA19。与DH5α相比,突变株DA19降低了葡萄糖的消耗,减少了乙酸和丙酮酸的生成,提高了菌体关于葡萄糖的得率。利用物料平衡和代谢反应的化学计量关系,分析了二者在比生长速率0.13 h^-1下的稳态代谢流分布。与DH5α相比,DA19的三羧酸循环流量高,酵解途径的流量低,从而减少了乙酸等副产物的分泌,反映了能量代谢效率的明显提高。比较了二者异柠檬酸裂解酶、6-磷酸葡萄糖脱氢酶、磷酸果糖激酶、异柠檬酸脱氢酶和乙酸激酶的活性,酶活变化与代谢流结果基本一致。     

Effect of dextran polymers on the stability of soluble Escherichia coli penicillin G acylase

The stabilisation of Escherichia coli penicillin G acylase (PGA) by dextran polymers (of molecular weight 11.5, 37.7 and 71 kDa) was studied. The inactivation of both the native and dextran‐containing enzyme preparations obeyed first‐order kinetics at the temperature and pH values studied. The optimal concentrations of dextran polymers of molecular weight 11.5, 37.7 and 71 kDa stabilising PGA against inactivation were 50, 20 and 7.5 mmol dm⁻³ respectively. Dextran 11500 (11.5 kDa) gave 100‐fold protection of PGA against thermal inactivation of enzyme above 50 °C. The kinetic constants of the enzyme were slightly altered, but temperature and pH profiles were not altered by the dextrans. © 1999 Society of Chemical Industry     

C-terminal His-tagging results in substrate specificity changes of the thioesterase I from Escherichia coli

The biochemical properties of Escherichia coli thioesterase I, His-tagged (HT) on the C-terminal, were systematically analyzed and compared with that without the His-tag (WT). These two types of enzymes exhibit similar optimal temperature and pH dependence, but subtle differences were detected. Kinetic studies revealed that the k _car/JK _m values of the HT enzyme for the substrates palmitoyl-CoA and p-nitrophenyl dodecanoate were 36- and 10-fold lower than those of the WT, respectively. In contrast, HT had a fivefold increased catalytic efficiency for p-nitrophenyl acetate, and up to fourfold increases toward phenylalanine- and tyrosine-derived ester substrates, l-NBPNPE (N-carbobenzoxy-l-phenylalanine p-nitrophenyl ester) and l-NBTNPE (N-carbobenzoxyl-l-tyrosine p-nitrophenyl ester), respectively. For l-NBPNPE and l-NBTNPE, the increases were attributed to the higher k _cat values with little changes in K _m, whereas the increase for p-nitrophenyl acetate was mainly attributed to the lower K _m value. It is concluded that addition of six hydrophilic histidine residues on the C-terminus resulted in a change in substrate specificity of E. coli thioesterase I toward more hydrophilic substrates.     

Research Progress on Detection Methods of Fecal Coliform

粪大肠菌群是水体粪便污染的指示菌。详细介绍了多管发酵法、滤膜法、纸片法、酶底物法及分子生物学方法检测粪大肠菌群的优缺点及主要应用实例。     

重组大肠杆菌共表达D-海因酶和N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶

通过PCR分别扩增得到N-carbamoylase基因和上游带有RBS区的D-hydantoinase基因,并将其依次克隆入pBAD/His A质粒中,得到呈多顺反子结构的双酶表达质粒pBAD-CRH,转化E. coli Top10F￠得到重组菌TaraCRH. 实验证明,E. coli TaraCRH对外源蛋白的表达控制严紧,而加入阿拉伯糖诱导后可以成功表达两酶基因. 诱导条件优化结果表明,诱导温度采用29℃,培养基中阿拉伯糖浓度0.05 g/L可达到最高酶活. 进一步尝试采用玉米浆培养基代替LB培养基,在经过优化的玉米浆培养基中培养TaraCRH菌株,经阿拉伯糖诱导,海因酶和水解酶酶活分别达到3.52和4.21 U/mL.     

粪大肠菌群检测方法研究进展

粪大肠菌群是水体粪便污染的指示菌。详细介绍了多管发酵法、滤膜法、纸片法、酶底物法及分子生物学方法检测粪大肠菌群的优缺点及主要应用实例。     

外源蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达策略

长期以来,大肠杆菌一直是表达外源蛋白的首选表达系统. 但由于外源蛋白在表达过程中容易被宿主细胞蛋白酶降解或者形成包涵体,其应用受到了限制. 本文综述了在大肠杆菌中表达可溶外源蛋白的策略和进展,以期提高具有生物活性的外源基因的表达水平.     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药性分析

目的分析临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的分布情况及耐药性。方法收集吉林大学中日联谊医院临床标本中分离的221株大肠埃希菌和152株肺炎克雷伯菌,采用纸片扩散法检测抗菌素的敏感性;双纸片协同试验和纸片表型确证试验筛选并确证产超广谱β-内酰胺酶的菌株;按照美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)2005年版的标准判断结果。结果大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对亚胺培南和美罗培南的敏感性最高,均达100%;对头孢他啶、哌拉西林/他唑巴坦和头孢西丁的敏感性也较高,均大于70%,而对氨苄西林的耐药性均大于90%。共检出产超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌118株,检出率为53.4%;肺炎克雷伯菌21株,检出率为13.8%;产超广谱β-内酰胺酶的两种菌株与非产超广谱β-内酰胺酶的同种菌株相比,对抗菌素的耐药性均明显增加。结论大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌仍是产超广谱的β-内酰胺酶的主要菌株,且对常用抗菌素产生了较高的耐药性。