GSTP1和RASSF1A在前列腺癌组织中的甲基化检测及其表达研究

目的:研究前列腺癌和前列腺增生组织中GSTP1和RASSF1A基因的甲基化差异及其蛋白表达情况,探讨GSTP1和RASSF1A基因甲基化作为前列腺癌早期诊断的价值,并揭示该基因甲基化与前列腺癌的发生发展的关系。方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法检测GSTP1和RASSF1A基因启动子区CpG岛甲基化状态,并运用免疫组化SP染色法检测前列腺癌组织中GSTP1和RASSF1A基因的蛋白表达情况。结果:前列腺癌组织中GSTP1和RASSF1A基因甲基化检出率均明显高于前列腺增生组织,差异均有统计学意义(GSTP1:76.00%vs3.33%,P<0.001;RASSF1A:68.00%vs16.67%,P<0.001)。在前列腺癌中,GSTP1和RASSF1A蛋白阳性表达均明显低于前列腺增生组织,差异均有统计学意义(GSTP1:20.00%vs76.67%,P<0.001;RASSF1A:38.00%vs90.00%,P<0.001)。结论:GSTP1和RASSF1A基因异常甲基化可导致靶基因的蛋白表达降低,促进前列腺癌的发生发展。因此,GSTP1和RASSF1A基因在前列腺癌的发生、发展中起到重要作用,检测GSTP1和RASSF1A基因的甲基化有望成为前列腺癌早期诊断的分子标志物。     

XIAP在成人急性淋巴细胞白血病中的表达及其意义

目的探讨X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）在成人急性淋巴细胞白血病（ALL）中的表达及其临床意义。方法选取63例ALL患者,仞治者37例[B-ALL,29例,T-ALL8例;ph（＋）-ALL12例,ph（-）-ALL25例]为初治组,血液学完全缓解（CR）者15例（CR组）,复发者11例（复发组）。应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测ALL骨髓标本XIAP基因表达水平,以20例非恶性血液病患者骨髓标本为对照组。结果初治组XIAP基因表达水平高于CR组和对照组（P〈0．05）,与复发组相比差异无统计学意义（P〉0．05）;B-ALL患者XIAP表达水平与TAI上比较差异无统计学意义（P〉0．05）;ph（＋）-ALL患者XIAP表达水平高于ph（-）-ALL（P〈0．05）;初治组XIAP高表达者较低表达者CR率明显下降（P〈0．05）。结论ALL患者XIAP基因高表达,提示XIAP可能通过抑制白血病细胞凋亡参与了ALL的发生发展,为ALL的治疗提供了新思路。XIAP高表达可能是急性淋巴细胞白血病预后不良的指标之一。     

Pim-1在人宫颈鳞癌组织中的表达及临床意义

目的:研究Pim-1基因及其蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达水平,探讨其与宫颈鳞癌临床特性之间的关系。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量方法和免疫组化学法,检测46例宫颈鳞癌组织和10例正常宫颈组织标本中Pim-1基因及蛋白的表达情况。结果:宫颈鳞癌组织中Pim-1基因与蛋白的表达水平明显高于宫颈正常组织(P<0.05);Pim-1蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达与组织学分级、临床分期和淋巴结转移密切相关(P<0.05)。结论:原癌基因Pim-1及其蛋白在宫颈鳞癌组织中过度表达,可能与宫颈鳞癌的发生、发展有关。     

Caspase-3和Caspase-6在胃癌组织中的表达及意义

目的检测Caspase-3、Caspase-6基因在胃癌组织、癌旁正常组织中的表达,探讨两者与临床、病理因素的关系及两者之间的关系。方法采用RT-PCR方法检测42例胃癌患者的癌组织、癌旁正常组织中Caspase-3、Caspase-6基因的表达情况,并分析这2个基因与临床、病理因素之间的关系。结果 Caspase-3、Caspase-6基因在胃癌组织中表达率分别为38.09%（16/42）、31.05%（13/42）,在癌旁正常组织中的表达率分别为78.57%（33/42）、69.05%（29/42）,两者在胃癌组织和癌旁正常组织中的表达差异有统计学意义（P〈0.01）。Caspase-3、Caspase-6基因的表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小差异无统计学意义（P〉0.05）,与胃癌肿瘤浸润深度、肿瘤分化程度差异有统计学意义（P〈0.05）。Caspase-3基因的表达与淋巴结转移差异有统计学意义（P〈0.05）,Caspase-6基因的表达与淋巴结转移差异无统计学意义（P〉0.05）。在胃癌组织中,两者之间的表达差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 Caspase-3、Caspase-6基因的表达可能与胃癌的发生、发展相关,对胃癌发生、发展的过程起到下调的作用。联合检测Caspase-3、Caspase-6基因的表达更能反映胃癌的生物学行为,优于单项检测。     

环氧化酶-2与血管内皮生长因子-C在胃癌中的表达及相关性研究进展

查阅相关文献,综述了环氧化酶-2(COX-2)和血管内皮生长因子-C(VEGF-C)在胃癌组织中的表达以及在胃癌的转移过程中的相互作用,并提出目前存在的问题和今后应该研究的方向。     

垂体瘤转化基因和结肠癌转移相关因子1在视网膜母细胞瘤中的表达及意义

目的分析垂体瘤转化基因(PTTG)和结肠癌转移相关因子1(MACC1)在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)中的表达与RB临床病理特征的关系。方法采用免疫组化方法检测PTTG和MACC1在42例RB肿瘤组织和正常视网膜组织中的表达,分析二者在不同临床特征和高危病理特征RB中的表达特征与关系。结果 PTTG在RB组织中表达丰富,但在正常视网膜中几乎不表达,二者差异有统计意义(χ~2=27.68,P<0.05);MACC1在RB组织和正常视网膜中都有表达,二者在表达程度上差异有统计意义(χ~2=9.62,P<0.05);PTTG在未分化型和分化型、脉络膜受侵和未受侵、视神经受侵和未受侵RB组织中的表达差异均有统计意义(χ~2=6.17,χ~2=6.99,χ~2=9.70,P<0.05);MACC1在未分化型和分化型、脉络膜受侵和未受侵RB组织中的表达差异无统计意义(χ~2=0.48,χ~2=2.10,P>0.05),但在视神经受侵和未受侵RB组织中的表达差异有统计意义(χ~2=8.52,P<0.05);PTTG和MACC1在不同性别、年龄之间的表达差异无统计意义(P>0.05);PTTG和MACC1在RB组织内的表达无显著相关性。结论 PTTG和MACC1在RB组织中高表达,而且表达水平与RB分化程度、扩散转移等高危病理特征密切相关,提示PTTG和MACC1在RB的发生、发展中具有一定作用,对于预测RB浸润和转移有重要价值。     

IL-1B基因多态性及幽门螺旋杆菌感染与胃癌的关系研究

目的:探讨IL-1B基因多态性与胃癌易感性的关系。方法:以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析法检测65例胃癌患者和130例非胃癌患者的IL-1B基因位点多态性。结果:IL-1B-31及IL-1B-511均有3种基因型,分别是C/C、C/T和T/T;病例组Hp阳性感染率(70.8%)高于对照组(55.4%),差异有统计学意义(字2=5.6,P<0.05)。Hp感染时,IL-1B-511和IL-1B-31的T/T均能增加胃癌发病的风险,OR分别为8.1(95%CI:2.4-10.1)和11.5(95%CI:1.9-13.1)。结论:IL-lB-31和-511 TT基因多态性与河南地区胃癌的发生有关。     

组织芯片分析PRSS2蛋白在胃癌组织中的表达与意义

目的采用组织芯片分析PRSS2蛋白在胃癌组织中表达与意义,为获取胃癌诊断相关的蛋白分子提供实验资料。方法首先收集8例胃癌手术切除标本,包括正常胃粘膜、癌旁组织与胃癌组织,选用Westernblotting方法检测PRSS2蛋白在正常胃粘膜、癌旁组织与胃癌组织中的表达;其次运用免疫组织化学染色方法观察组织芯片(包括正常胃粘膜、癌旁和胃癌组织)中PRSS2蛋白在胃癌组织中的表达,分析其临床意义。结果胃癌组织中PRSS2蛋白表达较正常胃粘膜和癌旁组织明显升高,癌旁组织中的表达较正常胃粘膜组织升高;正常胃粘膜、癌旁和胃癌组织中PRSS2蛋白的阳性表达率分别为14.29%(5/34)、26.92%(7/26)和77.78%(63/81),在胃癌组织中高分化、中分化和低分化腺癌的阳性表达率分别为60.00%(3/5)、70.59%(12/17)和81.36%(48/59);PRSS2蛋白的阳性表达与胃癌组织的分化程度也呈现负相关。结论 PRSS2蛋白在胃癌组织中表达较正常胃粘膜和癌旁组织高,癌旁组织中的表达较正常胃粘膜组织高,该蛋白表达与胃癌组织的发生和分化程度有关。     

水稻DREB1基因植物表达载体的构建

研究提取低温处理的水稻幼苗总RNA,用DREB1基因特异引物通过RT-PCR扩增出1029 bp的片段。序列分析结果表明,该克隆序列与Gen Bank上的DREB1基因序列同源性达100%。利用Hind III酶切位点将含有35 s启动子、Os DREB1和NOS终止子的基因片段正向插入到p ZY101载体中,并采用冻融法热击转化到农杆菌EHA101中,为通过遗传转化方法研究DREB1的功能奠定基础。     

miR-424在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:检测胃癌组织中miR-424的表达,并探讨其与胃癌临床病理特征及预后的关系。方法:选取本院收治的55例胃癌患者的胃癌组织样本及相应癌旁组织,应用RT-PCR法检测胃癌组织和癌旁组织中miR-424 mRNA表达,分析其与胃癌临床病理特征间的关系。结果:4例患者随访失败,研究实际完成51例;胃癌组织中miR-424 mRNA阳性检出率为66.67%,明显高于癌旁组织的23.53%(P<0.01);胃癌组织中miR-424 mRNA的表达高于癌旁组织(P<0.01);胃癌组织中miR-424 mRNA的表达与胃癌患者的年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤直径无关(P>0.05),与浸润深度、TNM分期、分化程度、淋巴结转移有关(P<0.01);1年期随访发现,死亡15例,存活36例;死亡组在入院时胃癌组织中miR-424 mRNA表达高于存活组(P<0.01)。结论:miR-424 mRNA在胃癌组织中高表达,与胃癌的临床病理特征密切相关,可能是评判胃癌患者预后的有效指标。     

PUMA／ASPP1双抑癌基因对胃癌 SGC-7901细胞增殖的影响

目的：探讨 p53正向细胞凋亡调控因子（p53 up-regulated modulator of apoptosis protein,PUMA）／p53促凋亡蛋白（apoptosis stimulating protein of p53,ASPP）1融合基因及单个基因对胃癌 SGC-7901细胞的杀伤作用。方法通过脂质体（lipofectamine）2000TM 将 PUMA／ASPP1融合基因及 PUMA、ASPP1单个基因分别转染胃癌SGC-7901细胞系[实验设5组,分别为胃癌细胞无转染空白对照（SGC-7901）组,空载质粒转染细胞对照（SGC-7901-pcDNA3．1）组以及重组 ASPP1质粒转染细胞实验（SGC-7901-ASPP1）组、重组 PUMA 质粒转染细胞实验（SGC-7901-PUMA）组、重组 PUMA／ASPP1质粒转染细胞实验（SGC-7901-PUMA／ASPP1）组],再次经 G418筛选,获得稳定表达融合基因 SGC-7901-PUMA／ASPP1细胞株。通过 MTT 法及使用流式细胞仪测定各组胃癌SGC-7901系细胞的存活数（光吸收度即 A 值）及细胞周期。结果SGC-7901组与 SGC-7901-pcDNA3．1组 A 值比较差异无统计学意义（P ＞0．05）;SGC-7901-ASPP1组、SGC-7901-PUMA 组和 SGC-7901-PUMA／ASPP1组 A值明显低于 SGC-7901组与 SGC-7901-pcDNA3．1组（均 P ＜0．01）;SGC-7901-ASPP1组、SGC-7901-PUMA 组和SGC-7901-PUMA／ASPP13组中,SGC-7901-PUMA／ASPP1细胞组 A 值最低（P ＜0．01）。与 SGC-7901组、SGC-7901-pcDNA3．1组比较,SGC-7901-ASPP1、SGC-7901-PUMA、SGC-7901-PUMA／ASPP1组的 G1期明显增多,S 期明显减少,尤以 SGC-7901-PUMA／ASPP1组 S 期减少为甚（均 P ＜0．01）;SGC-7901-pcDNA3．1组与 SGC-7901组比较 G1期、S 期差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论双抑癌基因可有效抑制胃癌 SGC-7901系细胞增殖,双抑癌基因较单个抑癌基因具有更强的抗肿瘤作用。     

白英水提物对肺癌SPC-A-1细胞的凋亡及bcl-xl、bid表达的影响

目的观察白英水提物（extracts of solanun lyratum thumb,ESL）对肺癌SPC-A-1细胞凋亡及基因bcl-xl、bid表达的影响。方法常规法制备ESL,实验分为正常对照组、白英处理组。白英处理组加入ESL,终质量浓度分别为12.5、25.0和50.0 mg.mL-1;正常对照组的培养细胞不加药物处理。采用流式细胞仪检测细胞凋亡、半定量RT-PCR和免疫组织化学法分析细胞中bcl-xl、bid基因表达。结果与正常对照组比较,白英处理组SPC-A-1细胞增殖有显著性下降,细胞凋亡显著性增多（P〈0.05）;bcl-xl mRNA和Bcl-xl蛋白表达降低、bid mR-NA和Bid蛋白表达升高（P〈0.05）,并随ESL质量浓度的增加而加强。结论 ESL能诱导人肺癌SPC-A-1细胞上调bcl-xl基因表达,下调bid基因表达,且作用有一定的量效关系,这可能是白英诱导细胞凋亡的重要作用机制。     

中期因子和尿激酶型纤溶酶原激活物在胃癌中的表达及临床意义

目的检测胃癌组织中中期因子（MK）、尿激酶型纤溶酶原激活物（UPA）的表达,探讨MK、UPA与胃癌的侵袭、转移的关系,并与MK、UPA的相关性进行分析。方法应用免疫组织化学两步法检测60例胃癌组织（胃癌组）中MK、UPA的表达,并以20例胃癌旁（距离肿瘤边缘5 cm）的正常组织标本作为对照组。结果胃癌组织中的MK、UPA的表达率分别为63.33%、51.67%,对照组的MK、UPA的表达率分别为25.00%、10.00%,2组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。浸润全层的MK、UPA的表达高于浸润黏膜层、肌层的胃癌（P〈0.05）;低分化的MK、UPA的表达高于中分化胃癌（P〈0.05）;有淋巴结转移的MK、UPA的表达高于无淋巴结转移胃癌（P〈0.05）。MK与UPA的表达呈正相关（r=0.579,P〈0.001）。结论 MK、UPA的表达与胃癌的侵袭、转移密切相关,二者联合检测可作为判断胃癌发展及预后的分子指标。     

miR-148a / b 真核表达质粒的构建及其在胰腺癌细胞系中的表达简

目的构建miR-148a／b真核表达质粒,转染胰腺癌AsPC-1细胞,并观察其miR-148a／b的表达水平。方法根据miRBase提供的序列合成miR-148a／b前体,PCR扩增后形成双链,插入线性化真核表达质粒pcDNA3．1,构建pcDNA3．1／miR-148a／b,进行酶切和测序鉴定。将胰腺癌AsPC-1细胞分4组进行质粒转染：转染pcDNA3．1／miR-148a（miR-148a组）、转染pcDNA3．1／miR-148b（miR-148b组）、转染pcDNA3．1（空质粒对照组）和仅加脂质体（空白对照组）。转染48h后,采用定量PCR法检测各组细胞中miR-148a／b的表达量。结果pcDNA3．1／miR-148a／b的酶切和测序与miRBase提供的序列完全一致。转染48h后,miR-148a组AsPC-1细胞中的miR-148a表达量明显高于空质粒对照组和空白对照组（6．76±0．35比1．00±0．54、1．02±0．40,均P〈0．05）,miR-148b组AsPCq细胞中的miR-148b表达量明显高于空质粒对照组和空白对照组（3．28±0．08比1．02±0．35、1．01±0．28,均P〈0．05）。结论成功构建了miR-148a／b真核表达质粒pcDNA3．1／miR-148a／b,该质粒能显著上调胰腺癌AsPC-1细胞的miR-148a／b表达水平。     

Aurora-B激酶在肺腺癌组织中的表达及其临床意义

目的检测极光激酶B（Aurora-B激酶）在肺腺癌组织中的表达情况,探讨Aurora-B表达与肿瘤转移的关系。方法采用免疫组化SP法及Western blot分析47例肺腺癌组织标本[肺腺癌组,其中转移（转移组）15例、非转移（非转移组）32例]及11例正常肺组织标本（正常对照组）中Aurora-B的表达。结果肺腺癌组阳性表达率为63.8%（30/47）,明显高于正常对照组的9.1%（1/11）,差异有统计学意义（P〈0.05）;转移组阳性表达率为86.7%（13/15）,明显高于非转移组的53.1%（17/32）,差异有统计学意义（P〈0.05）。转移组、非转移组、正常对照组阳性着色细胞比例分别为（26.7±9.2）%、（15.3±6.4）%、（3.1±2.3）%;非转移组阳性着色细胞比例明显低于转移组（P〈0.05）,转移组、非转移组阳性着色细胞比例均明显高于正常对照组（均P〈0.05）。结论 Aurora-B激酶在肺腺癌组织中呈高表达,可能参与了肺腺癌的远端转移。     

Chk1/2转基因MGC803细胞系的建立与鉴定

目的构建Chk1/2基因的真核表达载体和建立高表达Chk1/2基因人胃癌MGC803细胞,为研究Chk1/2功能奠定基础。方法参照野生型Chk1/2基因mRNA全序列,在cDNA两端各设计一条对应引物,并引入各自的酶切位点。从人胃癌MGC803细胞中提取mRNA作为模板合成Chk1/2 cDNA第一链,并扩增目的基因全表达序列片断,双酶切后定向克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体,经氨苄青霉素筛选阳性重组质粒,菌液PCR及测序法对重组质粒进行鉴定。用脂质体将重组质粒转染入MGC803细胞,经G418筛选后,RT-PCR及Western blot检测表达产物。结果菌液特异性PCR结果表明克隆的基因片断分别为1.4 kb和1.6 kb,测序分别证实为Chk1和Chk2基因,经NCBIBLAST分析与Genbank中Chk1基因的同源性为100%,编码的氨基酸同源性为100%,Chk2基因的同源性为99%,编码的氨基酸同源性为100%。G418筛选转染细胞4周后获得稳定转染空载体pcD-NA3.1(+)的细胞克隆株和稳定转染重组质粒的MGC803细胞。经RT-PCR及Western blot鉴定,Chk1/2在MGC803细胞中的表达比对照组明显增加。结论成功构建Chk1/2基因真核表达载体与Chk1/2高表达MGC803细胞,为研究二烯丙基二硫诱导MGC803细胞G2/M期阻滞的机制奠定了基础。     

胃癌组织中Galectin-3和VEGF的表达及其临床意义

目的探讨胃癌组织中半乳糖凝集素-3（Galectin-3）和血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的表达及其临床意义。方法收集101例胃癌组织、20例癌旁5 cm组织,通过组织芯片结合免疫组织化学SP法检测Galectin-3和VEGF的表达,分析Galectin-3、VEGF与胃癌临床病理指标及其预后的关系。结果 Galectin-3和VEGF在胃癌、癌旁组织中都有表达,胃癌中Galectin-3和VEGF阳性表达率分别为85.1%和76.2%,明显高于癌旁组织的35.0%、25.0%（P〈0.05）;Galectin-3和VEGF的表达呈正相关（r=0.484 3,P〈0.05）,Galectin-3和VEGF与胃癌的临床分期、浸润深度、淋巴结转移、远处转移和预后有关（P〈0.05）。结论 Galectin-3和VEGF对于判断胃癌的恶性程度、浸润、转移和胃癌患者的生存期具有重要价值。     

ARHI基因与HuR蛋白在胰腺癌PANC-1细胞中的表达

目的观察ARHI基因转染胰腺癌PANC-1细胞后对HuR蛋白的影响。方法采用脂质体法将表达ARHI基因的质粒p LNCX2-ARHI-EGFP和空载体p LNCX2-EGFP转染胰腺癌PANC-1细胞,细胞分为3组:实验组(p LNCX2-ARHIEGFP)、空载体转染组(p LNCX2-EGFP)和PANC-1细胞空白对照组,用G418筛选稳定转染的细胞株;采用PCR和Western blot方法检测ARHI基因表达,采用Western blot方法检测HuR蛋白表达。结果稳定转染ARHI基因组可检测到ARHI基因mRNA和蛋白的表达。根据图像灰度计算蛋白条带相对表达量,稳定转染ARHI基因组HuR蛋白表达(0.2226±0.0644)较空载体对照转染组(0.4063±0.0925,P=0.029)和PANC-1细胞空白对照组(0.4178±0.1319,P=0.022)显著降低。结论 ARHI基因可以导致胰腺癌细胞株中HuR蛋白表达降低。     

肺癌组织中cPLA2和mPGES-1的表达及意义

目的探讨胞浆型磷脂酶A2（cPLA2）、微粒体前列腺素E合成酶-1（mPGES-1）在肺癌组织中的表达及临床意义,为肺癌发生发展的分子机制提供理论依据。方法采用RT-PCR检测60例肺癌（肺癌组）和癌旁（癌旁组）组织中cPLA2、mPGEs-1mRNA表达水平,采用免疫组织化学SP法检测2组组织中cPLA2、mPGEs-1蛋白表达水平。结果肺癌组组织中cPLA2、mPGES-1mRNA表达水平均明显高于癌旁组（均P〈0.05）。肺癌组组织中cPLA2蛋白阳性表达率为76.7%（46/60）,癌旁组组织中cPLA2蛋白无阳性表达,2组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;肺癌组组织中mPGES-1蛋白阳性表达率为66.7%（40/60）,明显高于癌旁组的10.0%（6/60）（P〈0.05）。肺癌组的肿瘤〈5cm、组织学类型为鳞癌、病理分级为高中分化、淋巴结无转移和TNM分期为Ⅰ期cPLA2蛋白阳性表达率与肿瘤≥5cm、组织学类型为腺癌、病理分级为低分化、淋巴结有转移和TNM分期为Ⅱ、Ⅲ期比较差异均无统计学意义（均P〉0.05）;肺癌组的肿瘤〈5cm、组织学类型为鳞癌mPGEs-1蛋白阳性表达率与肿瘤≥5cm、组织学类型为腺癌比较差异均无统计学意义（均P〉0.05）,肺癌组的病理分级为高中分化、淋巴结无转移和TNM分期为Ⅰ期mPGEs-1蛋白阳性表达率均明显低于病理分级为低分化、淋巴结有转移和TNM分期为Ⅱ、Ⅲ期（均P〈0.05）。结论 cPLA2、mPGES-1的高表达可能在肺癌的发生发展中起着重要作用,其可能为肺癌的早期诊断和为开发肺癌的靶向治疗提供一定的临床依据。