α-突触核蛋白激活NLRP3炎性小体介导神经细胞焦亡的发生

目的:研究α-突触核蛋白（α-synuclein）对于神经细胞焦亡发生的影响和机制。方法:以小鼠海马神经元细胞HT22细胞株为对象,体外培养后用α-synuclein干预细胞,以CCK-8法检测细胞活力,确定IC50值。设置对照组（Con组）后,采用TUNEL染色法检测细胞焦亡水平,免疫荧光法观察Gasdermin-D-N（GSDMD-N）的表达,Western blot法检测细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）、细胞凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、Gasdermin-D（GSDMD）、GSDMD-N、Caspase-1的表达水平,酶联免疫吸附法检测培养基中IL-18、IL-1β的表达水平。采用Caspase-1抑制剂预处理HT22后,同样使用IC50值的α-synuclein干预细胞,同时设置α-synuclein组（单纯α-synuclein干预）和α-synuclein+ML132组,检测细胞焦亡的水平。结果:α-synuclein的IC50值为50 nmol/L。α-synuclein干预后细胞焦亡数目显著增高,TUNEL染色显示阳性细胞数目多于Con组,免疫荧光染色结果显示细胞中GSDMD-N的表达水平上调,细胞中NLRP3、ASC、GSDMD-N、Caspase-1的表达水平显著高于Con组,而GSDMD水平下调,同时细胞培养基中IL-18、IL-1β的水平上调。Caspase-1抑制剂处理后,50 nmol/L的α-synuclein干预后,细胞焦亡水平显著低于α-synuclein组,同时免疫荧光染色结果显示GSDMD-N的水平下调,细胞中NLRP3、ASC、GSDMD-N、Caspase-1的表达水平显著低于α-synuclein组,而GSDMD水平上调,培养基中IL-18和IL-1β的水平下调。结论:α-synuclein可以通过激活NLRP3炎性小体活化继发神经细胞焦亡的发生,在帕金森病的发生发展中具有一定的作用。     

细胞焦亡介导慢性间歇缺氧大鼠肾脏损伤及依达拉奉的干预作用

目的：探究依达拉奉对慢性间歇缺氧导致大鼠肾脏损伤的保护作用及其对Caspase-1介导的细胞焦亡信号通路的影响。方法：24只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常对照（NC）组、间歇缺氧（IH）组、间歇缺氧+生理盐水（IH+NS）组、间歇缺氧+依达拉奉（IH+EDA）组,每组6只。将4组大鼠放置在密闭式饲养舱内造模,NC组舱内氧气浓度维持在21%左右,IH组、IH+NS组、IH+EDA组定时输入纯氧气、纯氮气、压缩空气,使舱内形成缺氧-复氧循环（60 s低氧期+60 s复氧期）,低氧期舱内氧浓度降至6%～7%,每日造模8 h（10∶00-18∶00）,同时IH+EDA组大鼠每天造模前按照5 mg/kg剂量标准予以腹腔注射依达拉奉,IH+NS组大鼠按照同等剂量标准腹腔注射生理盐水。造模8周后采集大鼠血液标本及肾脏组织标本,测定各组大鼠血肌酐（Crea）、尿素（Urea）水平;HE、Masson染色后光镜下观察肾脏病理形态变化、纤维化程度;化学法测定丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活力;免疫组织化学染色法测定肾组织NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达水平;Western blot法测定肾组织Caspase-1、IL-1β蛋白表达水平;RT-PCR法测定消皮素D（gasdermin D, GSDMD）、IL-18 mRNA扩增水平。结果：间歇缺氧暴露后,大鼠血清Crea、Urea明显升高（P<0.01）,肾小管发生病理损害、肾单位球囊间隙出现胶原纤维沉积,MDA含量增加、SOD活力降低（P<0.01）,Caspase-1、NLRP3、IL-1β蛋白表达增加（P<0.01或P<0.05）、GSDMD mRNA、IL-18 mRNA扩增增加（P<0.01）;而经过依达拉奉干预后,上述指标呈现出与间歇低氧暴露后相反的变化趋势,肾脏病理损害减轻（P<0.01或P<0.05）。 结论：慢性间歇缺氧可能通过氧化应激活化Caspase-1参与的细胞焦亡信号通路介导肾脏损伤过程,而依达拉奉可能通过清除氧自由基、下调机体氧化应激水平,抑制焦亡通路的活化,起到保护肾脏的作用。     

细胞焦亡在肠缺血再灌注损伤中作用的研究进展

细胞焦亡是一种可导致炎症反应的程序性细胞死亡,其发生依赖于炎症小体、炎性半胱天冬酶（caspase）等蛋白相继激活进而裂解消皮素D（gasdermin D, GSDMD）蛋白使其N端在细胞膜多聚化并产生焦亡小孔。细胞焦亡的发生有炎症小体激活caspase-1的经典途径和胞质LPS激活caspase-4/5/11的非经典途径;作为介导机体炎症反应的重要机制,细胞焦亡在机体应对伤害性刺激的反应中具有不可替代的作用,其与神经系统疾病、心血管系统疾病和肿瘤等多种疾病密切相关。最近研究发现,细胞焦亡在肠缺血再灌注损伤（intestinal ischemia-reperfusion injury, II/RI）的发生中也具有关键作用,本文就近年来细胞焦亡的分子特征、机制与II/RI的关系进行综述,旨在为II/RI的防治提供理论依据。     

自噬在米诺环素保护PC12细胞氧糖剥夺-复糖复氧中的作用

目的: 探讨自噬在米诺环素保护PC12细胞氧糖剥夺-复糖复氧中的作用。方法: 构建PC12细胞氧糖剥夺-复糖复氧模型,采用米诺环素(MC,1、10、100 μmol/L)或3-甲基腺嘌呤(3-MA,5 mmol/L)进行干预,MTT检测细胞活力,单丹磺酰戊二胺(MDC)染色观察自噬泡,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白轻链3(LC3Ⅱ)、泛素结合蛋白P62/SQSTM l的表达。结果: 氧糖剥夺处理后,1 μmol/L 和 10 μmol/L的MC能显著提高PC12细胞的存活率,而 100 μmol/L 则会加重细胞的损伤。蛋白LC3Ⅱ和Beclin1的表达与MC的浓度呈正相关性,自噬抑制剂3-MA能够降低LC3Ⅱ和Beclin1,增加P62/SQSTM l的表达逆转MC的保护作用。结论: 低剂量(1、10 μmol/L)MC能够通过增加LC3Ⅱ和Beclin1的表达,诱导PC12细胞产生自噬从而保护氧糖剥夺-复糖复氧处理后的PC12细胞。     

米诺环素联合vitapex糊剂治疗持续性根尖周炎的临床研究

目的:观察盐酸米诺环素联合vitapex糊剂治疗持续性根尖周炎的临床疗效和安全性。方法: 102例持续性根尖周炎患者按随机数字表法分为对照组51例和试验组51例,对照组采用碘仿氢氧化钙糊剂治疗,试验组采用vitapex糊剂一次根管和盐酸米诺环素软膏治疗,于治疗后2周和3个月,观察患者的临床疗效和不良反应,视觉模拟评分法(VAS)评价疼痛程度,ELISA检测外周血炎症因子水平。结果:2周试验组患者总有效率为86.27%,明显高于对照组的64.71%（ χ2=6.411, P=0.011）;3个月试验组患者总有效率为94.12%,明显高于对照组的70.59%（χ2=9.714, P=0.002）。治疗后,两组患者的VAS均降低,3个月VAS明显低于2周,且试验组VAS明显低于对照组,差异有统计学意义（P<0.01）。治疗后两组患者TNF-α、IL-2和IL-8水平均降低,3个月明显低于2周,且试验组明显低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。两组患者均未见明显不良反应和不适症状。结论:盐酸米诺环素联合Vitapex糊剂可减轻患者的疼痛程度,降低炎症反应,临床疗效确切,且安全性较好,值得推广应用。     

自噬在米诺环素保护大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用研究

目的:探讨自噬在米诺环素保护脑缺血再灌注损伤中的作用。方法:制备大鼠脑中动脉栓塞(MCAO)模型后,注射米诺环素或3-MA进行干预,对大鼠神经功能进行评分;采用TTC法测定脑梗死体积;透射电镜法观察大脑皮层细胞的超微结构及其自噬小体数目的变化;Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3Ⅱ、p62的表达。结果:22.5 mg/kg和45 mg/kg米诺环素组能够显著降低大鼠神经功能评分,减少脑梗死体积,提高LC3Ⅱ和Beclin1的表达,增加p62的降解;高剂量米诺环素（90 mg/kg）组能够进一步提高LC3Ⅱ和Beclin1的表达,然而其大鼠神经功能评分和脑梗死体积却显著增加;自噬小体数也显著增多;当同时给予自噬抑制剂3-MA后,能显著逆转米诺环素（45 mg/kg）的神经保护作用。结论:低剂量米诺环素能够通过增加LC3Ⅱ和Beclin1的表达、促进p62的降解,诱导自噬从而减轻大鼠脑缺血再灌注损伤;而高剂量米诺环素可能是因为其过度激活自噬导致大鼠脑缺血再灌注损伤加重。     

疏肝健脾方调控TLR4/MyD88/NLRP3信号轴抑制肝纤维化小鼠细胞焦亡的机制研究

目的：基于TLR4/MyD88/NLRP3信号轴探究疏肝健脾方对肝纤维化小鼠的治疗作用及机制。方法：采用四氯化碳（CCl4）与橄榄油混合液背部皮下注射的方法,复制化学性肝纤维化小鼠模型。造模首日,灌胃给予疏肝健脾方,每天1次,连续12周;HE、Masson和天狼猩红染色观察小鼠肝组织病理学损伤程度,透射电镜观察肝组织超微结构的变化及焦亡小体情况;RT-qPCR、Western blot和免疫组织化学染色检测肝组织中α-SMA、Collagen Ⅰ、Caspase-1、IL-1β、IL-18以及TLR4/MyD88/NLRP3信号轴表达的变化情况。结果：病理分析显示模型组小鼠肝脏肝小叶结构模糊,肝细胞索排列紊乱,胶原沉积增加,焦亡小体数量明显增加,肝组织中α-SMA、Collagen Ⅰ、Caspase-1、IL-1β、IL-18以及TLR4、MyD88和NLRP3的mRNA和蛋白表达水平相较于正常组肝脏均显著升高。与模型组相比,疏肝健脾方给药后可改善肝脏病理组织学损伤程度,抑制细胞焦亡,显著下调α-SMA、Collagen Ⅰ、Caspase-1、IL-1β、IL-18以及TLR4、MyD88和NLRP3 mRNA与蛋白表达水平。 结论：疏肝健脾方抗肝纤维化作用可能与调控TLR4/MyD88/NLRP3信号轴,减少细胞焦亡,抑制肝星状细胞活化有关。     

微透析-高效液相色谱法测定米诺环素大鼠血液和脑内的药动学

目的: 研究米诺环素在大鼠血液和脑内的药动学。方法: 采用微透析结合高效液相色谱技术,测定米诺环素大鼠血浆蛋白结合率;大鼠尾静脉注射米诺环素,测定给药后 10 h 内不同时间点大鼠血液、海马CA1区中游离药物的浓度。结果: 米诺环素大鼠血浆蛋白结合率为 82.08%,给药后迅速进入脑组织,在给药后 3.83 h 左右浓度达到峰值,其后缓慢下降,脑组织的游离药物-时间曲线下面积(AUC_{0-10 h})可达血液的 62.42%。结论: 微透析结合高效液相色谱技术可以测定米诺环素的大鼠血浆蛋白结合率,并实现大鼠血液和脑组织中游离米诺环素浓度的动态监测。结果表明米诺环素易于透过血脑屏障,且能长时间维持较高浓度,从而发挥其神经保护作用。     

染料木素调控JAK2/STAT3信号通路改善骨性关节炎大鼠软骨代谢的作用研究

目的:在大鼠骨性关节炎（OA）模型中观察染料木素通过酪氨酸蛋白激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路对骨性关节炎软骨代谢的作用。方法:SD大鼠随机分为3组,相应处理6周后取材,采用组织学染色的方法观察软骨标本的组织学形态、ELISA检测大鼠关节液中TNF-α表达水平、Western blot检测关节软骨细胞中p-JAK2、p-STAT3、MMP-13、Bax、Bcl-2相关蛋白的表达。结果:染料木素能有效增加OA关节软骨的胶原及蛋白多糖含量,使软骨组织结构接近正常软骨。与OA组相比,染料木素+OA组的TNF-α表达显著下调（P<0.01）,与正常组相近（P>0.05）。与OA组相比,染料木素+OA组的p-JAK2、p-STAT3及Bcl-2蛋白表达水平明显上升、MMP-13、Bax蛋白表达水平明显下降（均P<0.05）。结论:JAK2/STAT3信号通路与骨性关节炎软骨退变的病理过程密切相关,染料木素可激活JAK2/STAT3信号通路,抑制骨性关节炎炎症反应,抑制软骨细胞的凋亡,明显缓解关节软骨的退变,降低OA进展水平。     

鸢尾素通过NF-κB和JNK信号通路减轻屋尘螨诱导的气道上皮细胞炎症及凋亡的实验研究

目的：探索鸢尾素（irisin）对屋尘螨（HDM）诱导的人支气管上皮细胞（16HBE）的炎症和细胞凋亡的影响。方法：用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基培养人支气管上皮细胞（16HBE）,待细胞长至85%时血清饥饿处理12 h,随后用不同浓度的HDM（0、400、800、1 200 U/mL）刺激细胞24 h。用活性氧（reactive oxygen species, ROS）试剂盒检测各组细胞ROS水平,qPCR法检测各组细胞白介素-6（IL-6）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达水平。用20 nmol/L irisin预处理16HBE细胞2 h后接着用800 U/mL HDM处理24 h。活性氧试剂盒检测irisin对HDM诱导的细胞ROS产生的影响;qPCR法检测irisin对HDM诱导的炎症因子TNF-α及IL-6表达的影响;Western blot检测细胞内P65 NF-κB及JNK MAPK蛋白磷酸化水平,同时检测细胞内促凋亡蛋白cleaved-caspase3、BAX及抗凋亡蛋白BCL-XL的水平。结果：与对照组相比,不同浓度HDM（400、800、1 200 U/mL）刺激16HBE细胞24 h后,细胞内ROS水平升高（P<0.05）,TNF-α及IL-6表达水平也升高（P<0.05）。与单用HDM处理组相比,irisin预处理的16HBE细胞内ROS水平下降（P<0.05）,同时细胞内炎症因子TNF-α及IL-6表达减少（P<0.05）;irisin预处理组抗凋亡蛋白BCL-XL表达增加（P<0.05）,同时促凋亡蛋白cleaved-caspase3、BAX的表达减少（P<0.05）;与对照组相比,HDM干预后细胞P65 NF-κB及JNK蛋白磷酸化水平增加（P<0.05）,而irisin下调了P65 NF-κB及JNK蛋白磷酸化水平（P<0.05）。 结论：鸢尾素可有效改善HDM诱导的16HBE细胞的炎症和细胞凋亡,该保护作用可能与其抑制NF-κB和JNK MAPK信号通路有关,鸢尾素可能是治疗肺部炎症的潜在药物。     

氧化三甲胺与炎症性疾病

体内高水平的肠道菌群代谢产物氧化三甲胺(trimethylamine N-oxide, TMAO)能够促进炎症性疾病的发生发展。本文就TMAO与糖尿病、动脉粥样硬化和心力衰竭等炎症性疾病的关系以及TMAO引起炎症性疾病的潜在分子机制予以综述。     

芝麻素对阿尔茨海默病大鼠学习记忆及海马谷氨酸表达的影响

目的: 研究芝麻素（sesamin,Ses）对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)大鼠学习记忆及海马谷氨酸(Glu)表达的影响。方法: 选用正常SD大鼠40只,首先建立空白对照组（NS 5.0 mL·kg^-1·d^-1）10只,其余灌胃三氯化铝（AlCl3,15 mg·kg^-1·d^-1)联合腹腔注射D-半乳糖（D-gal,180 mg·kg^-1·d^-1）造模20周。于造模第13周将大鼠随机分为AD模型组（NS 5.0 mL·kg^-1·d^-1）,Ses低剂量组（80 mg·kg^-1·d^-1）,Ses高剂量组（160 mg·kg^-1·d^-1）,每组各10只,继续给药8周后,Morris水迷宫法检测其学习记忆能力;免疫组化法检测大鼠海马Glu阳性细胞的表达;Western Blot法检测大鼠海马Glu蛋白表达。结果: Ses用药组可以明显缩短AD大鼠逃避潜伏期,增加穿越平台次数,改善其学习记忆能力,同时可以下调Glu阳性细胞和蛋白表达。结论: Ses可能通过拮抗Glu受体,有效减少Glu水平,降低了神经兴奋性毒性,从而改善AD大鼠的学习记忆能力。     

自噬与炎症性肠病关系的研究进展

自噬是由自噬相关基因（autophagy-related genes, ATGs）调控细胞,使细胞内老化、损伤的细胞物质被送到溶酶体内降解和再循环利用,从而维持细胞稳态。炎症性肠病（inflammatory bowel disease, IBD）是一种自身免疫性疾病,而自噬选择性地以细胞内病原体为目标进行破坏的能力被认为是先天免疫反应的一个关键方面。遗传研究表明,几种自噬相关基因在IBD发病机制中具有临床相关性。本文将阐述自噬在IBD中的作用及其临床相关的最新进展,以及以自噬为靶点的IBD治疗策略。     

舒康汤治疗慢性盆腔炎的实验研究

目的: 观察舒康汤对慢性盆腔炎的影响,并初探其可能作用机制。方法: 采用机械损伤联合三种菌对其混合感染的方法来制备大鼠的盆腔炎模型。将实验大鼠随机分为5组:正常对照组、模型组、舒康汤低剂量组(1 mL/kg)、舒康汤高剂量组(l mL/100 g)、妇科千金片组(1.5 g/kg)。造模后3周连续给药20 d,在最后一次给药的24 h后,对子宫的肿胀程度进行观察并检测每组大鼠的血浆中SOD、MDA以及IL-1β、IL-6和 TNF-α的含量。结果: 舒康汤可以明显地使造模大鼠的子宫肿胀程度减轻,并且,可以使慢性盆腔炎大鼠模型血浆中的MDA、IL-1β、IL-6和 TNF-α含量降低,SOD含量提高。结论: 舒康汤对慢性盆腔炎的治疗作用可能与对氧自由基损伤以及炎症细胞因子的抑制有关。     

炎症性肠病中的自噬异常与中药干预研究进展

自噬（autophagy）是由溶酶体介导的细胞程序性降解途径,对维持细胞的稳态,清除胞内毒性物质和代谢能量的平衡具有重要的意义。研究表明自噬异常是炎症性肠病（inflammatory bowel disease,IBD）发生、发展的重要机制,与炎症反应的失调、病原菌侵袭和肠道黏膜的修复障碍密切相关。深入认识自噬调节在IBD防治中的价值对于优化现有治疗策略具有重要意义。本文基于中药在IBD防治中的应用现状,从自噬调节的角度分析了相关中药及其活性成分的作用机制和应用前景,并对相关研究存在的问题和发展趋势进行了初步探讨。     

脑益康对阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆的影响

目的: 观察脑益康对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD) 模型小鼠学习记忆的影响, 并探讨其改善学习记忆的机制。方法: 采用D-半乳糖(DGal)和亚硝酸钠(NaNO2) 腹腔注射建立小鼠AD 模型, 通过迷宫刺激器和水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力;生化方法检测小鼠脑组织内超氧化物歧化酶(SOD) 活性和丙二醛(MDA) 含量;透射电镜观察小鼠海马神经细胞的超微结构。结果: 模型对照组小鼠学习记忆能力下降, SOD 活性降低, MDA 含量升高;而与模型对照组比较, 脑益康小、中、大剂量组(2.4、7.2、24 g·kg^-1·d^-1) 均可显著改善模型小鼠的学习记忆能力, 提高脑内SOD 活性, 降低脑内MDA含量(P <0.01或P <0.05), 阻抑海马神经细胞的退行性变化。结论: 脑益康可改善D-半乳糖和亚硝酸钠所致AD 模型小鼠的学习记忆能力。     

PCSK9抑制剂对冠心病患者血脂及炎症因子的影响

目的：观察PCSK9抑制剂对冠心病患者血脂水平及常见炎症因子的影响。方法：回顾性分析2020年4月至2021年6月期间入住上海市东方医院心内科的201例冠心病患者的临床资料。根据患者用药情况分为PCSK9抑制剂治疗组（他汀+PCSK9抑制剂,n=101）和对照组（单纯他汀治疗组,n=100）,治疗1个月后复查血脂、血常规、C反应蛋白（CRP）及纤维蛋白原（FIB）等指标,比较用药前后血脂及炎症因子的变化情况。结果：治疗前,两组患者血脂、血常规、CRP及FIB等指标无统计学差异（P>0.05）,治疗1个月后PCSK9抑制剂组同治疗前相比,总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、小而密低密度脂蛋白（sdLDL）及脂蛋白(a)（Lp(a)）水平均显著降低（P<0.05）;白细胞计数（WBC）、CRP、中性粒细胞计数（N）、FIB水平均显著降低（P<0.05）。PCSK9抑制剂组同对照组相比,TC、高密度脂蛋白（HDL）、LDL-C、CRP、FIB水平有明显变化（P<0.05）,结果有统计学意义。结论：PCSK9抑制剂不但可以降低LDL-C水平,对改善Lp(a)水平也有效果。PCSK9抑制剂可以降低CRP、FIB水平,提示可以部分改善冠心病患者外周血的炎症水平。     

胆汁酸代谢调节炎症性肠病的作用机制及药物研发

炎症性肠病（IBD）是一种慢性复发性肠道炎症性疾病,发病率及非致死性疾病负担在全世界都有累加的趋势,其病因复杂,发病机制目前还未完全明确。胆汁酸（BAs）是胆汁的主要成份,其可通过与胆汁酸受体结合、调节肠道菌群等参与IBD的发生发展。本文着重讨论BAs代谢在IBD发病中的作用机制,以及基于BAs及其相关靶点的药物研发进展,为今后IBD的预防、治疗和预后研究奠定基础。     

microRNA在亨廷顿病中的研究进展

亨廷顿病(Huntington's disease, HD)是神经退行性疾病(neurodegenerative disorders)中一种单基因遗传病,由亨廷顿基因(the huntingtin gene, HTT)第一个外显子中的CAG三核苷酸序列重复扩增引起,尚无法治愈。HTT编码的蛋白产物被称为亨廷顿蛋白(Huntingtin protein, Htt)。突变亨廷顿蛋白(mutated huntingtin protein, mHtt)容易形成聚集体,具有毒性,导致一系列细胞学异常和神经元功能障碍。microRNA(miRNA)在基因转录后水平调控中起重要作用,其表达的改变与HD病理过程有关,成为治疗HD的潜在生物标志物。近年来,对一些特定miRNA在HD中调控机制及靶基因预测方面的研究可为HD提供潜在的治疗方法。本文就miRNA在HD中的相关研究进展进行综述。