99Tcm标记的新型糖基化生长抑素体内外生物学评价

以天然生长抑素(Somatostatin，SMS)、葡聚糖-10(Dextran10，Dx10)及双功能螯合剂硫代乙酰基-巯基乙酰-二甘氨酰-赖氨酸（MAG2Lys）为原料，合成新型生长抑素配体化合物SMS-Dx10-MAG2Lys并进行99mTc标记；以125I-奥曲肽（125I-Tyr3-Octreotide）为放射配基，进行受体竞争结合实验，测定SMS-Dx10-MAG2Lys的IC50值；并用99mTc-MAG2Lys-Dx10-SMS进行正常SD大鼠体内分布、血浆清除以及肿瘤模型动物显像实验。结果表明：配体化合物SMS-Dx10-MAG2Lys保持了对生长抑素2型受体高亲和力；其IC50值与SMS相近； 99mTc-MAG2Lys-Dx10-SMS在正常大鼠体内血浆半衰期为2.4 h，主要浓聚肝、脾脏并经肾排泄，与葡聚糖的代谢途径基本一致，荷胰腺癌裸鼠显像表明，注射后4 h，肿瘤组织具有明显的放射性摄取，99mTc-MAG2L-Dx10-SMS有望成为一种新型生长抑素受体阳性肿瘤显像剂。     

新型糖基化生长抑素的合成及SUP

通过一系列氨羧缩合反应合成了双功能螯合剂硫代乙酰基-巯基乙酰-二甘氨酰-赖氨酸(S-Acetyl-MAG2Lys),并以生长抑素(somatostatin,SMS)、葡聚糖-10(Dextran10,Dx10)及S-Acetyl-MAG2Lys为原料,合成了糖基化生长抑素配体化合物(SMS-Dx10-MAG2Lys);利用酒石酸钠转换配合进行了SMS-Dx10-MAG2Lys的99Tcm标记,重点探讨了99Tcm标记条件及标记物的体外稳定性。结果表明,合成的双功能螯合剂S-Acetyl-MAG2Lys和配体化合物SMS-Dx10-MAG2Lys可成功用于99Tcm的放射标记,在最佳标记条件:0.3 g/L SnCl2,5 g/L SMS-Dx10-MAG2Lys,标记介质pH=9.5,室温下反应30 min,99Tcm-MAG2Lys-Dx10-SMS标记率约为50%,经分离纯化后,其放射化学纯度大于99%,标记物体外稳定,为进一步研究99Tcm-MAG2Lys-Dx10-SMS体内生物学特性提供了依据。     

糖基化生长抑素90Y标记及体内外生物学评价

以天然生长抑素(Somatostatin,SMS)、葡聚糖-70(Dextran70,Dx70)及双功能螯合剂2-甲基-6-对氨基苯基二乙三胺五乙酸(1B4M-DTPA)为原料,合成糖基化生长抑素SMS-Dx70-DTPA并进行90Y标记;以125I-奥曲肽(125I-Tyr3-Octreotide)为放射配基,进行受体竞争结合实验,测定SMS-Dx70-DTPA的IC50值;并用90Y-DTPA-Dx70-SMS进行正常大鼠体内分布和血浆清除实验.结果表明:配体化合物SMS-Dx70-DTPA保持了对生长抑素2型受体的高亲和力,其IC50值与SMS相近;90Y-DTPA-Dx70-SMS在正常大鼠体内血浆半衰期为6.39h,主要浓聚于肝、脾并经肾排泄,与葡聚糖的代谢途径基本一致,肾上腺、胰腺具有较高的放射性摄取,且24h内基本保持不变,90Y-DTPA-Dx70-SMS对生长抑素受体阳性组织具有靶向性,有望成为一种新型生长抑素受体阳性肿瘤治疗剂.     

生长抑素-葡聚糖的99Tcm标记及体外结合分析

采用还原氨化方法，将天然生长抑素（SMS）与葡聚糖(Dx20)偶联，并以125I－奥曲肽（125I-Tyr3-Octreotide)为放射配基，进行受体竞争结合实验，测定了SMS-Dx50的IC50；以SnCl2为还原剂对SMS-Dx50进行99Tcm标记，并进行99Tcm- SMS-Dx50受体结合分析，考察其对生长抑素受体的亲合能力。结果表明：SMS-Dx50保持了对SMS 2型受体的高亲和力；其IC50与奥曲肽的IC50（0.79 nmol/L）相近,为5.95 nmol/L；99Tcm- SMS-Dx50标记率>85％, 经PD-10柱分离纯化，其放化纯度>98%；99Tcm- SMS-Dx50对生长抑素2型受体特异性结合为25%～40％，保持了较高的亲和力；SMS-Dx50适合于99Tcm标记，可用于生长抑素受体阳性肿瘤诊断的进一步研究     

糖基化生长抑素99Tcm标记及生物学评价

以天然生长抑素(Somatostatin，SMS)、葡聚糖-10(Dextran¹⁰，Dx¹⁰)及巯基乙胺（Cysteamine）为原料，合成糖基化生长抑素配体化合物SMS-Dx¹⁰-Cysteamine；以¹²⁵I-奥曲肽（¹²⁵I-Tyr₃-Octreotide）为放射性配基，进行受体竞争结合实验，测定SMS-Dx¹⁰-Cysteamine的IC₅₀值；利用葡庚糖转换络合进行SMS-Dx¹⁰-Cysteamine 的⁹⁹Tc^m标记，重点探讨⁹⁹Tc^m标记条件及标记物体外稳定性；并用⁹⁹Tc^m-Cysteamine-Dx¹⁰-SMS进行正常SD大鼠体内分布、血浆清除及肿瘤模型动物显像实验。结果表明：配体化合物SMS-Dx¹⁰-Cysteamine保持了对生长抑素2型受体高亲和力，其IC₅₀值与SMS相近；在最佳标记条件：0.3 g/L SnCl₂，5 g/L SMS-Dx¹⁰-Cysteamine，标记介质pH=6.0，室温下反应30 min，⁹⁹Tc^m-Cysteamine-Dx¹⁰-SMS标记率约为85%，经分离纯化后，其放射化学纯度大于99%，标记物体外稳定；⁹⁹Tc^m-Cysteamine-Dx¹⁰-SMS在正常大鼠体内血浆半衰期为2.38 h，主要浓聚于肝、脾脏并经肾排泄；荷胰腺癌裸鼠显像表明，注射后6 h，肿瘤组织具有明显的放射性摄取，⁹⁹Tc^m-Cysteamine-Dx¹⁰-SMS有望成为一种生长抑素受体阳性肿瘤显像剂。     

糖基化生长抑素的125I标记及生物分布

以天然生长抑素、葡聚糖和酪胺为原料，合成了糖基化生长抑素（生长抑素-葡聚糖-酪胺）；以^125I-奥曲肽（^125I-Tyr^3-Octreotide）为放射配基，进行受体竞争结合实验，测定了糖基化生长抑素的IC50；并观察了^125I标记的糖基化生长抑素在正常SD大鼠体内的分布和血液清除状况。结果表明：糖基化的生长抑素保持了对生长抑素2型受体的高亲和力；其IC50与Octreotide相近，^125I标记的糖基化生长抑素血液半减期为6．7h，主要浓聚肝、脾脏并经肾排泄，肾上腺具有较高的放射性摄取，且24h内基本保持不变^125I标记的糖基化生长抑素对生长抑素受体阳性组织具有靶向性。     

MAGSUB>3SUP>-/SUP>/SUB>Fol

合成了双功能螯合剂S-乙酰基-巯基乙酸-三甘氨酸-N-羟基丁二酰亚胺酯(S-Acetyl-MAG3-NHS),并以叶酸(folic acid,FA)、乙二胺(ethylenediamine,EDA)和S-Acetyl-MAG3-NHS为原料,合成叶酸配体化合物MAG3-FA;利用酒石酸钠转换配合进行MAG3-FA的99Tcm标记,重点探讨99Tcm标记条件及标记物体外稳定性.结果表明,合成的双功能螯合剂S-Acetyl-MAG3及配体化合物MAG3-FA可成功用于99Tcm的放射性标记,在最佳标记条件下,其标记效率大于70%,经分离纯化后, 99Tcm-MAG3-FA 的放射化学纯度大于95%,标记物体外稳定,为进一步研究99Tcm-MAG3-FA的体内外生物学特性奠定了基础.     

~(99m)Tc标记生长抑素类似物KE108的制备及生物学评价

为了探讨生长抑素类似物~(99m)Tc-HYNIC-KE108用于生长抑素受体阳性肿瘤显像的可行性,本研究设计合成了新型的生长抑素类似物HYNIC-KE108,并进行~(99m)Tc标记,优化标记条件,测定标记物的脂水分配系数和体外稳定性,研究其在正常小鼠及荷瘤鼠体内的生物分布。在优化条件下,~(99m)TcHYNIC-KE108的标记率90%,经Waters Oasis HLB小柱纯化后,放化纯度98%,标记物的脂水分配系数logP为0.43±0.02(n=3),体外稳定性良好。标记物在正常小鼠体内血液清除快,主要通过肾脏代谢,在胃、肺和肝脏中放射性摄取相对较高。荷瘤鼠体内分布结果表明,标记物注入体内4h时在肿瘤中的放射性摄取为(1.14±0.91)%ID·g-1,肿瘤与血、肌肉、心脏的放射性摄取比(T/NT)为1.78、8.14、3.35。本工作为进一步研究~(99m)Tc标记的KE108作为生长抑素受体阳性肿瘤显像剂提供了实验依据。     

生长抑素类似物EDDA/HYNIC-Lys0-TOCA的99Tcm标记及动物实验

本文设计合成了新的生长抑素类似物99Tcm-EDDA/HYNIC-Lys0-TOCA,并进行了正常小鼠及荷瘤裸鼠体内分布和显像,以探讨99Tcm-EDDA/HYNIC-Lys0-TOCA作为生长抑素受体阳性肿瘤显像药物的可能性。合成了Nε-HYNIC-Lys0-TOCA及其中间产物,并经核磁共振谱和质谱等分析确证。在优化的标记条件下,99Tcm-EDDA/HYNIC-Lys0-TOCA的标记率为96%左右,经Sep-Pak柱纯化后,放化纯达99%以上。体外稳定性实验及小鼠尿样分析表明标记物具有很好的体内外稳定性。99Tcm-EDDA/HYNIC-Lys0-TOCA在正常小鼠体内的清除非常迅速(血液半衰期为20min左右),主要通过肾脏途径代谢,同时在胃、肺和肾上腺也有相对较高的放射性摄取。荷瘤裸鼠体内分布实验显示该药物在肿瘤组织有较高的放射性摄取,给药1h后肿瘤与血、肌肉等组织有较高的T/NT比值。γ显像表明,在给药后1h至2h,肿瘤组织有明显的放射性摄取,显像清晰。初步研究结果显示,该药物有望发展成为生长抑素受体阳性肿瘤的显像剂。     

~(99m)Tc-帕米膦酸盐的制备及骨分布

为观察99mTc标记的帕米膦酸盐(Pamidronate,PAM)的骨分布特点,以氯化亚锡为还原剂,优化99mTc直接标记PAM的条件,研究SnCl2(Ⅱ)含量、配体用量、pH及反应时间对标记率的影响,确定了优化的标记条件;考察99mTc-PAM的体外稳定性;评价99mTc-PAM在正常鼠体内的生物分布,尤其是骨摄取情况,比较99mTc-PAM与99mTc-MDP在正常小鼠体内的骨摄取。实验结果表明,PAM的99mTc标记方法简单,标记率大于95%,标记物体外稳定性好。正常鼠体内分布实验发现,99mTc-PAM骨摄取很高,且滞留时间长,在血液中清除快,在体内主要通过肾代谢;正常大鼠SPECT显像骨组织清晰可见,具有很好骨显像效果。与99mTc-MDP在正常小鼠体内的生物分布结果比较表明,99mTc-PAM的骨放射性摄取及骨与血放射性摄取比在不同时相均优于99mTc-MDP。研究表明,99mTc-PAM具有理想的骨显像性能,可用于骨显像、骨损伤探测以及肿瘤骨转移检测等应用研究。     

99Tcm-MAG2-Ade肿瘤显像剂的合成及其生物活性研究

为了制备肿瘤显像剂^99Tc^m标记肽,合成并表征了新的碱基修饰的小肽配体9-[N-(S-三苯甲基巯基乙酰)二甘氨酰氨基乙基]腺嘌呤(Tr—MAG2-Ade)。通过直接标记法得到了水溶性配合物^99Tc^m-MAGz—Ade,并对其体外稳定性进行了检测。在荷瘤小鼠体内的生物分布结果表明,^99Tc^m-MAGz—Ade在肿瘤中有较高的摄取,肿瘤与肌肉的摄取比为5．7,肿瘤与血液的摄取比为1．55。血液清除较快,有望用于非腹部肿瘤的显像。     

99Tcm-3PRGD2 SPECT显像用于胰腺癌荷瘤裸鼠动物实验及临床转化研究

本工作探讨了新型示踪剂⁹⁹Tc^m-HYNIC-3PEG₄-E［c(RGDfK)］₂（⁹⁹Tc^m-3PRGD₂）用于胰腺癌的诊断价值及临床转化可行性。用免疫组化实验测定PANC-1胰腺癌细胞以及肿瘤组织中的整合素α_vβ₃的表达。将PANC-1胰腺癌细胞种植于BALB/c裸鼠肩部，建立合格的动物模型。以联肼尼克酰胺(HYNIC)作为双功能连接剂，采用无亚锡一步法制备⁹⁹Tc^m-3PRGD₂。在0.5~6.0 h，每隔0.5 h行一次荷瘤鼠⁹⁹Tc^m-3PRGD₂全身平面显像，观察全身分布情况，于肿瘤及健侧勾画感兴趣区（ROI, region of interest），计算肿瘤与本底(T/NT)的比值。对6例胰腺肿瘤患者行99Tcm-3PRGD₂单光子发射的计算机断层显像（SPECT），评估对胰腺癌的检出率。结果表明：PANC-1胰腺癌细胞以及肿瘤组织中高表达整合素α_vβ₃。⁹⁹Tc^m-3PRGD2标记率大于99%。荷瘤鼠显像显示肿瘤对示踪剂摄取好，0.5 h时即可见肿瘤显影，1.5 h时T/NT达最大值，6.0 h时肿瘤仍可清晰显示。⁹⁹Tc^m-3PRGD₂ SPECT显像可检出6例患者的胰腺肿瘤原发灶和肝转移灶，检出率为100%。⁹⁹Tc^m-3PRGD₂是一种安全有效的示踪剂，特异性结合整合素α_vβ₃，⁹⁹Tc^m-3PRGD₂ SPECT对胰腺癌的临床诊断具有潜在的应用前景。