基于gyrB基因的克罗诺杆菌属菌株PCR快速检测方法的建立

43株克罗诺杆菌属菌株和5株肠杆菌属菌株的gyrB基因被克隆并测序,根据已测序的结果设计了一对特异性引物.经优化后的PCR反应体系只能扩增到43株克罗诺杆菌属菌株的目的片段(438 bp),而无法扩增出其他30株非克罗诺杆菌属菌株.通过系统生物学试验评价得出:该PCR方法的基因组DNA检测灵敏度是1.41 pg/PCR.将56 cfu阪崎克罗诺杆菌菌株ATCC 29544人工污染到3种不同的婴幼儿配方粉中,经人工增菌培养(37℃)6 h后即可扩增到目的片段.将该方法应用于25份实际样品的检测中,结果有3份样品扩增到目的片段.但是经传统的国家标准方法进行检测,只有2份样品检测到克罗诺杆菌属菌株.该方法的建立为快速准确鉴定食品中克罗诺杆菌属菌株提供了一种非常有用的技术手段.     

乳品中4种常见致病菌多重PCR检测方法的建立

建立同时快速检测乳品中检出率较高的沙门氏菌、单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌、克罗诺杆菌属(原阪崎肠杆菌)4种食源性致病菌的四重PCR方法。采用针对沙门氏菌omp C基因、单核细胞增生李斯特菌hly基因、金黄色葡萄球菌nuc基因、克罗诺杆菌属gyr B基因特异性引物,建立并优化多重PCR体系,检测特异性和灵敏度,并用建立的体系检测实际样品。该体系具有特异性,对混合模板中沙门氏菌模板的灵敏度达10-6 ng/μL,单核细胞增生李斯特菌、克罗诺杆菌属的灵敏度达10-3 ng/μL,金黄色葡萄球菌的灵敏度达10-2 ng/μL。可有效检出经过增菌后初始菌浓度为1 CFU/m L的4种菌。本多重PCR方法能够特异、高效、准确地检测沙门氏菌、单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌、克罗诺杆菌属4种食源性致病菌。     

细胞外信号调节激酶(ERK)在阪崎肠杆菌侵袭脑微血管内皮细胞中的作用

为了探讨细胞外信号调节激酶(ERK)在阪崎肠杆菌侵袭脑微血管内皮细胞过程中的作用,用ERK抑制剂(PD98059)预处理体外培养的小鼠脑微血管内皮细胞,再通过细菌侵袭实验观察细胞侵袭力的变化,进而通过Western-blot实验检测ERK的活化情况,最后利用免疫荧光方法观察肌动蛋白微丝的重排情况。结果显示:PD98059可以降低阪崎肠杆菌侵袭进入脑微血管内皮细胞的数量、阻碍阪崎肠杆菌侵袭脑微血管内皮细胞引起的ERK磷酸化、抑制阪崎肠杆菌侵袭所导致的脑微血管内皮细胞细胞骨架的重排。因此,阪崎肠杆菌通过ERK的活化影响脑微血管内皮细胞的微丝重排,进而侵袭进入脑微血管内皮细胞。     

电极生物膜脱氮工艺中反硝化菌相分析

对电极生物膜反硝化脱氮反应器中存活的反硝化菌进行了初步的分离及菌相分析研究,实验共分离出40株菌株,通过对菌株的形态观察及生理生化特征的研究表明,这些菌株分别属于假单胞菌属(Pseudomonas), 不动杆菌属(Acinetobacter), 肠杆菌科(Enterobacteriaceae)3个属,肠杆菌科、假单胞菌属为主要优势菌,占总鉴定菌数的82.5%.在异养环境中分离的24个菌株中,肠杆菌科为优势菌,具有反硝化能力的有18株,占75%;反硝化能力强的有8株,占33.3%.在自养环境中分离的16个菌株中,假单胞菌属为优势菌,其中具有反硝化能力的有12株,占75%;反硝化能力强的有8株,占50%.     

脱氮菌的筛选鉴定及性能研究

从自然环境中筛选到一株具有脱氮能力的菌株MHX-01,经鉴定为阪崎肠杆菌.研究表明:该菌株在不同的碳源、氮源、无机盐、生长因子的条件下都能够良好地生长,最佳培养基为葡萄糖10 g/L,蛋白胨10 g/L,磷酸氢二钾2 g/L,酵母膏1 g/L;该菌株的最适生长温度为37℃,最适生长p H值为8.0,其抗热性较差,但有一定的抗酸碱能力,尤其是抗碱性能力较强.对其脱氮性能的研究发现:该菌株具有很强的脱氮能力,在接种量为4%时,处理人工废水5 h后,亚硝酸盐氮的去除率为97.6%,达到平衡点;处理人工废水36 h后,氨氮的去除率高达98.3%,达到平衡点.且在高盐度废水中同样具有高效的脱氮能力,在盐度为20 g/L时效率最高.该菌具有优良的脱氮性能,脱氮能力明显高于其它微生物菌株.     

利用16SrDNA序列分析和Biolog快速鉴定方法鉴定产脂肪酶菌株

采用16S r DNA序列分析和Biolog快速鉴定两种方法对分离得到的7株产脂肪酶菌株进行了分类鉴定.16S rDNA序列分析结果表明,7株产脂肪酶菌株中TCCC 11087、TCCC 11167、TCCC 11170、TCCC 11180,TCCC 11181属于不动杆菌属,株TCCC 11092、TCCC 11168属于假单胞菌属.Biolog快速鉴定结果显示,TCCC 11087、TCCC 11167、TCCC 11170.TCCC 11180、TCCC 11181 属于溶血不动杆菌,TCCC 11092属于假单胞菌属,TCCC 11168属于荧光假单胞菌.说明两种鉴定方法得到的结果一致,但16S rDNA序列分析方法只能鉴定到属,而Bioiog快速鉴定方法能对多数菌株鉴定到种.     

一株异养硝化细菌的分离鉴定及硝化性能分析

鉴于目前大量异养硝化细菌的分离报道中一些硝化菌存在硝化效率低、亚硝态氮累积严重等问题,从武汉市某污水处理厂底泥中成功分离得到一株可高效去除氨氮的菌株W-3.根据16S rRNA基因序列分析,表明该菌株属于苍白杆菌属(Ochrobactrum sp.).对该菌株进行了氨氮去除特性及氮转化途径的研究,当NH4+-N的浓度为...     

石油降解菌株的筛选及鉴定

从抚顺石油二厂厂区石油污染土壤中筛选出3 株具有较强石油降解能力的菌株PD51 , PD53 , PD56。通过形态学观察和生理生化指标对这3 种微生物进行鉴定, 初步确定菌株PD51 和PD53 属于微杆菌属(Microbacterium), 而菌株PD56 属于节杆菌属(Arthrobater)。菌株在28 ℃培养72 h 后, 发现这3 株菌株(PD51,PD53, PD56)对石油烃的降解率分别为76. 63 %, 76. 47 %, 76. 17 %。而这3 株菌株的混合菌株对石油烃的降解率达到了84. 31%。结果表明, 混合菌株对石油烃的降解能力要优于单一菌株对石油烃的降解能力。实验中同时发现菌株PD56 还具有利用苯酚和菲等芳烃的能力。     

利用常规鉴定方法和Biolog快速鉴定方法鉴定产脂肪酶菌株

用常规鉴定和Biolog快速鉴定2种方法对分离得到的3株产脂肪酶菌株进行了分类鉴定。根据其菌落、菌体及生理生化特征,3株产脂肪酶菌株中CDCH110、CDCH111属于不动杆菌属,CDCH112属于假单胞菌属。Biolog快速鉴定结果显示:CDCH110为溶血不动杆菌;CDCH111为醋酸不动杆菌;CDCH112为产碱假单胞菌。通过对比分析,结果表明:2种方法得到的结果一致,但常规方法只能鉴定到属,Biolog快速鉴定可以鉴定到种;Biolog快速鉴定法具有快速、准确等优点。     

一株芽孢杆菌对河蟹蚤状一期幼体益生作用的初步研究

通过单株细菌感染河蟹蚤状幼体的方法获得一株对河蟹蚤状一期幼体有益生作用的菌株No.7,与对照组相比提高河蟹一期幼体的成活率13%,5d时与对照组相比变态率增加31%,该菌株有望成为河蟹幼体的益生菌株.对菌株No.7进行形态观察和16SrDNA序列分析,初步鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.).