烟草疫霉菌拮抗细菌的筛选鉴定及发酵条件优化

为了筛选对烟草疫霉菌具有拮抗作用的生防细菌菌株,本研究从烟草黑胫病病圃地采集健康烟株的根际土样,采用对峙培养法筛选得到8株对烟草黑胫病具有拮抗作用的细菌菌株,其中编号为LB-9的菌株对烟草疫霉菌的抑制作用最强且效果稳定,抑菌率为60.6%,且抑菌谱广,对其进行16S rRNA基因序列分析后将该菌株鉴定为多粘芽孢杆菌。采用单因素优化试验初步探究了多粘芽孢杆菌LB-9的最适发酵条件,明确了LB-9的最适发酵培养基、最适发酵温度、最适发酵时间和最适发酵初始pH值,对其生防制剂的开发应用具有重要意义。     

青霉菌QMYCS-2菌株的分离鉴定及其对烟草黑胫病的防治作用

为了寻找烟草黑胫病生物防治的有效途径,采用平板涂布法从健康烟株根际土壤中分离筛选出1株对烟草黑胫病菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)具有较强拮抗作用的青霉菌株(QMYCS-2),根据其形态学特征和ITS-r DNA序列分析,鉴定为马德里青霉菌(Penicillium madriti)。QMYCS-2菌株与黑胫病菌对峙培养抑菌结果表明,该菌株对烟草黑胫病菌的生长具有良好的抑制作用,抑制率达到71.76%。选取5种真菌培养液培养QMYCS-2菌株,获得不同的发酵滤液,测定其对烟草黑胫病菌的抑制作用,结果发现马铃薯葡萄糖液体培养基效果最好。比较QMYCS-2菌株发酵滤液与青霉素对黑胫病菌生长的抑制效果发现,二者抑菌效果差异很大,前者抑制率为64.89%~100.00%,后者最高为7.33%。温室测试QMYCS-2菌株发酵滤液对烟草黑胫病的防治效果(防效)达到73.25%,与常规药剂对照甲霜灵锰锌的防效(71.50%)相近。     

烟草内生细菌对烟草病害的拮抗和防治作用

利用烟草内生细菌进行了防治烟草黑胫病的试验,获得了对烟草黑胫病有较好防效的内生细菌菌株118、57、93等,其防效分别达69.23%、61.53%和65.38%。其中118菌株具有较广的抗菌谱,对几种主要的烟草病害的病原菌均有拮抗作用,对烟草疫霉菌有明显的拮抗作用,而且对烟草有促生效果,鲜重增产率为13.10%。     

放线菌F8对烟草黑胫病的拮抗作用及其产酶活性

从山东五莲于里黑胫病烟田健康烟株根际土壤分离到一株拮抗放线菌,编号为F8.为了科学评价该菌株在烟草黑胫病生防中的应用潜力,测定了其抑菌活性、产酶活性及控病效果,并通过形态学及16S rDNA序列分析研究其分类地位.结果表明,该菌株对于供试的烟草黑胫病菌具有较强的抑制作用,经无菌滤液处理后的菌丝生长畸形且停滞;该菌株具有几丁质酶、纤维素酶及蛋白酶活性.温室盆栽试验的防治效果显示接种后30 d,F8发酵液对烟草黑胫病的防效为70.3%;根据菌株形态特征、培养特性、生理生化特性及16S rDNA序列分析,鉴定该菌株为链霉菌属不产色链霉菌(Streptomyces achromogenes subsp. streptozoticus).     

烟草黑胫病木霉生防菌株的筛选

平板对峙培养结果表明,18个木霉菌株中TR13对烟草疫霉的拮抗作用最强。温室盆栽结果说明大多数木霉菌株对烟草黑胫病有一定的防效。其中TR18、TR14和TR17的相对防效较高,分别为72．6％、94．2％、97．6％。TR18效果不稳定,故选用TR14与TR17作为烟草黑胫病的有效生防菌株,并初步确定TR17以10^6cfu/mL浓度级、TR14以10^7cfu/mL浓度级为最佳使用参数。     

3株拮抗烟草尖孢镰刀菌的木霉菌筛选鉴定及促生防病效果评价

  目的  为筛选对烟草镰刀菌根腐病菌具有较好拮抗效果的菌株。  方法  从河南省主要烟叶产区健康烟株根际土壤中,分离纯化对尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）具有一定拮抗作用的真菌菌株,对筛选出的拮抗菌株进行形态学和分子生物学鉴定,并测定促生作用和防治效果。  结果  分离纯化得到的3株木霉菌分别为棘孢木霉（Trichoderma asperellum）Ta-0101、哈茨木霉（Trichoderma harzianum）Th-0201和毛簇木霉（Trichoderma velutinum）Tv-0207,具有较强的抑菌能力,对尖孢镰刀菌的抑菌率分别为91.24%、84.71%和82.48%。3株木霉菌对烟草种子根长和总长均有显著的促生效果,根长增长率分别为28.89%、25.92%和22.22%,根系活力也显著提高;对烟株最大叶面积和鲜重的促生作用明显,其中棘孢木霉Ta-0101促生效果最显著。3株木霉菌对尖孢镰刀菌的相对盆栽防效分别为78.95%、69.73%和69.73%,均高于70%甲基硫菌灵1000倍液处理的防效。  结论  3株拮抗木霉菌具有较好的抑菌效能和促生防病效果,应用前景良好。      

烟草黑胫病拮抗真菌的筛选及活性评价

为获得更多防治烟草黑胫病的拮抗真菌,从烟草黑胫病发病烟株根际土壤分离20株真菌,通过平板对峙法筛选,发现菌株ZP2-1、ZP2-3、ZP2-4、GZ3、GZ7对烟草黑胫病菌具有较好的抑制效果。形态学和分子生物学分析表明,ZP2-1为里氏木霉（Trichoderma reesei）、ZP2-3为拟康宁木霉（Trichoderma koningiopsis）、ZP2-4为黑曲霉（Aspergillus niger）、GZ3为烟曲霉（Aspergillus fumigatus）、GZ7为红棕肉座菌（Hypocre rufa）。ZP2-4具有较强分泌纤维素酶和蛋白酶的能力且固体发酵产孢能力显著（p<0.01）高于其余4株菌。ZP2-1、GZ3、ZP2-4固态发酵产物纤维素酶活性相当且显著（p<0.01）高于ZP2-3和GZ7。田间试验结果显示,ZP2-1、GZ3、ZP2-4对烟草黑胫病田间防治效果分别为59.50%、61.82%、85.00%。     

产几丁质酶菌拮抗烟草黑胫病菌研究

从烟草根际土中分离筛选到两株产几丁质酶能力较高、对烟草黑胫病菌有稳定拮抗作用的菌株ZY-9-1和ZY-19-2。将两菌株发酵液用于烟草黑胫病菌的拮抗试验和初步大田防治试验并研究其对烟叶品质的影响,结果表明:在培养基平板上,量菌株发酵液对烟草黑胫病菌的生长有较好的抑制作用;菌株ZY-9-1和菌株ZY-19-2发酵液应用于大田后,对烟草黑胫病有一定的防治效果,防效分别达到56%和50%;试验样品经过常规化学分析和感官评吸,结果表明菌株发酵液对烟叶品质无不良影响。     

洛阳烟区烟株根围抗烟草疫霉放线菌的筛选与鉴定

为筛选对烟草疫霉具有拮抗作用的放线菌菌株,有效防治烟草黑胫病,对洛阳烟区烟株根围土壤中分离的放线菌采用改良平板对峙法与菌丝生长速率法测定了供试菌株及其发酵液对烟草疫霉的拮抗作用,并通过形态学观察、生理生化测定及16S rDNA序列分析鉴定了优势拮抗放线菌的种类。结果表明:在获得的227个放线菌单菌落中,8个菌株的发酵液对烟草疫霉菌丝生长的抑制率达100%,被确定为优势拮抗放线菌。根据这些菌株的形态学观察、生理生化反应与16S rDNA序列分析结果,将菌株YY75鉴定为鲁萨链霉菌(Streptomyces lucensis),菌株YY124、YY135鉴定为高贵链霉菌(S. nobilis),菌株LN204、LN221、LN247鉴定为娄彻链霉菌(S. rochei),菌株SX92鉴定为珊瑚链霉菌(S. coralus),菌株SX59鉴定为金黄回旋链霉(S. aureoverticillatus),均属于放线菌门、放线菌纲、链霉菌目、链霉菌科、链霉菌属。     

生防菌复配对烟草黑胫病的防治效果研究

为解决单一生防菌防效不稳定问题,通过平板对峙试验、相容试验、盆栽试验从6株生防菌中筛选对烟草疫霉菌（Phytophthora parasitica var. nicotianae）具有较高拮抗活性的复配菌株组合;利用分子生物学方法对各菌株的16S rRNA和gyrA基因进行系统进化分析,鉴定各菌株分类地位;并采用轮换因子法筛选各菌株的最适发酵培养基。结果表明,GY1、GY10和GY12发酵后混合施用对烟草黑胫病的防治效果最好,平板抑菌率达到86.9%,盆栽防效为74.53%,比GY1、GY10、GY12单独处理分别提高15.34%、27.42%和44.94%;分子鉴定表明,3株菌分别为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）;并筛选得到了GY1、GY10、GY12的最适发酵培养基,发酵24 h后生物量相较于基础培养基分别增加了75.12%,92.31%和194.55%。     

抗烟草疫霉活性木霉与芽孢杆菌共培养体系的构建与优化

为减轻化学药剂防治烟草疫霉带来的弊端,提高生防菌剂效果,通过琼脂糖扩散法筛选抗性木霉并构建木霉和枯草芽孢杆菌Tpb55共培养体系,采用菌丝生长速率法评价了种间互作防治烟草疫霉的效果,利用单因素法优化共培养体系的培养基成分和发酵条件,并通过盆栽试验验证其对烟草黑胫病的防治效果。结果表明,棘孢木霉HG1具有良好的抗烟草疫霉活性,与枯草芽孢杆菌Tpb55的共培养体系如下:HG1(10⁶CFU/mL)接种量为2%,与Tpb55(10⁶CFU/mL)接种比例为10:1,采用序列共培养方式,即先接种HG1,24h后接种Tpb55。优化后的最适培养基成分为木糖10 g/L,蛋白胨和酵母粉(质量比为2:1)5g/L;最佳发酵为温度25℃,初始pH7.5,转速140r/min。共培养发酵液盆栽防病效果显著优于单培养,防治效果达到74.72%。该体系发酵后能够明显提升两株生防菌抑制烟草疫霉的活性,并对烟草黑胫病具有显著防病效果,为后续多菌株共发酵生防菌剂的开发提供基础。     

生防真菌与氨基寡糖素组合对烟草黑胫病和根黑腐病的防治

针对烟草黑胫病和根黑腐病两种烟草土传病害日益加重的现状,利用生防真菌棘孢木霉MX菌株和产紫青霉Q2菌株分别与植物诱抗剂氨基寡糖素进行组合,在盆栽条件下测定了其分别在两种病害胁迫下的抗病效果。结果表明,产紫青霉Q2和棘孢木霉MX对烟草黑胫病菌和根黑腐病菌均有较强的拮抗作用,其发酵滤液能有效抑制两种病原菌的生长,与氨基寡糖素组合后能够更好地促进烟草幼苗的生长,对黑胫病和根黑腐病的防治效果均达到65%以上,能显著提高发病烟草中防御酶PAL、SOD、POD的活性。     

申嗪霉素对烟草黑胫病的毒力及防治效果

为探明申嗪霉素防治烟草黑胫病的潜力,在室内离体条件下测定其对烟草黑胫病菌菌丝生长、孢子囊形成和游动孢子释放的毒力,并通过温室盆栽和大田药效试验明确其对烟草黑胫病菌的防效及对烟草生长的影响。结果表明,申嗪霉素对沂水烟区黑胫病菌孢子囊的形成和游动孢子的释放抑制效果最好,EC₅₀值分别为0.31和0.35 μg/mL。室内防效结果表明,1%申嗪霉素悬浮剂（15 g a.i./hm²）对烟草黑胫病的防效为84.37%,显著高于25%甲霜灵可湿性粉剂（56.33%）和50%烯酰吗啉可湿性粉剂（80.55%）,而田间药效试验结果与室内防效基本一致,在冕宁和诸城两地1%申嗪霉素田间防效分别为90.49%和82.93%,显著高于对照药剂甲霜灵（71.89%,38.87%）和烯酰吗啉（78.42%,69.01%）。除此之外,申嗪霉素较甲霜灵和烯酰吗啉在提高株高、茎粗、有效叶片数及光合速率等指标效果更好。可见,申嗪霉素是防治烟草黑胫病的有效制剂,可作为甲霜灵和烯酰吗啉的轮换药剂使用。     

恩施烟区烤烟黑胫病菌致病力测定及抗性品种差异鉴定

为有效进行恩施烟区烟草黑胫病的防控,本研究采用菌丝块茎基部创伤接种法鉴定了恩施烟区烟草黑胫病菌的致病力。根据黑胫病菌菌株接种K326、红花大金元、云烟202后的AUDPC （病害流行曲线下面积）数值进行了聚类分析,将恩施烟区烟草黑胫病菌划分为I、Ⅱ、Ⅲ 3种致病型。3种致病型病原菌没有表现出典型的强、中、弱致病特性。7个抗性烟草品种对不同致病型黑胫病菌表现出抗性差异,革新3号对3种致病型菌株均表现出较好的抗性。     

寡雄腐霉与氟噻唑吡乙酮协同防治烟草黑胫病研究

为了探究寡雄腐霉（Pythium oligandrum,PO）与氟噻唑吡乙酮（Oxathiapiprolin,OX）联合防控烟草黑胫病的可行性,采用菌丝生长速率法和平板对峙法分别测定了PO和OX的生物相容性,及OX、PO和OX+PO对黑胫病菌的毒力,并通过盆栽试验分别测定了OX、PO和OX+PO对烟草黑胫病菌的防效,以及对烟草幼苗的促生效应。生物相容性试验结果表明,不同浓度OX处理下,PO的生长速率与空白对照无显著差异。室内毒力结果显示,8.0×10^-3mg/L OX对烟草黑胫病菌的抑制率为91%,EC₅₀为2.19×10^-3 mg/L,而OX（1.0×10^-3 mg/L）与PO联用的抑制率达96.31%。盆栽试验结果表明,OX+PO处理对烟草黑胫病的防效最高（84.57%）,比OX（77.76%）或PO（76.54%）单独处理防效分别提高8.76%和10.49%。OX和PO联用对烟草促生效果显著,其株高、茎粗、叶长、叶宽分别比对照处理提高了57.10%、20.21%、33.62%、35.08%。以上结果表明,PO与OX联用能够有效降低OX的使用量,提高防病效果,促进烟草生长。     

烟草黑胫病菌分子生物学研究进展

烟草黑胫病是烟草主要病害之一,每年给烟草生产造成巨大损失。烟草黑胫病菌隶属于卵菌纲疫霉属。近十几年来随着分子生物学技术的迅猛发展,烟草黑胫病菌的分子生物学研究有了较大进步。本文总结了烟草黑胫病菌在病原菌起源和分类命名、全基因组序列、线粒体基因组序列和功能基因等方面的研究进展,并分析了烟草黑胫病菌在分子生物学研究方面的未来发展方向,以期为烟草黑胫病菌致病机理研究和烟草分子抗黑胫病育种提供一定的参考。     

三株芽孢杆菌的生防特性研究

为明确贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）GY1、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）GY10和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）GY12的生防特性,采用平板试验法、对扣法、盆栽试验等,对三株生防菌的抑菌谱、次生代谢产物、挥发性物质、根际定殖能力和促生能力等进行了研究。结果表明,GY1、GY10、GY12培养液可以显著促进烟草种子的萌发和烟株的生长;三株生防菌抑菌谱广,对烟草赤星病菌、黑胫病菌及花生镰刀菌等9种病原具有显著的抑制作用,并且都具有分泌嗜铁素和蛋白酶的能力;三株生防菌发酵上清液和挥发性物质对链格孢菌（Alternaria alternata）和烟草疫霉菌（Phytophthora parasitica var.nicotianae）具有显著抑制作用;菌株的分泌蛋白热稳定性好,对烟草赤星病菌具有显著的体外抑菌活性,并对酸性环境具有较高的耐受性;根际定殖结果表明,GY1-GY10-GY12复配与单菌株相比能增加各生防菌在烟草根际的定殖。以上结果对于菌株GY1、GY10、GY12生防特性的深入挖掘和产业化开发具有一定的指导作用。