RNAi沉默整合素连接激酶基因对人膀胱癌BIU-87细胞体内成瘤的影响

目的：研究RNAi沉默整合素连接激酶（integrin-linked kinase,ILK）基因对人膀胱癌BIU-87细胞裸鼠皮下成瘤的影响。方法：构建4条针对ILK基因的特异性miRNA干扰载体和1条阴性对照载体,并利用脂质体转染法将其转染BIU-87细胞,并筛选获得稳定转染细胞株。利用RT-PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测抑制效果。将10只裸鼠随机分为2组,皮下分别接种转染组细胞和未转染组细胞,观察瘤体的生长情况,并于接种4周后处死裸鼠,测量其瘤体体积和重量,并将瘤体做HE染色,观察瘤体病理情况。结果：转染组细胞ILK的表达明显受到抑制,以miR-3组的抑制效率最高。裸鼠皮下成瘤实验检测发现：两组均有瘤体形成,未转染组较转染组瘤体生长快,未转染组体积平均为：289.56±36.49mm3,转染组为：56.67±4.32mm3。瘤体重量分别为：1.265±0.02 g和0.518±0.03g。转染组与未转染组相比差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：利用RNAi技术能有效抑制靶基因ILK的表达,从而降低膀胱癌细胞的体内的增殖能力。     

双氢青蒿素诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的形态学研究

目的：研究双氢青蒿素（DHA）诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡作用,并观察其形态学变化。方法：以前列腺癌PC-3细胞为研究对象,在体外经不同浓度的DHA处理48小时后,扫描电镜（SEM）观察细胞凋亡;并建立PC-3细胞裸鼠种植瘤模型,20只模型鼠随机分为对照组、溶剂组、DHA大剂量组及DHA小剂量组,经13天干预后,透射电镜（TEM）观察肿瘤组织形态学变化,体视学分析肿瘤微血管密度（MVD）。结果：PC-3细胞经DHA处理后,SEM观察到典型的凋亡细胞;裸鼠种植瘤经治疗后,TEM观察肿瘤组织中散在凋亡细胞及凋亡小体,且DHA大小剂量组MVD均低于对照组（P〈0．05）。结论：DHA具有较强的抗肿瘤作用,其作用机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

纳秒脉冲治疗裸鼠皮下移植瘤抗癌机制研究

本研究探讨了纳秒级陡脉冲(nsPEF)对人恶性黑色素瘤A375细胞裸鼠皮下移植瘤模型可能的抗癌机制.通过用游标卡尺测量裸鼠皮下瘤大小,估算抑瘤率.用琼脂糖凝胶电泳、TUNEL法检测肿瘤细胞在纳秒脉冲电场下的细胞凋亡情况,并用HE染色观察细胞形态变化.通过免疫组化法检测瘤体内微血管密度MVD、微血管形态、血管生长因子VEGF和增殖细胞核抗原PCNA的表达.结果发现nsPEF治疗后4d肿瘤生长抑制率达42.6％,琼脂糖凝胶电泳显示治疗后2h组出现阶梯状分布,治疗后4d组阶梯状分布较之明显,对照组未见阶梯状分布;TUNEL法显示治疗组凋亡率均高于对照组,治疗后4d组凋亡率明显高于2h组(p＜0.01).脉冲处理后见肿瘤区即刻变为灰白色;HE染色发现治疗后2h组肿瘤见少许坏死区域、4d组肿瘤坏死区域增多;免疫组化检测发现治疗后4d组微血管腔闭塞状态、MVD、VEGF及PCNA表达较对照组及治疗后2h组明显增多(P＜0.01),而对照组与治疗后2h组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结果表明纳秒级陡脉冲可能通过诱导细胞大量凋亡,短时间内降低肿瘤血流量,降低细胞增殖能力并降低肿瘤血管形成和重塑以防止肿瘤再生等方面发挥其抗癌效应.     

As2O3联合H22源exosome的抗肿瘤作用研究

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）联合小鼠肝癌（H22）源exosome对小鼠皮下种植性肝癌（H22）模型的抗瘤作用。方法：超速离心及密度梯度离心法提取exosome,Bradford法蛋白定量;建立BALB／c小鼠皮下荷瘤模型．实验分4组：空白成瘤对照组、As2O3组、As2O3联合exoeome组和exosome组。观察As2O3、exosome、及其联合应用的体内抗瘤效应;监测在体肿瘤的生长情况;计算抑瘤率、生存率：免疫组织化学法检测肿瘤组织中浸润的CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞。结果：与空白成瘤对照组比较,As2O3组、及其与exosome联合组的肿瘤生长明显放缓（P〈0．05）。其抑瘤率分别为44．58％、66．27％。As2O3组及As2O3联合exosome组肿瘤组织中浸润的CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞明显增加（P〈0．05）。结论：As2O3与exosome联合应用对小鼠皮下种植性实体性肝癌（H22）有协同治疗效应。     

双氢青蒿素对前列腺癌裸鼠种植瘤CHOP表达的影响

目的：研究双氢青蒿素对前列腺癌PC-3细胞裸鼠种植瘤CHOP表达的情况,并探讨其作用途径及机制。方法：采用人前列腺癌PC-3细胞建立裸鼠种植瘤模型,20只模型鼠随机分为对照组、溶剂组、实验1组及实验2组,经13d干预后,免疫组织化学法检测CHOP的表达水平;透射电子显微镜观察DHA对PC-3细胞种植瘤超微结构的影响。结...     

基于Ce6和MMP-2抑制剂的多级控释脂质纳米复合体用于光动力-免疫协同治疗黑色素瘤

光动力疗法（PDT）能诱导肿瘤细胞免疫原性死亡，与免疫治疗联合能够提高对各种癌症的治疗效果。基于自然杀伤（NK）细胞的免疫疗法能够增强PDT的抗癌能力。以肿瘤组织中NK细胞免疫作用的分子途径为靶点，通过药物调控增强其对肿瘤的免疫作用，并进一步联合PDT可以有效提升抗肿瘤疗效。将包封基质金属蛋白酶-2(MMP-2)抑制剂SB-3CT的β-环糊精（β-CD）与负载光敏剂Ce6的脂质体通过MMP-2响应多肽组装在一起，构建了一种肿瘤微环境/光多重响应的脂质纳米药物控制系统（MRPL-SC），在细胞和裸鼠移植瘤模型中证明了MRPLSC介导的PDT和NK免疫疗法协同抗肿瘤作用。MRPL-SC到达肿瘤部位后，连接β-CD与脂质体核心的MMP-2响应性多肽会在肿瘤组织微环境中过表达的MMP-2的作用下水解，释放包封在β-CD中的SB-3CT,SB-3CT通过直接对MMP-2进行原位抑制来有效提升肿瘤组织中NKG2DLs的表达和NK细胞免疫响应；封装了Ce6的脂质体通过细胞内吞进入肿瘤细胞后，在660 nm激光照射下通过PDT诱导肿瘤细胞凋亡，同时进一步诱导肿瘤细胞NKG2DLs表达，实现对肿瘤组织中...     

胸腺上皮肿瘤的超微结构观察

目的：观察胸腺上皮肿瘤(thymic epithelial tumor,TET)WHO病理分型的超微结构特征。方法：对14例TET采用WHO病理分型,分别观察组织病理学和超微结构的形态学特征。结果：按WHO病理分型诊断胸腺瘤A型1例,AB型3例,B1型1例,B2型4例,B3型3例,C型2例。各型胸腺瘤均具有上皮性肿瘤的结构特点,如：张力原纤维、桥粒等结构;C型胸腺瘤(胸腺癌)异型性很明显,常见肿瘤性坏死,其他类型则有一定程度的异型性。A型胸腺瘤细胞核异染色质丰富,核仁不明显,无异型性;AB型和B1型异型性不明显,细胞核常染色质较均匀,可见小核仁;B2、B3型胸腺瘤异型性较明显,常染色质较丰富,核仁明显,细胞质宽大,有突起。结论：从超微结构特点来看：A型胸腺瘤生长不活跃,AB型和B1型胸腺瘤生长略活跃;B2、B3型胸腺瘤生长较活跃;C型胸腺瘤生长很活跃。     

全反式维甲酸对卵巢上皮性癌荷瘤鼠干预后肿瘤细胞的超微结构变化

探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对裸鼠卵巢上皮性癌细胞(CAOV3)荷瘤动物模型干预后肿瘤细胞超微结构的变化及意义。每只荷瘤裸鼠经胃管针给药ATRA剂量为2mg/kg 2d×4周,取新鲜肿瘤组织进行电镜制样观察。结果显示CAOV3荷瘤裸鼠经ATRA干预后,肿瘤细胞出现细胞表面微绒毛明显增多,细胞间常见桥粒和紧密连接,胞浆内粗面内质网、线粒体和糖原颗粒增加,还有发育良好的高尔基体,细胞核异染色质增加,常染色质减少,偶见被吞噬的凋亡细胞。上述超微结构变化提示ATRA可诱导和促进CAOV3细胞分化,抑制肿瘤生长。     

人卵巢小细胞癌裸小鼠移植瘤模型的形态观察

我所最近建立一株人卵巢小细胞癌裸小鼠移植瘤模型,已传十二代,移植瘤生长良好。现就各代移植瘤的光镜及电镜形态特点报告如下:SPF级BALB/C裸小鼠由本所实验动物房提供。移植瘤株来自一例伴高血钙的卵巢小细胞癌妇女右侧卵巢肿瘤切除后复发再次手术取下的后腹膜巨大肿块的癌组织,接种于裸鼠两侧腋下的皮下,约三个月后长成1cm左右取材,作常规光镜,电镜切片观察。光镜观察结果:裸小鼠移植瘤各代光学切片组织学形态与手术标本的病理所见基本相同。瘤块周围部分     

人二型大麻受体基因的pIRES2-EGFP质粒的构建及其真核表达

目的：构建含有人二型大麻素受体（CB2）基因的真核表达载体,并实现其在HEK293细胞的表达。方法：首先采用PCR方法从含有CB2基因的质粒pcDNA3.1（＋）-CB2中扩增获得人的CB2基因,再采用基因重组技术将CB2的DNA片段插入真核表达载体pIRES2-EGFP。将获得的pIRES2-EGFP-CB2重组子转染HEK293细胞,应用荧光显微镜观察EGFP的表达情况,RT-PCR和报告基因检测CB2的表达情况。结果：酶切和测序结果验证真核表达载体pIRES2-EGFP-GB2构建成功。可在荧光显微镜下观察到转染HEK293细胞表达的绿色荧光;RT-PCR和双荧光素酶报告基因法检测证明CB2蛋白在真核细胞中成功表达;CB2受体激动剂JWH-015能显著逆转腺苷酸环化酶激动剂forskolin诱发的荧光素酶活性增加。结论：成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-CB2,为进一步研究CB2基因的生理学和病理生理学功能及调控机制奠定了实验基础。     

粉防己碱对血管性痴呆大鼠学习记忆能力及神经元凋亡的影响

目的：探讨粉防己碱（Tet）对血管性痴呆（VaD）大鼠学习记忆能力和海马神经元凋亡的影响。方法：将40只大鼠随机分为假手术组、模型组、Tet干预组（含10和30mg/kg两个剂量组）,采用双侧颈总动脉永久性结扎（2-VO法）建立VaD大鼠模型。造模12周后进行Morris水迷宫实验检测大鼠行为学,HE染色观察海马CAl...     

点阵CO2激光治疗口腔黏膜扁平苔藓的疗效观察

通过与传统CO2激光疗法比较,评价点阵CO2激光治疗口腔黏膜扁平苔藓的优劣.方法:经临床和病理检查确诊为口腔黏膜扁平苔藓患者116例,其中A组60例,接受传统CO2激光疗法,B组56例,接受点阵CO2激光疗法.治疗由同一人操作,参数相同:功率5.OW/cm2,照射时间3s,治疗次数3次,每次间隔10周.治疗后观察局部组...     

超声微泡介导野生型P53基因转染鼠视网膜母细胞瘤的实验研究

目的:探讨超声微泡造影剂在一定强度的超声波照射下介导野生型p53(wtp53)基因转染荷瘤小鼠的可行性,为实现外源基因高效,定向的转移目的奠定基础。方法:将12只BAlB/C(nu/nu)裸小鼠双眼玻璃体腔接种HXO-Rb44细胞,造模成功后,将动物随机分为2组,第1组于尾静脉注入含质粒的微泡造影剂;第2组尾静脉注射质粒与微泡的混合液,并立即以0.5W/cm2〔1〕的超声波辐照小鼠眼球60s,工作时间控制为20%。转染7天后,处死动物,摘除眼球,RT-PCR检测wtp53基因的表达情况。结果:超声照射组动物的肿瘤组织中均检测到wtp53的mRNA表达,而未照射组动物肿瘤组织中未检测到mRNA的表达。结论:超声微泡能使外源基因wtp53高效的转染小鼠RB肿瘤组织。     

三氧化二砷对照射后人肺癌细胞MGMT和VEGF表达的影响

目的：本文探讨三氧化二砷（Arsenic trioxide,As2O3）对受照后人肺癌A2细胞株MGMT和VEGF表达的影响。方法：设立空白对照组、照射组（直线加速器X射线照射,2Gy）、As2O3组（1.0μmol/L As2O3）、As2O3＋照射组（1.0μmol/L As2O3＋X射线照射,2Gy）。平板克隆形成试验测定各实验组细胞集落形成率,用RT-PCR和免疫组化检测MGMT（甲基鸟嘌呤甲基转移酶）、VEGF（血管内皮生长因子）基因和蛋白水平的变化。结果：As2O3＋照射组细胞集落形成率较As2O3组及照射组明显下降,与As2O3组或照射组比较差异具有显著性（P〈0.01）。As2O3＋照射组细胞MGMT、VEGF基因表达明显减少,而且MGMT、VEGF蛋白的表达明显降低,与As2O3组或照射组比较差异具有显著性（P〈0.01）。结论：As2O3能使受照后人肺癌A2细胞MGMT、VEGF基因及蛋白表达水平明显下调,可能是As2O3对人肺癌细胞辐射增敏的机制之一。     

姜黄素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

目的：探讨姜黄素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其可能机制。方法：采用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,随机分成假手术组、对照组、100mg/kg姜黄素组及300mg/kg姜黄素组及300mg/kg姜黄素组,分别在脑缺血再灌注后24h处死,观察大鼠神经功能缺失的评分,应用TTC染色观察梗死体积,尼氏染色观察神经元形态结构特征,TUNEL染色计数凋亡神经元,荧光免疫组化及Western-blot检测caspase-3蛋白的表达变化。结果：姜黄素能明显改善大鼠缺血再灌注后的神经功能缺损,缩小梗死体积,明显减少TUNEL染色阳性细胞数,下调caspase-3蛋白的表达。结论：姜黄素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有良好的神经保护作用,这可能与其减少caspase-3的表达,抑制缺钱神经元的凋亡密切相关。     

NKG2D配体在视网膜母细胞瘤RB细胞的表达及意义

目的：探讨视网膜母细胞瘤RB细胞株上NKG2D配体的表达情况及其对同种异体NK细胞杀伤活性的影响。方法：采用半定量RT-PCR法检测RB细胞及人红白血病细胞K562细胞上NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3的mRNA表达情况。应用MTT法检测人NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。结果：K562细胞表面表达MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3,RB细胞表面表达MICA、MICB、ULBP2、ULBP3不表达ULBP1。K562细胞表面NKG2D的配体mRNA表达强度明显强于RB细胞（P〈0．05）。当效靶比分别为5：1、10：1、20：1、40：1时NK细胞对K562、RB细胞的杀伤活性分别为28．32％±2．06％、9．11％±0．89％;45．62％±1．17％、22．87％±1．38％;60．79％±1．78％、32．69％±0．37％;73．83％±3．05％、50．29％±2．49％,在各效靶比时NK细胞对K562细胞的杀伤活性较RB细胞明显增强（P〈0．05）。结论：NKG2D配体影响NK细胞对靶细胞的杀伤活性,NKG2D配体表达水平可能决定着NK细胞抗肿瘤免疫应答的强弱,提高NKG2D配体的表达有可能提高NK细胞的抗肿瘤作用。