应用AFM对人骨髓间充质干细胞的形态学研究

骨髓多能基质干细胞叉称骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)。MSCs在特定的培养条件下可以分化为多种细胞：成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌腱细胞、内皮细胞、神经元、神经胶质细胞、成纤维细胞及肝卵圆细胞等。此前人们多用扫描电镜、透射电镜及倒置显微镜对其进行观察研究。     

人骨髓间充质干细胞的分离培养及其形态学特点

利用Percoll梯度分离、贴壁筛选法及单克隆培养法分离、培养人骨髓间充质干细胞（mesenehymal stem cells，MSCs）；采用流式细胞术检测MSCs免疫学表型；采用细胞组织化学和免疫荧光技术观察MSCs的一般形态学特点；利用透射电镜和扫描电镜观察MSCs的超微结构。结果表明，分离、培养出高度同源性的MSCs具有独特的细胞免疫学表型，即CD73、CD105、CD44、CD166、CD90阳性，CD34、CD31、CD45阴性；细胞组织化学MSCs PAS-过碘酸雪夫氏染色阳性，苏丹黑-B（SB）及碱性磷酸酶（AKP）染色阴性；免疫荧光见细胞CD73、CD105阳性；透射电镜下MSCs表面有微绒毛，相邻细胞间有缝隙连接，细胞器丰富；扫描电镜下MSCs呈长梭形、鱼群状排列，表面有许多微绒毛。实验结果为MSCs的诱导分化及应用提供了形态学基础。     

体外培养兔骨髓间充质干细胞的超微结构观察

本文对体外培养的新西兰大白兔骨髓间充质干细胞 (ＭＳＣｓ)的超微结构进行了电镜观察 ,为选择良好的细胞生长状态 ,应用于组织工程提供实验依据。分别对原代和传代后第二、三、四、五代细胞进行了透射电镜观察。结果原代及第二、三代细胞胞核呈圆或卵圆不规则形 ,双层核膜完整 ,核仁大而明显 ,部分细胞见有 2～ 3个核仁 ,常异染色质分布均匀。胞浆丰富 ,呈中等电子密度 ;细胞器较简单 ,但数量丰富 ,结构清晰 ,如粗面内质网、滑面内质网、线粒体等 (图 1)。第四、五代细胞透射电镜下见有部分细胞开始出现结构异常现象。有些细胞的细胞核内异…     

一例Netherton综合征患者皮肤和毛发的电镜观察

目的：电镜观察Netherton综合征皮肤和毛发的超微结构改变。方法：对一例21岁Netllerton综合征男性患者的皮肤及头发毛干进行透射电镜及扫描电镜观察。结果：透射电镜观察显示，表皮角质层角质细胞分离，角质细胞间隙见板层小体、电子致密颗粒及变性桥粒，角质细胞内见多量脂滴。扫描电镜观察显示毛干呈竹节样改变伴有毛小皮断裂和剥脱。结论：表皮角质层细胞间的板层小体及电子致密颗粒是Netherton综合征特征性的超微结构。电镜观察对Netherton综合征的早期诊断有意义。     

神经干细胞克隆内细胞的扫描电镜超微结构研究

近年来，随着神经干细胞体外培养模型的建立，神经干细胞的研究正逐渐成为生命科学领域新的研究热点。为了观察神经干细胞克隆在分化过程中超微结构的变化以及细胞间的相互关系，我们做了单一神经干细胞克隆在poly-orithine上发生分化迁移过程中的扫描电镜观察。     

人肾旁神经节小强荧光(SIF)细胞超微结构观察

目的：观察人SIF细胞超微结构。方法：荧光组化法和透射电镜技术。结果：小强荧光细胞与主神经元超微结构有较大区别,其突出特点是胞质中可见大量膜包的密芯颗粒泡,直径在50－200nm间。结论：SIF细胞质中含有的密芯颗粒泡可能为分泌颗粒。     

平场定量相位显微镜在骨髓间充质干细胞线粒体动力学观察中的应用研究（特邀）

分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,传代纯化后接种至共聚焦培养皿,置于自主研发搭建的平场定量相位显微镜下,利用荧光及相位双通道证实线粒体特征后,进行长时间无标记观察,分析平场定量相位显微镜观察到的线粒体分裂、融合过程,以及细胞凋亡过程中的线粒体变化。平场定量相位显微镜无标记观察到的线粒体可与荧光标记的线粒体完全重叠,表明平场定量相位显微镜可以清晰观察线粒体并进行无标记高分辨率成像。同时,平场定量相位显微镜可以对培养条件下的骨髓间充质干细胞进行长时间无标记观察,并高分辨率记录线粒体分裂、融合过程。此外,还利用平场定量相位显微镜首次完整记录了CCCP作用下线粒体的变化,该变化直观地呈现了线粒体途径的细胞凋亡过程。平场定量相位显微镜可以对培养的细胞进行长时间无标记高分辨率观察,为线粒体动力学的研究提供了一种新的观察手段。     

患者增殖体、扁桃体组织内尼曼-匹克细胞的超微结构观察

目的：观察尼曼-匹克病患者增殖体、扁桃体组织中的尼曼-克细胞的超微结构。方法：取增殖体、扁桃体组织做超薄切片，透射电镜下观察尼曼-匹克细胞的超微结构。结果：在透射电镜下，尼曼-匹克细胞呈圆形或椭圆形，细胞质丰富，其中有数量不等的嗜锇板层小体，呈板层状或同心圆状排列。细胞基底部，可查见单层或多层基底膜和细胞表膜下有少数吞饮小泡，具有内皮细胞形态特征。结论：尼曼-匹克细胞的细胞质内可见数量不等的嗜锇板层小体及基底部的单层或多层基底膜，为其特征性的结构，可作为电镜超微结构诊断及鉴别诊断的形态学依据。     

用免疫电镜的方法观察间充质干细胞及再生纤维的超微结构和胶体金标记

本文研究神经再生过程中雪旺氏细胞的功能和作用 ,观察间充质干细胞在体内的存活和功能情况。方法 :以逆转录病毒为载体 ,将EGFP报告基因导入大鼠的骨髓间充质干细胞后 ,注入受损伤的周围神经组织内。三周后取材 ,用FA GA混合固定 ,分为二组 ,A组用K4M低温包埋切片后标记anti EGFP,IgG Au ;B组经冷冻超薄切片后标记anti EGFP ,IgG Au ;观察其超微结构及胶体金标记情况。结果 :电镜下可以观察到A、B二组均呈明显的阳性反应 ,胶体金颗粒均匀地分布在细胞核内及胞浆内。其中K4M低温包埋方法的金颗粒为散在分布 ,超微结构较好 (图 1…     

68例脑胶质瘤透射电镜和扫描电镜观察及其鉴别诊断意义

收集人脑原发性胶质瘤标本68例，其中星形细胞瘤9例，间变性星形细胞瘤22例，胶质母细胞18例，少突胶质细胞瘤3例，间变性光突胶质细胞瘤4例，少突－星形胶质细胞肿瘤12例。另有上皮型和纤维母细胞型脑膜瘤6例。采用透射电镜和扫描电镜观察瘤细胞和间质的超微结构特点。结果显示，各型星形细胞肿瘤瘤细胞共同特点是胞浆及胞突内含有多少不等的胶质细丝；胞膜皱折不平，有多少不一的胞突，这些胞突相互交织在一起。Rosenthal纤维由密集排列的细丝状物围绕不规则的嗜锇性团块构成。脑膜瘤瘤细胞有很多指状突起，细胞间可见桥粒连接，胞膜表面缺乏星形细胞瘤细胞表面的那种皱折。结果表明，透射电镜和扫描电镜可以做为脑胶质瘤病理诊断、鉴别诊断的辅助手段。在普通光镜观察的基础上，结合免疫组化结果，应用扫描电镜还可以比较直观地观察到瘤组织内各种成分之间的相互关系。     

露蜂房蛋白对急性髓细胞白血病患者骨髓单个核细胞超微结构的影响

目的：观察中药露蜂房蛋白(NVP)成份对急性髓细胞白血病(AML)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)超微结构的影响。方法：采用体外细胞培养,加入不同浓度露蜂房蛋白成分作用于AML患者BMMNC,培养72h收集细胞,常规制备超薄切片,透射电子显微镜下观察AML患者BMMNC的超微结构。结果：露蜂房蛋白各处理组细胞核染色质浓缩、边集,呈新月形或环状或细胞核碎裂呈块状。线粒体出现空泡样变及髓样变。结论：中药露蜂房蛋白成份有明显诱导AML患者体外培养BMMNC凋亡的作用,并呈现典型的细胞凋亡超微结构改变。     

He-Ne激光对家兔淋巴结影响的光镜和电镜观察

以Ｈｅ－Ｎｅ激光局部照射家兔颈前部及穴位照射，取颈前淋巴结进行光镜和电镜观察，同时用单向免疫扩散法测血清ＩｇＧ含量。结果表明，局部照射和穴位照射均能使淋巴结内多种细胞的超微结构发生改变，细胞功能表现活跃。穴位照射组血中ＩｇＧ含量较对照组明显升高。说明Ｈｅ－Ｎｅ激光照射增强机体细胞免疫和体液免疫机能是有细胞学基础的。提示穴位照射能增强全身免疫机能，而局部照射只能增强被照部位的免疫机能     

Culture prior to transplantation preserves the ultrastructural integrity of monkey pancreatic islets

Transplantation of pancreatic islets represents a promising way of curing type I diabetes (insulin-dependent diabetes mellitus). Culture enables the survival of endocrine tissue awaiting islet transplantation and reduces islet immunogenicity prior to xenografting. In this study, attempts were made to preserve the monkey islets in culture for 7 days and to study the ultrastructure by electron microscopy. The islets were isolated from monkey pancreas by the collagenase digestion method and were separated from acinar cells by dextran density gradient centrifugation. These islets were preserved in a humidified atmosphere of 5% carbon dioxide and 95% air for 7 days. The culture medium used was CMRL-1066. After 7 days of culture the islets were processed for light and electron microscopic studies, which revealed that the cultured islets were intact and maintained their structural integrity. Semi-thin sections of the cultured islets showed morphology with occasional structural alterations at the periphery. Dithizone staining of the cultured islets showed crimson red colour, proving that the islets were pure and without any exocrine contamination. Electron microscopy showed that the cultured islets had well-preserved alpha-, beta- and delta-cells. Different cell types of the monkey pancreatic islets were identified by the presence of their characteristic secretory granules. The ultrastructural characteristics present in hormone-synthesizing cells, i.e. rough-endoplasmic reticulum, Golgi apparatus, mitochondria and secretory granules, were observed as in native islets.     

超短波对兔牙移动影响的超微结构研究

本文采用超短波作用于兔牙上,并设立对照组,通过透射电镜观察其对牙周组织细胞的影响。结果发现,超短波可增加牙槽骨张力侧的成骨细胞及压力侧的破骨细胞量,但两组参与改建的细胞超微结构无显著性差异。作者认为,超短波能加快牙移动速度,且对组织细胞无不良影响。     

旋转生物反应器的设计及其用于细胞培养

目的：设计一种旋转生物反应器并评价在其中进行细胞培养的效果。方法：制造一套旋转生物反应器并与静态培养进行比较。结果：扫描电镜结果表明旋转生物反应器动态培养的细胞生长速度、数量和形态明显优于24孔板静态培养。结论：自制旋转生物反应器可较好实现细胞三维立体培养，能作为细胞工程实验室一种较为理想的细胞培养装置，可在细胞和组织工程领域中广泛应用。     

二氧化钛纳米颗粒对小鼠单核巨噬细胞超微结构影响的电镜研究

目的：应用电镜观察二氧化钛纳米颗粒（nano-TiO2）对小鼠单核巨噬细胞超微结构的影响。方法：将不同浓度的nano-TiO2溶液加入小鼠单核巨噬细胞（Rawcell）中,在37℃、5%CO2的细胞培养箱中孵育4h,收集细胞,制样后在透射电镜下观察小鼠单核巨噬细胞超微结构的改变。结果：电镜下,nano-TiO2的粒径为20～35nm。致密的nano-TiO2通过内吞进入细胞,当浓度超过200μg/mL时,细胞胞质空泡内吞噬有大量成簇的致密颗粒,细胞核固缩,染色质浓缩、边集,出现早期细胞凋亡改变。     

缺氧诱导因子1α对大鼠骨髓间充质干细胞核心结合因子α1表达的影响

目的：研究体外低氧实验中缺氧诱导因子1α（HIF-1α）对大鼠骨髓间充质干细胞核心结合因子α1（Cbfα1）表达的影响。方法：将体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞分别置于常氧（含有5％c02的培养箱中）和低氧（含4％02、5％CO2和91％N2的三气培养箱中）中培养,分别于1d、3d、5d和7d用实时荧光定量PCR检测细胞内HIF-1α和CbfalmRNA的表达水平：用siRNA抑制细胞HIF-1αmRNA表达后用Westernblot法检测HIF-1α和Cbfal蛋白表达。结果：与常氧组相比,低氧组细胞HIF-1αanRNA的表达均增加（1d、3d、5d和7d：P〈0．05）,且3d达到最高峰;细胞CbfalmRNA的表达明显下降,3d尤为明显（P〈0．05）：低氧组细胞转染siRNA干扰HIF-1α表达后,能促进细胞内Cbfcd蛋白的表达（P〈0．05）。结论：低氧微环境抑制骨髓间充质千细胞的成骨向分化,细胞内HIF-1α反向调节Cbfal的表达。     

A useful method for observing intracellular structures of free and cultured cells by scanning electron microscopy

Scanning electron microscopy (SEM) using osmium-maceration methods has been used for analyzing the three-dimensional structure of cell organelles in tissue samples, but it has been quite difficult to observe free and cultured cells with this technique. The present study was performed to develop a method that can be applied to free and cultured cells for SEM studies of intracellular structures after osmium maceration. The method was also applied to light microscopy (LM) and to transmission electron microscopy (TEM). HeLa cells and human leukocytes were fixed with a mixture of 0.5% paraformaldehyde and 0.5% glutaraldehyde followed by an additional fixation with 1% osmium tetroxide. These cells were embedded in low-melting-point agarose. A temperature-responsive dish was also used for collection of cultured cells before embedding. For LM and TEM, the cell-embedded agarose was further embedded in epoxy resin, and semi- and ultrathin sections were examined conventionally. For SEM, the agarose was freeze-fractured in 50% dimethyl sulfoxide, processed for osmium maceration and observed in a high-resolution SEM. Low-melting-point agarose was useful as an embedding medium for SEM, because it was well preserved during prolonged osmication for SEM. Thus, the fine structure of cell organelles was clearly analyzed by SEM after osmium-maceration treatment. These SEM images could also be compared with those of LM and TEM of the agarose-embedded tissues.     

纳米TiO2光催化杀灭大肠杆菌的超微结构研究

在近紫外光的照射下，纳米TiO2具有较强的光催化灭茵效果。用透射电子显微镜较完整地研究纳米TiO2光催化杀灭大肠杆菌的超微结构变化。结果表明，纳米TiO2可直接或间接作用于大肠杆菌；光催化过程中产生的氢氧自由基等活性氧类物质可导致大肠杆菌的外壁和质膜严重破损、断裂；胞浆流出；细胞质凝聚；类核区解体和丝状染色质消失。本研究为探讨纳米TiO2光催化灭茵机理提供了直观的证据。