Latrunculin B处理后青杆花粉管微丝骨架和细胞超微结构的观察

本文应用荧光探针标记技术和透射电子显微镜研究微丝抑制剂（latrunculin b,LATB）处理青秆花粉管后,对其微丝骨架和超微结构的影响。结果表明：LATB剂量依赖性地抑制青秆花粉萌发和花粉管生长;应用荧光探针FITC-鬼笔环肽标记花粉管中的微丝,发现用正常培养基培养的花粉管中,柬状的F—actin以与花粉管长轴平行的方向排列,从花粉管基部一直延伸到花粉管亚顶端,而LATB处理导致微丝的解聚。通过透射电镜观察发现。LATB处理使花粉管顶端的透明区消失,顸端区域被一些空泡、脂粒等占据,线粒体膜破裂,高尔基体片层断裂成泡状结构以至解体。上述研究结果表明：微丝抑制剂LATB通过破坏花粉管微丝的组装和超微结构影响青秆花粉萌发及花粉管生长,因此微丝在青扦花粉萌发、花粉管极性生长模式的建立和维持过程中起重要作用。     

Latrunculin B处理后青杄花粉管微丝骨架和细胞超微结构的观察

本文应用荧光探针标记技术和透射电子显微镜研究微丝抑制刺(latrunculin b,LATB)处理青杄花粉管后,对其微丝骨架和超微结构的影响.结果表明:LATB剂量依赖性地抑制青杄花粉萌发和花粉管生长;应用荧光探针FTTC-鬼笔环肽标记花粉管中的微丝,发现用正常培养基培养的花粉管中,束状的F-actin以与花粉管长轴平行的方向排列,从花粉管基部一直延伸到花粉管亚顶端,而LATB处理导致微丝的解聚.通过透射电镜观察发现,LATB处理使花粉管顶端的透明区消失,顶端区域被一些空泡、脂粒等占据,线粒体膜破裂,高尔基体片层断裂成泡状结构以至解体.上述研究结果表明:微丝抑制荆LATB通过破坏花粉管微丝的组装和超微结构影响青秆花粉萌发及花粉管生长,因此微丝在青秆花粉萌发、花粉管极性生长模式的建立和维持过程中起重要作用.     

利用快速共聚焦显微镜观察花粉管中线粒体的分布及其动态变化

线粒体是真核细胞中高度动态变化的一种细胞器。但目前有关植物细胞,尤其是花粉管中线粒体的分布及其动态变化的信息还比较少。本文应用Zeiss 5 live快速共聚焦显微镜结合线粒体荧光探针Mitotracker Green对百合花粉管中线粒体的分布及其动态变化进行了观察和测定。结果显示,正常培养的百合花粉管中线粒体呈倒喷泉式移动,即花粉管基部的线粒体移动到亚顶端后即发生回流,因此花粉管顶端锥形区域内很少观察到线粒体的存在。对单个线粒体进行跟踪分析结果表明花粉管中的线粒体分为快速运动和锚定状态两种。快速移动的线粒体在花粉管两侧质膜下及花粉管中央沿着与花粉管长轴平行的方向运动,在花粉管亚顶端则沿着一定曲线移动;锚定在细胞质中的线粒体则随着胞质环流而被动移动。低浓度的微丝骨架抑制剂Jas处理时间依赖性地引起花粉管亚顶端的线粒体逐渐前移,并最终充满整个花粉管顶端,同时花粉管中快速移动线粒体的比例逐渐减少。上述结果表明,花粉管中的线粒体主要沿着微丝骨架进行快速移动,而花粉管亚顶端精细微丝组成的领区(Collar)在花粉管线粒体的分布和动态变化中起重要作用。     

小细胞恶性间皮瘤的超微结构观察

应用电镜观察小细胞恶性间皮瘤的超微结构特点,对5例福尔马林固定后、经光镜及免疫组化检查过的胸膜及腹膜肿瘤标本进行常规电镜标本制备及电镜观察。超微观察显示肿瘤细胞呈小圆形及小梭形。5例均见腺腔样结构、细长微绒毛、紧密连接及发育良好的桥粒。较长的微绒毛长度与直径之比为13：1。见不连续基板（2例）、胞质内张力丝（2例）及微丝（4例）,2例同时见核旁分布的球形微丝小体。结论：细长微绒毛是包括低分化小细胞恶性问皮瘤在内的恶性间皮瘤的特征性超微结构。电镜观察对确定小细胞恶性问皮瘤的病理诊断及鉴别诊断有帮助。     

优化大鼠肺动脉平滑肌细胞骨架F-actin图像的激光共聚焦显微技术

目的:优化大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)骨架蛋白F-actin图像的激光共聚焦显微技术.方法:采用不同浓度梯度的荧光染料及不同孵育条件,应用激光共聚焦显微扫描技术对PASMCs细胞骨架F-actin进行形态学现察.结果:终浓度10 mg/mL FITC-鬼笔环肽及10 mg/mL PI,分别染色30 min,并经...     

'秦冠'苹果花粉培养及微丝骨架的变化

以'秦冠'苹果花粉为试材,采用花粉离体培养法,研究了不同培养基组分以及温度对苹果花粉萌发的影响.结果表明:(1)蔗糖和硼酸在一定质量浓度范围内,对苹果花粉萌发及花粉管生长起促进作用,但超过一定质量浓度时则起抑制作用.秦冠苹果花粉最适的培养基为20%蔗糖和0.01%硼酸,花粉的萌发率可以达到60%.在此基础上,以Alexa Fluor 488phalloidin作为肌动蛋白微丝的探针,运用激光共聚焦显微镜技术,观察了苹果花粉萌发过程中微丝骨架的分布变化动态;(2)在未水合的苹果花粉粒中,均匀分布着短小弯曲、颗粒环形微丝.在水合而未萌发的的花粉中,微丝呈网状分布在胞质中,萌发沟部分肌动蛋白束网络较致密,中央胞质部分较疏松.花粉萌发后,微丝转变为平行排列,向花粉管伸长的方向延伸聚集,与花粉管纵向平行排列;(3)生长异常的花粉管内其微丝状态也异常.     

适合光镜和电镜诊断肾小球疾病的固定剂选择

目的：为了使已经石蜡包埋的肾穿组织脱蜡后进行电镜观察,关键是选择适当的固定剂。方法：在石蜡包埋前,肾穿组织分别用甲醛、戊二醛及戊二醛、锇酸双固定。根据光镜和电镜观察结果,选择能兼顾光镜和电镜的固定剂。结果：甲醛固定不能有效保存肾穿组织的超微结构,锇酸的固定能有效地保存超微结构,但严重影响了光镜切片的染色;而戊二醛与甲醛相比,较好地保存了肾穿组织的超微结构,同时又不影响光镜切片的染色。结论：在石蜡包     

用高压电镜与立体视镜观察整装细胞内病毒与细胞骨架的关系

以前,我们曾发现牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)可诱导大量对松胞素B不敏感的微丝,而且病毒的释放与微丝结构有某种关系。在此基础上,我们用整装电镜技术对细胞骨架与成熟病毒的关系做了进一步地探讨。将牛肾次代细胞培养在敷有方华膜和鼠尾胶膜的金网或镍网上,接种病毒24小时后,在室温下用戊二醛和锇酸固定细胞,并用醋酸双氧铀染色1小时,再经脱水和临界点干燥后,于日本JEM—200CX电镜下观察,加速电压200KV,同一视野以8度之差,拍摄二张照片,用于立体视镜观察。正常牛肾细胞的边缘,细胞质膜完整,骨架系统层次分明,线粒体等细胞固定在细胞骨架网络上。在IBRV感染的细胞中,细胞骨架发生了明显的变化,其层次减少,微丝束增多,分布似乎更有方向性。许多区域细胞质     

网状纤维电镜银染色方法的探讨

网状纤维电镜银染色方法的探讨刘冬娟，徐彦平，郭玉坤石岩（中国医科大学第二电镜中心，沈阳１１０００１）（解放军第二０二医院，沈阳）网状纤维是结缔组织中的一种重要成分，用常规透射电镜制样方法显示网状纤维不够理想，作者对常规戊二醛固定含有网状纤维的标本，进...     

血小板冷冻保存后形态学观察

将30名健康献血者用单采血浆术和人工离心方法,提取血小板悬液,加入DMSO,配制成4％的血小板悬液,将样品分别置于-80℃,-30℃冰箱冷冻保存。用前,再用42℃融化。复温后血小板制成电镜超薄切片样品作超微结构形态学观察,并用光学显微镜进行血小板计数。电镜下,-80℃保存24天的血小板外形规整,为盘形,膜完整,可见微丝、微管、糖原颗粒,线粒体等,致密颗粒和α颗粒丰富,开放管道系统和致密管道系统也清晰可见(图1—3)。-30℃保存24天的血小板外形不规整,可见伪足和凹陷,开放管道系统和致密管道系统扩     

温度对制备超薄切片的影响

保存生物样品的生活状态和制备出完整而清晰的超微结构，是保证电镜观察效果的前提，而近几年的样品制备中，同批样品常伴有结构模糊、反差弱的现象发生，究其原因，只有前固定不是本实验室所为，是否与固定温度有关，香港大学徐是雄博士认为：过低温度会造成细胞内微管的消失。但传统的固定温度是0℃～4℃，有关动、植物样品的常规固定最佳温度及如何利用冰箱固定保存样品，-18℃冷藏样品怎样处理才能得到接近生活状态的超微结构，到目前为止，研究报道的甚少。本文仅就作者多年来，常规制样中发现的值得同仁注意的现象设计了不同的实验方案，探讨温度在样品制备中的作用，以增加优质超薄切片高重复率。     

肾穿组织远程邮寄超微结构病理检验

为了更好地普及肾穿组织超微结构病理检验 ,我们研制和利用肾穿组织电镜固定邮寄盒收集院外标本 ,自 1998.11～ 1999.6间共接收 12 1例进行常规电镜制样和观察。结果显示电镜固定邮寄盒完全达到了前固定组织的目的 ,电子致密物、基底膜、系膜及各种细胞的细胞核以及细胞质的大部分结构保存良好 ;邮寄盒均无渗漏及变形 ,大小符合普通信件邮寄标准 ,使用方便 ,无需低温送检。     

肾穿组织远程迪寄超微结构病理检验

为了更好地普及肾穿组织超微结构病理检验,我们研制和利用肾穿组织电镜固定邮寄盒收集院外标本,自１９９８．１１～１９９９．６间共接收１２１例进行常规电镜制样和观察。结果显示电镜固定邮寄盒完全达到了前固定组织的目的,电子致密物、基底膜、系膜及各种细胞的细胞核以及细胞质的大部分结构保存良好;邮寄盒均无渗漏及变形,大小符合普通信件邮寄标准,使用方便,无需低温送检。     

微波技术在诊断电镜标本制备中的应用

电镜作为某些疾病的病理检查手段 ,已为广大医务工作者所熟知。但电镜样品的常规制备方法周期较长 ,影响及时诊断。近年来 ,我们将微波照射作为常规技术应用于电镜标本制备 ,进行了大量的工作。结果表明 ,该方法不仅大大缩短了样品制备时间 ,而且用这种方法制备的样品的超微结构完全可以满足电镜诊断要求 ,现已成为本室诊断样品的常规技术。材　　料选用 National NN- 6 80型微波炉 ,分 HI,DEF,MEDHI,MED档 ,样品包括各种肿瘤组织 ,肝 ,肾 ,肺 ,软骨 ,及游离细胞 (血细胞 ,培养细胞 )。1 .标本固定固定液用 4%多聚甲醛 ,或 3%戊二醛 …     

显示弹性纤维系统的一种鞣酸细胞化学染色方法

弹性纤维是结缔组织中的一种重要成分。弹性纤维系统包括三种不同类型的纤维,分别称为弹性纤维、前弹性纤维及耐酸纤维。用常规透射电镜制备方法只能显示弹性纤维,而且其电子密度及反差均不够理想。如在电镜标本的制备过程中,加入鞣酸则能很好地显示弹性纤维的两种成分及三型纤维。鞣酸加入戊二醛固定液或鞣酸加入醋酸铀染色液的方法,均已有过报道,作者对常规固定的标本,在染色前用鞣酸处理,获得良好的效果,现介绍如下。     

植物材料干燥法比较及其在分类中的意义

应用扫描电镜观察植物材料的微形态特征是植物分类学研究中的主要手段。 植物叶片微形态特征保存的好坏,与其所用的干燥方法有密切关系;同时,微形态特征在植物分类运用中也是至关重要的。本实验采用六甲基二硅胺烷干燥法,单固定（戊二醛）微波辐射临界点干燥法,单固定（戊二醛）临界点干燥法及双固定（戊二醛、我酸）临界点干燥法,对数十种植物叶片进行了干燥处理并用扫描电镜对其观察比较。经多次试验结果表明：单固定（戊二     

一种简单方便的生物组织导电法

用扫描电镜观察的样品要求表面能导电,惯用的方法是在样品表面蒸涂导电层,对于表面起伏大而又容易变形的生物样品,这种方法效果不太好。近年来采用组织导电技术处理生物样品取得了比较好的效果,但一般对镜体污染大增加了仪器维护的麻烦。我们使用多种导电液处理样品在S—100电镜上面进行比较,觉得用四氯化锡导电液处理方法简单对镜体污染小。方法如下:把待观察样品按常规固定后保存在70％酒精中,把SnCl_4放入75％的酒精溶液中配制成5％的酒精四氯化锡导电液。把保存在酒精中的样品捞放入导电液中适当浸泡取出胶合即可观察。如果经过乙腈干燥后再     

电镜技术中植物材料的野外取样方法

在使用电镜技术解决农、林生产实践问题的工作中,经常需要野外取样。对于野外取植物样品的方法,多数使用挖取植株或割取器官,保持湿润,运输到实验室后按常规技术操作。这种方法的缺点是运输不方便,而且在运输中改变了植物的生理条件,对于病理学的研究是不适宜的。南京大学1980年提出用戊二醛作为电镜标本保存液的报告。目前这一方法得到较广泛的采用。实验表明,这一方法是可行的。但是过长的保存也会出现髓磷脂像和类脂块等现象。在使用戊二醛作电镜标本保存液这一方法的基础上,我们总结了一套野外取样方法。应用这一方法取得了很好的试验效果。本文仅以泡桐丛枝病研究为例叙述这一方法。     

青杄花粉管生长过程中囊泡运输与Ca~（2＋）分布的细胞学研究

应用激光扫描共聚焦显微镜技术,研究并同时定位了Ca2＋及分泌囊泡在青杄花粉管内的空间分布模式与对应关系。利用钙离子特异性荧光探针Fluo-3及分泌囊泡动态变化的指示性染料FM4-64对正在生长的花粉管进行的双重标记显示,青杄花粉管细胞质内Ca2＋从距顶端40～50μm处呈现典型梯度分布,花粉管顶端浓度最高;FM4-64荧光染料主要分布在花粉管质膜周围及花粉管顶端大约15～20μm的地方,而亚顶端区荧光较弱;在正在改变生长方向的花粉管中,FM4-64荧光主要集中在弯曲部位。对二者及与Rop GTPases在花粉管内的空间分布及与功能的关系进行了讨论。     

应用酪氨酸羟化酶抗体的免疫电镜技术

免疫电子显微镜技术是近二十年发展起来的一种新技术。应用免疫电镜可以进一步揭示亚细胞水平神经组织的超微结构和化学递质之间的形态学关系。免疫电子显微术与常规的电镜制样技术不同,尤其在胚胎样品制备过程中,不仅要考虑到样品应具有较好的超微结构,同时也要考虑到组织切片中抗原活性的保存,要获得比较理想的标本,需根据自己实验要求,摸索出自己最理想的步骤和参数。我们采用了4％多聚甲醛和1％戊二醛磷酸缓冲液,再用单体多聚甲醛固定液的顺序灌流方法,以及在免疫反应中未加清洁剂的措施,有效地兼顾了免疫反应产物和组织保存两方面。