温锇酸的固定

在生物标本制备中,一般都强调固定的温度必须在4°—0℃之间。由于温度低,可以减少细胞物质的抽提。因此,目前不论何种生物标本大多数都是低温下固定。由于温度降低,固定剂渗透的速度和深度以及固定剂与细胞物质的相互作用也相应的降低了,为了克服这个缺点,必须延长固定的时间。固定的温度能否升高呢?事实上,只要时间控制在一定的范围内,在常温下细胞物质的抽提并不严重影响细胞的超微结构。相反可以改善细胞的固定质量,提高细胞结构的清晰度和对比度。我们用小白鼠肝、肾和肠等组织分成两组:甲组用磷酸缓冲的5 ％戊二醛和1％O、O_4在0—4℃下双固定,     

生物样品的冷冻超薄切片术

当生物材料在样品制备过程中需减少化学固定剂对样品中蛋白活性的影响或减少可溶性元素流失时,可采用快速冷冻固定法和冷冻超薄切片。切片在含水状态下或经冷冻干燥后,用电镜观察,这样既能显示生物细胞在体内的形态,又使细胞内各种活性得以保存,是一种值得推广的电镜技术。我们采用新鲜活组织快速冷冻固定和冷冻超薄切片,经冷冻干燥后在透射电镜下对亚细胞结构进行形态观察和微小区域内的元素定性、定量分析,本文总结了初步结果和经验。     

高压冷冻及冷冻替代技术在不同生物样品超微结构中的应用

高压冷冻仪在固定样品时,高压和冷冻基本是同步发生的,使得生物样品在数毫秒的时间内被瞬时固定,保证其内部结构接近于生理状态,有效减少了化学固定法中的化学试剂对细胞结构的破坏,极大程度保存了细胞在近似自然状态下的超微结构。本文分别采用化学固定法(CF)和高压冷冻固定法(HPF)对小鼠的睾丸组织、Hela细胞和酵母进行了样品制备,旨在比较这两种方法对不同生物样品超微结构的影响,促进高压冷冻-冷冻替代(HPF-FS)技术在生物学中的应用。透射电镜(TEM)观察结果显示:与传统的化学固定相比,高压冷冻固定可以清晰、完整地保存生物样品的膜结构和亚细胞器结构,细胞形态更加接近自然。     

高压冷冻及冷冻替代样品制备方法在体扫描电镜中的应用

高压冷冻及冷冻替代技术是一种利用高压和低温对含水组织样品进行瞬间冷冻固定和低温脱水的电镜样品制备技术,它因可以保存更加真实的细胞超微结构而常应用于透射电镜观察和分析。本文利用模式动物小鼠为材料,将这种技术应用于体扫描电镜的样品制备,并与常规化学固定的样品制备进行比较。结果显示在小鼠心肌组织中,高压冷冻及冷冻替代技术可以有效避免常规制备样品中的细胞器膜结构皱缩、细胞质分布不均匀、细胞核膜收缩形成锯齿状、甚至局部断裂等现象,使细胞超微结构更接近其生活时的状态。     

感染番茄斑萎病毒和番茄环纹斑点病毒的植物叶片细胞病理变化观察

应用透射电子显微镜观察比较了番茄斑萎病毒（ TSWV）和番茄环纹斑点病毒（ TZSV）感病植物叶片的细胞超微结构,发现两种病毒在病变细胞内的形态及细胞病理变化特征相似,但病毒含量及细胞受损程度存在明显差异。与TSWV相比,TZSV侵染细胞的病变程度更为严重,叶绿体产生大的囊泡,片层结构被破坏,线粒体也发生囊泡化,而TSWV侵染的细胞内线粒体保存相对完好。高压冷冻－冷冻置换制备的样品细胞病理结构与常规化学固定的相似,但对膜结构的保存更加良好。该结果从细胞病理学上证明了TZSV在田间对农作物造成的危害更加严重。     

高压冷冻技术及其在植物细胞超微结构中的应用

冷冻固定技术可以将生物组织和细胞内所有结构和成分同时固定。因此避免了因化学渗透固定而引起的各种假象。通常,在常压下冷冻技术仅能使生物样品表面１０～３０μｍ厚度得以充分固定,而高压冷冻技术则能使样品有效固定厚度增加至６００μｍ。尽管植物组织细胞具有特殊的结构－厚壁和含大量水分的液泡,使冷冻固定较为困难,但利用高冷冻技术仍能使２００μｍ厚度的样品得到充分固定,而且能够捕获近似自然状态的细胞超微结构。本     

应用酪氨酸羟化酶抗体的免疫电镜技术

免疫电子显微镜技术是近二十年发展起来的一种新技术。应用免疫电镜可以进一步揭示亚细胞水平神经组织的超微结构和化学递质之间的形态学关系。免疫电子显微术与常规的电镜制样技术不同,尤其在胚胎样品制备过程中,不仅要考虑到样品应具有较好的超微结构,同时也要考虑到组织切片中抗原活性的保存,要获得比较理想的标本,需根据自己实验要求,摸索出自己最理想的步骤和参数。我们采用了4％多聚甲醛和1％戊二醛磷酸缓冲液,再用单体多聚甲醛固定液的顺序灌流方法,以及在免疫反应中未加清洁剂的措施,有效地兼顾了免疫反应产物和组织保存两方面。     

免疫电子显微技术载网处理方法

本文介绍免疫电子显微技术中载网的清洁处理以及与载网相关因素对免疫标记效果的影响。在免疫电子显微技术中 ,能否获得低背底高特异性标记结果 ,其影响因素较多。如在生物样品制备时 ,既要考虑不使组织细胞内抗原受损 ,又要使细胞超微结构保存良好。因此 ,样品制备过程中应合理选择固定液种类及浓度、包埋剂类型及包埋方式。在免疫细胞化学标记实验中 ,高特异性抗体以及抗体的稀释度、温育的温度和时间也是关键。但对载网处理的重要性容易忽视 ,因载网不洁净而导致非特异性高背底标记或切片脱落现象屡屡发生。为此 ,对载网进行彻底的去污处…     

生物标本的微波固定

微波固定是以2450MHz的微波照射浸泡在化学固定液中的标本,使固定液和标本在微波场中均匀加热、温度均匀上升。在微波场和化学固定剂的协同作用下,使组织在10秒左右的短暂时间内获得均匀优秀固定。将昆明小鼠断椎处死后打开腹腔,取出肝和肾并切成边长1毫米立方小块。除一组标本按常规的化学固定方法处理作对照外,其余标本分别放人盛有3毫升下列溶液的小玻璃瓶中,每组2只标本。实验组共分6组:第一组溶液为0.1M磷酸浸冲液(pH7.3),微波照射10秒钟;第二组到第六组溶液均为3％戊二醛(0.1M磷酸缓冲液,pH7.3)。它们之间区别是第二、三和四组微波照射时间分别为5、10和15     

微波辐射对细胞膜通透性的影响

本实验通过电镜镧细胞化学方法，观察了微波辐射对生物样品细胞膜通透性的影响。在常规化学固定的情况下，镧颗粒沿细胞间隙密集分布而不能进入细胞内。生物样品经微波辐射后，在细胞内甚至在线粒体等细胞器内可观察到较多的镧颗粒。提示：微波辐射使生物膜的通透性发生了改变。