野大麦盐胁迫rbcS基因的克隆及序列分析

[目的]对野大麦盐胁迫rbcS基因进行克隆及序列分析.[方法]以盐胁迫下的野大麦幼嫩叶片为试材,根据GenBank中小麦和大麦rbcS基因核酸序列的同源性设计引物,对野大麦基因组DNA进行PCR扩增、回收、连接、转化及测序.[结果]在野大麦的基因组中克隆了2个大小不同的rbcS基因序列rbcS1和rbcS2,长度分别为1 252和908 bp.rbcS1和rbcS2均由2个外显子和1个内含子组成,外显子长度相等,编码序列为525 bp,同源性为96%,编码174个氨基酸;rbcS1和rbcS2内含子大小不同,分别为448 和107 bp.[结论]为进一步探讨rbcS基因在野大麦耐盐机制中的分子机制奠定了基础.     

宁夏六盘山区黄牛杂交改良群体GHR基因多态性分析

[目的]对宁夏六盘山区黄牛杂交改良群体生长激素受体(GHR)基因的多态性进行分析,为宁夏黄牛杂交改良选育提供理论参考.[方法]采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)对该群体70个个体的GHR基因多态性进行检测.[结果]扩增出了338 bp的目的片段,PCR产物被限制性内切酶Alu I消化后表现出多态性,其中AA基因型频率为75.71%;BB基因型频率为24.29%.[结论]共检测到AA和BB 2种基因型,六盘山区黄牛杂交改良群体GHR基因具有多态性.     

番茄抗花叶病毒基因类似序列扩增研究

[目的]研究番茄抗花叶病毒基因类似序列扩增.[方法]以选育和生产上广泛使用的20个番茄品种为试材,对其进行了田间和实验室抗花叶病毒病(ToMV)筛选、基因类似序列扩增、RAPD聚类分析及特异引物PCR扩增.[结果]美味樱桃番茄、中杂9号、旱红宝、W2624、OH-2-2-11、黄圣果和美国番茄对ToMV具有较强的抗性;根据聚类分析,受试品种可分为3类,从中选出9个抗性和非抗性品种进行抗ToMV,基因类似序列分析,其中非抗性和购买无抗性番茄品种未扩增出任何谱带,而抗性品种扩增出约300 bp的谱带,初步认为该谱带为抗ToMV类似序列基因.[结论]为培育抗花叶病毒病的番茄品种提供了理论依据.     

甜菜夜蛾核多角体病毒Se29基因的克隆与序列分析

[目的]克隆得到甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua muhicapsid nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)ORF29全长基因(Se29).[方法]用PCR的方法扩增Se29基因,将其克隆至pMD18-T载体上,获得了重组质粒T-Se29,进行序列测定和分析.[结果]获得大小为642 bp左右的序列.扩增序列与GenBank登录序列(Genbank accession No.NC_002169)核苷酸同源性100%.序列分析结果表明,Se29基因编码蛋白(SE29)存在一个可能的跨膜区域,有多个蛋白激酶C、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和N-糖基化位点,1个微体C末端靶信号位点.蛋白序列比对结果表明,SE29与棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(Helicoverpa armigera single nueleocapsid nucleopolyhedrovir-as,HaSNPV)ORF128(Ha128)的编码蛋白(HA128)具有较高的同源性,其在病毒侵染过程中的作用值得关注.[结论]成功克隆出Se29基因,为研究其在病毒侵染过程中的作用奠定了试验基础.     

鸡催乳素受体基因的多态性分析

[目的] 研究PRLR基因对鸡就巢和产蛋性状的影响.[方法] 设计10对引物,采用PCR-SSCP方法,扩增了旧院黑鸡、固始鸡、山地乌骨鸡以及新扬州鸡PRLR基因部分外显子及邻近内含子序列.[结果] 检测到4个多态位点,分别为外显子3处的SNP1(A10862G,位于5'-UTR)、外显子6处的SNP2(A25670G,为同义突变)、内含子8处的SNP3(G30716A)以及外显子10处的SNP4(A31900G).卡方独立性检验结果发现,4个多态位点不同基因型在4个群体间的分布差异极显著(P<0.01). [结论] PRLR基因可能是影响鸡就巢和产蛋性状的一个主效基因.     

线粒体ND5·Cytb部分序列在虎物种鉴定中的应用

[目的]根据线粒体ND5、Cytb基因部分序列,对送检的4件疑似虎的样品进行物种鉴定.[方法]利用PCR法,扩增样品的线粒体ND5、Cytb基因部分序列,对目的片段测序,通过blast比对,确定物种.[结果]4个样品的物种来源均为虎,但无法确认其亚种.[结论]虎亚种问的线粒体差异很小,并且存在不同亚种杂交的情况,只根据线粒体基因难以进行亚种鉴定.     

薯蓣皂苷糖苷酶基因的克隆及同源性分析

[目的]从分子生物学水平上研究Absidia sp.G3d产薯蓣皂苷糖苷酶,对该酶基因CDS区的序列进行调取和分析.[方法]根据薯蓣皂苷糖苷酶的N端序列设计简并引物,以总RNA为模板进行RT-PCR调取cDNA,然后采用3RACE和5RACE技术,调取CDS区基因全序列.[结果]测序得到序列长度为1 497 bp.该基因的同源性比较分析表明,薯蓣皂苷糖苷酶基因与α-鼠李糖苷酶没有同源性,与α-淀粉酶的基因序列具有很高的同源性,达到93%以上.[结论]蛋白质结构存在差异,酶反应特性不同.     

11个冬小麦品种(品系)抗旱性与产量性状研究

[目的]选育出适于河北省及北方冬小麦区域种植的优良小麦品种.[方法]以11个冬小麦品种(品系)为试材,对11个冬小麦品种(品系)进行不同区域多点抗旱性鉴定和产量性状分析,研究不同小麦品种(品系)的抗旱性、丰产性和稳产性,以及三者之间的关系.[结果]11个冬小麦品种(品系)中同时兼具抗旱、丰产和稳产的品种(品系)为中麦12、沧麦6002和沧麦6003,临旱536具有很好的抗旱性和稳产性,邯郸00-4015具有很强的抗旱性,稳产性较差.[结论]该研究为北方区域选育抗旱、高产、稳产小麦品种提供理论参考和科学依据.     

黄粉虫酪氨酸羟化酶基因的克隆与序列分析

[目的]克隆鞘翅目昆虫黄粉酷氨酸羟化酶(TmTH)基因.[方法]采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术和PCR方法克隆了鞘翅目昆虫黄粉虫TmTH基因,并对其进行了生物信息学分析、[结果]TmTH cDNA全长2103bp,包含1605bp的开放式阅读框,可编码534个氨基酸残基,蛋白质分子量为60.66kD,等电点为5.70,构建了其系统进化树.[结论]TmTH基因的克隆为鞘翅目昆虫酪氨酸羟化酶的研究提供了参考.     

新疆阿拉尔垦区猪嗜血支原体PCR检测方法的建立

[目的]掌握阿拉尔垦区猪嗜血支原体的流行现状.[方法]根据GenBank上发表的猪嗜血支原体16S rRNA基因组序列(U88565)设计1对特异性引物,对采自新疆阿拉尔垦区的样品进行PCR扩增,并将其产物克隆到pBR322载体后测序.[结果]扩增出的片段为0.836 kb.同源性分析结果表明,该序列与猪嗜血支原体参考基因组序列同源性为99.47%,反映出我国分离株与国外株基因同源性较高.[结论]建立了一种猪嗜血支原体PCR检测方法,该方法为猪嗜血支原体病的快速诊断及流行病学调查提供了新的手段,并为相关基因的表达及功能研究奠定了基础.