霍乱病毒B亚单位作为基因佐剂对单纯疱疹病毒2型DNA疫苗免疫效果的影响

目的研究霍乱病毒B亚单位(cholera toxin subunit B,CTB)作为基因佐剂对单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)DNA疫苗pg D免疫效果的影响。方法将CTB片段克隆至真核表达质粒pc DNA3Kan(p Kan)中,构建基因佐剂pc DNA3Kan-CTB(p CTB)。将BALB/c小鼠随机分为p CTB无疫苗组、pg D/p CTB佐剂组、pg D/p Kan空载体组及PBS对照组,经后腿肌肉多点注射,共免疫3次,每次间隔2周。于末次免疫2周后,经小鼠眼球采血,分离血清,ELISA法检测HSV-2特异性Ig G水平及Ig G1、Ig G2a亚型抗体滴度;制备小鼠脾细胞,MTS法检测小鼠脾脏T细胞增殖能力;将病毒稀释后经腹腔接种小鼠,于免疫2周后,进行HSV-2致死剂量攻毒试验。结果p CTB经双酶切及测序鉴定证明构建正确;pg D/p CTB佐剂组小鼠血清中HSV-2特异性Ig G水平明显高于其他3组(P0.001),Ig G1和Ig G2a滴度均明显高于pg D/p Kan空载体组(P0.001),其中Ig G2a增幅更明显,Ig G2a/Ig G1比值与pg D/p Kan空载体组相比,由(1.176±0.11)增加至(1.316±0.07)(P0.05);pg D/p CTB佐剂组小鼠脾细胞在HSV-2刺激下诱导的特异性T细胞增殖反应明显强于PBS对照组及pg D/p Kan空载体组(P0.05);攻毒14 d内,pg D/p CTB佐剂组小鼠存活率高达100%。结论 p CTB作为基因佐剂能够显著提高pg D诱导小鼠产生抗原特异性Ig G抗体水平,增强HSV-2特异性T细胞增殖反应,并介导以细胞免疫为主的Th1/Th2混合型免疫反应。     

1型单纯疱疹病毒经不同途径感染小鼠建立病理模型的比较分析

目的比较分析1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1,HSV-1)经不同途径感染小鼠所建立的病理模型。方法将成年鼠分别经眼角膜、牙龈、鼻黏膜、皮下及尾静脉感染HSV-1,50μl/只,临床观察60 d,感染后第3和6天,取脑组织及脊髓,进行组织病理学观察,并检测病毒载量。将乳鼠经脑内和后肢注射感染HSV-1,10~7 CCID_(50)/(ml·g),临床观察2周,感染后第3天,取脑及后肢肌肉组织,进行组织病理学观察,并检测病毒载量。结果鼻黏膜组成年鼠感染20 d后,面部皮肤溃烂,眼角膜组感染47 d后,眼部出现红肿、充血;除尾静脉组和牙龈组外,其他组小鼠体重均呈升高趋势;未出现死亡情况。各组成年鼠脑组织和脊髓中均出现出血及炎性细胞浸润,感染后第3天脑中病毒载量最高。1、3、7日龄乳鼠经脑及后肢注射后均出现后肢麻痹症状,经脑部注射后死亡率分别为100%、100%和91.7%,经后肢注射后死亡率分别为90.9%、78.5%和72.7%。病毒感染后第3天,各组乳鼠均出现脑出血、血管袖套及少量炎性细胞浸润,个别乳鼠脑部见针迹灶;后腿肌肉仅见少量炎性细胞浸润现象,大脑和后腿肌肉组织中的病毒滴度为3.5~4.5 1og10CCID50/100 mg。结论乳鼠对HSV-1普遍易感,且病理损伤与成年鼠相似,本研究建立的乳鼠模型可用于疫苗株或减毒株的筛选和评价,为HSV-1疫苗的研发奠定了基础。     

登革病毒感染C6/36、Vero、BHK-21和THP-1细胞CPE的比较及病毒检测

目的比较感染登革病毒(dengue virus,DV)的C6/36、Vero、BHK-21和THP-1细胞的CPE情况,并进行病毒检测。方法将分离自云南西双版纳的Ⅲ型DV中国株D13053和广东省疾病预防控制中心惠赠的Ⅱ型中国株D10156,以5 MOI感染C6/36、Vero、BHK-21和THP-1细胞,同时将Vero和C6/36细胞来源的DV,分别以5 MOI感染C6/36细胞,连续观察CPE至第10天,并利用DV通用引物,RT-PCR法鉴定细胞培养上清中的病毒。结果C6/36细胞对DV最敏感并有明显的病变,细胞几乎100%聚集、破碎并呈网格状;Vero、BHK-21细胞至第5天出现脱落、破碎和悬浮等病变,对DV有一定的敏感性;THP-1细胞至第10天未出现CPE。PCR核酸检测发现,感染DV的C6/36、THP-1、BHK和Vero细胞培养上清中可检测到DV,而Vero细胞来源DV感染的C6/36细胞未检测到DV。结论 DV对不同细胞系的感染能力和感染DV后CPE的表现形式存在较大差异。     

1型单纯疱疹病毒疫苗的研究进展

1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1,HSV-1)感染可导致口唇疱疹、生殖器疱疹、脑炎等症状,并可长期潜伏于神经系统。目前尚无干预手段能有效预防疱疹病毒原发感染以及控制疱疹病毒潜伏感染和复发性感染。疫苗依然被认为是控制病毒感染的理想方式。本文就HSV-1疫苗的研究进展作一综述。     

单纯疱疹病毒Ⅰ型基因突变株M3株与水痘带状疱疹病毒减毒活疫苗Oka株感染小鼠的生物学特性比较

目的比较单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpes simplex virus typeⅠ,HSV-Ⅰ)基因突变株M3株与水痘带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)减毒活疫苗Oka株感染BALB/c小鼠的生物学特性。方法用不同剂量(103、104、105 PFU/只)的HSV-ⅠM3株及疫苗剂量的VZV Oka株以不同方式(腹腔、肌肉、鼻腔、足垫)感染小鼠后,对小鼠的急性临床反应、体重变化、病毒增殖、组织病理损伤及病毒重激活等生物学特性进行比较。结果 HSV-ⅠM3及VZV Oka组小鼠均未见弓背、倒毛、单侧眼失明等急性临床症状,体重均呈逐渐上升趋势;器官组织中病毒拷贝数均处于较低水平,且两组差异无统计学意义(P> 0. 05);小鼠脑组织出现轻微局部炎症细胞浸润、出血、胶质小结或无异常,两组差异较小,脊髓组织均未出现明显异常;神经组织与Vero细胞共培养,均未观察到细胞病变(CPE)。结论 HSV-ⅠM3株与VZV Oka株感染小鼠后的生物学特征无明显差异。     

Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D在CHO细胞中的表达及其免疫学特性

目的在CHO细胞中表达Ⅱ型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus-2,HSV-2)糖蛋白D(Glycoprotein D,gD),并检测其免疫学特性。方法采用Vero细胞培养HSV-2,提取总DNA,以其为模板,PCR扩增gD基因,与pCMV-sport载体连接,构建重组表达质粒pCMV-gD,将质粒pCMV-gD转染COS-7和CHO-K1细胞,并进行表达。亲和胶Anti-flag M2 Agarose纯化表达蛋白,经SDS-PAGE和HPLC分析重组蛋白纯度,Western blot分析蛋白反应原性,全波长扫描分析蛋白的光谱曲线,等电聚焦电泳测定蛋白的等电点。以20、40μg纯化的gD免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠血清中HSV-2 gD特异性抗体水平,中和试验测定小鼠血清中和抗体水平。结果酶切鉴定及DNA测序表明,重组表达质粒pCMV-gD构建正确,在COS-7细胞的瞬时表达产物和CHO细胞中的稳定表达产物均可被HSV-2 gD单抗特异性识别,表明该蛋白具有较好的反应原性。纯化的gD在相对分子质量约5 500处可见目的蛋白条带,纯度为65.46%;保留天然HSV-2 gD的反应原性,最适紫外吸收波长为275.50 nm,等电点为8.3。gD 20μg组和40μg组小鼠血清特异性抗体滴度分别为1∶125 000和1∶16 000,中和抗体滴度分别为1∶17和1∶16,表明gD可诱导中和抗体的产生,也可诱导高滴度的HSV-2gD特异性抗体。结论成功在CHO细胞中稳定表达了HSV-2 gD,表达的HSV-2 gD具有较好的免疫原性,为基因工程疫苗的开发奠定了基础。     

人偏肺病毒标准株在不同细胞中的复制动力学

目的探讨人偏肺病毒(Human metapneumovirus,hMPV)标准株在不同细胞中的复制动力学,确定适合分离和培养hMPV的细胞。方法将hMPV A亚型标准株hMPV/NL/1/00和B亚型标准株hMPV/NL/1/99分别接种于Vero、Vero-E6、LLC-MK2、A549和HEp-2细胞,盲传数代,逐日观察细胞病变(CPE),并于接种后第2、4、6、8、10、12、14、16、18、20天提取细胞RNA,逆转录合成cDNA,采用实时荧光定量PCR检测hMPV F蛋白基因。结果接种hMPV后3 d可在Vero、Vero-E6、LLC-MK2和A549细胞中观察到CPE,不同亚型的hMPV所致的CPE无差别;hMPV可在Vero、Vero-E6和LLC-MK2细胞中稳定复制,不能在A549和HEp-2细胞中稳定传代。结论 Vero、Vero-E6和LLC-MK2细胞是适合培养hMPV的细胞,A549和HEp-2细胞不适合用于培养hMPV。     

检查传代细胞致肿瘤因子动物模型的研究

以Vero传代细胞系为例，用一种严重联合免疫缺陷小鼠（SevereCombinedImmunodeficintMice，SCID）及棵鼠（NudeMice），以10~7／0.2ml的传代细胞注射于胸部皮下。同时用Hela细胞作为阳性肿瘤细胞对照，并接种于免疫功能正常的BALB／c小鼠和昆明种小鼠。结果表明Vero细胞（P_(137)代）无论在SCID小鼠或探鼠都未引起肿瘤。而Hela细胞注射的SCID小鼠及裸鼠，于注射后第7天，在注射部位有进行性的肿瘤生长，到21天解剖时长至15×20mm，局部淋巴结也受累；而在免疫功能正常的小鼠则未引起肿瘤生长。证明SCID小鼠及探鼠可作为致肿瘤试验的动物模型。     

国产无佐剂Vero细胞狂犬病疫苗接种后的不良反应及免疫持久性观察

目的观察国产无佐剂Vero细胞狂犬病疫苗全程接种后的不良反应和免疫持久性,为完善再次暴露后疫苗的免疫程序提供依据。方法将医院犬伤门诊暴露后前来进行狂犬病疫苗接种者分为A、B两组:A组为Ⅱ级咬伤者,全程仅接种国产无佐剂Vero细胞狂犬病疫苗;B组为Ⅲ级咬伤者,接种国产无佐剂Vero细胞狂犬病疫苗加人狂犬病免疫球蛋白。电话调查并记录观察对象接种每剂无佐剂Vero细胞狂犬病疫苗及人狂犬病免疫球蛋白后7 d内的不良反应以及随访期间严重不良反应情况;接种前、接种后6周、6月、1年、2年、3年分别采集血清,采用快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)检测狂犬病病毒中和抗体,分析中和抗体≥0.5 IU/ml的有效保护水平以及抗体几何平均滴度(GMT)。结果疫苗接种后7 d内和随访期间未发生严重不良反应。疫苗接种后6周、6月、1年、2年、3年有效保护中和抗体(≥0.5 IU/ml)阳性率分别为97.5%、100%、73.9%、21.1%、20%;中和抗体GMT分别为4.584 6、2.226 9、1.146 6、0.506 3、0.408 5,中和抗体水平随着时间的延长呈显著下降趋势(P<0.01);加强免疫后中和抗体水平显著升高,并持续较长时间。结论国产无佐剂Vero细胞狂犬病疫苗的安全性和耐受性良好,接种后2年抗体水平降至与接种后3年相近的低水平,建议2年后再次暴露者全程接种5剂狂犬病疫苗。     

单纯疱疹病毒2型表面糖蛋白D亚单位疫苗免疫佐剂的筛选及免疫方案优化

目的筛选单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)表面糖蛋白(glycoprotein)D2(g D2)亚单位疫苗的免疫佐剂,对免疫剂量、免疫次数等免疫方案进行优化。方法使用Alum佐剂、Poly I:C佐剂及Alum+Poly I:C混合佐剂,分别配伍不同剂量(2、5、10μg)的gD2蛋白,共制成9种注射制剂,经后腿肌肉注射免疫9组雌性BALB/c小鼠,分别于初次免疫后第28和42天各加强免疫1次,于初次免疫后28 d及第2、3次免疫后14 d,经眼眶静脉窦取血,分离血清,ELISA法检测特异性抗g D2抗体效价;脱颈椎处死小鼠,分离研磨脾脏后,获得脾细胞,加入gD2抗原刺激培养71 h后,收集细胞上清,应用CBA试剂盒测定细胞因子(IL-2、IFNγ、TNF-α)浓度;确定最佳免疫方案。结果初次免疫后28 d,各组总抗体效价偏低,混合佐剂(Alum+Poly I:C)配伍10μg抗原组小鼠血清抗体效价最高,但动物个体差异大。第2次免疫后14 d,各组小鼠血清抗体效价较第1次免疫显著增高;佐剂及抗原剂量对抗体效价影响显著,其中Poly I:C佐剂配伍10μg抗原组小鼠抗体效价及细胞因子分泌水平综合最高。末次免疫后14 d,小鼠血清中抗体效价较第2次免疫再次升高,动物个体间效价差异缩小,混合佐剂组效价最高;各组细胞因子分泌水平较第2次免疫略有增高,混合佐剂配伍2μg抗原组分泌高水平的IL-2、IFNγ、TNF-α。结论小鼠免疫模型中,使用Alum+Poly I:C混合佐剂较使用任一单独佐剂可产生最佳免疫效果,最佳免疫组为混合佐剂配伍2μg抗原组,最佳免疫次数为3次,第1和2次免疫间隔28 d,第2和第3次免疫间隔14 d,最佳免疫剂量为2μg/只小鼠。     

基孔肯雅病毒无血清培养及灭活病毒保护效果的分析

目的 建立无血清条件下培养基孔肯雅病毒(Chikungunya virus,CHIKV)的生产工艺,评价灭活CHIKV在小鼠感染模型的保护效果.方法 采用无血清培养基(virus production serum-free medium,VP-SFM)适应培养Vero细胞扩增CHIKV,与含血清DMEM培养基扩增CHI...     

甲型肝炎病毒与水痘病毒感染2BS细胞的超微结构变化

目的观察甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)、水痘带状孢疹病毒(Varicella zoster virus,VZV)分别感染与共同感染二倍体细胞2BS株时细胞超微结构的变化。方法电镜观察HAV单独感染21、23、25 d,VZV单独感染1、3、5 d及HAV感染21 d后再以VZV感染1、3、5、7 d的2BS细胞的超微结构。结果与正常对照2BS细胞相比,单独感染HAV的2BS细胞超微结构无明显变化;单独感染VZV的2BS细胞的超微结构主要出现核膜破坏;HAV与VZV共同感染的2BS细胞核内出现VZV包涵体,核膜缺失,胞浆中可见HAV与VZV形态,且细胞粗面内质网和滑面内质网膨胀,内质网小池内有致密颗粒。结论HAV与VZV共同感染的2BS细胞的超微结构与两种病毒单独感染的细胞的超微结构存在不同的变化规律和形态特征,先感染HAV后感染VZV的2BS细胞比单独感染VZV的2BS细胞受到的破坏程度轻。     

水貂肠炎细小病毒及犬瘟热病毒灭活后的联合免疫效果

目的探讨水貂肠炎细小病毒(mink enteritis virus,MEV)和犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)灭活后的联合免疫效果。方法用甲醛灭活MEV-L和CDV-L弱毒株,固定MEV-L的血凝效价为2~6,与CDV-L病毒液(CDV-L TCID_(50)10~(-5.29)/mL)分别按1∶1(Ⅰ组)、1∶2(Ⅱ组)、1∶3(Ⅲ组)的量混合,加入10%氢氧化铝胶,充分混匀后免疫大鼠,均为1 m L/只。分别于免疫前及免疫后第7、14、30、60、90天采血,分离血清,采用血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)试验和间接ELISA检测血清MEV抗体效价,血清中和试验和间接ELISA检测血清CDV抗体效价。结果大鼠在免疫后7 d时产生MEV和CDV抗体,30 d时抗体效价最高,随后下降,90 d时抗体效价仍较高;Ⅰ组CDV抗体效价较其他两组高。结论3组不同比例的CDV和MEV联合免疫大鼠均可产生较高的抗体水平,其中以1∶1比例的免疫效果最佳。     

表达呼吸道合胞病毒F蛋白的新城疫重组病毒的构建及其免疫原性

目的利用新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)反向遗传系统构建表达呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)F蛋白的重组病毒,并以BALB/c小鼠为动物模型,评价其免疫原性。方法在已建立的NDV反向遗传系统的基础上,将RSV F基因插入NDV全长cDNA克隆中,构建并拯救获得表达RSV F蛋白的重组病毒rLS/RSV-F。采用间接免疫荧光(indirect immunoinfluscent assay,IFA)法鉴定RSV F蛋白的表达;以HA、病毒半数鸡胚感染量(50%infective dose,EID50)、半数组织感染量(50%tissue infectious dose,TCID50)及生长曲线等生物学指标对其生物学特性进行鉴定;将rLS/RSV-F滴鼻免疫BALB/c小鼠,于免疫后第49天经眼眶后静脉丛采血,分离血清,ELISA法检测IgG抗体效价,中和试验检测中和抗体效价。结果成功拯救表达RSV F蛋白的NDV重组病毒rLS/RSV-F,具有与亲本病毒相似的感染能力及生长动力学特性;rLS/RSV-F可刺激小鼠机体产生较高水平的针对RSV F蛋白的特异抗体及RSV中和抗体,与亲本病毒对照组相比,差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论成功拯救了表达RSV F蛋白的NDV重组病毒,并通过动物实验证明重组病毒rLS/RSV-F具有较好的免疫原性,为RSV疫苗的研发提供了新思路。     

乙型脑炎病毒在Vero细胞上的传代适应性及毒种库的建立

目的分析乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)在Vero细胞上的传代适应性,进行培养条件及接种方式的优化,并建立毒种库。方法将JEV P3株在Vero细胞上连续适应性传至20代(P3V1~P3V20),采用小鼠法检测P3V2、P3V3、P3V4的病毒滴度。优化JEV静置培养条件(维持液p H值、培养温度、MOI)及接种方式(单层接种法、混合接种法),并进行培养规模的放大。采用RT-PCR法扩增P3V0、P3V1、P3V5、P3V10、P3V15及P3V20代病毒的E基因片段,并进行测序分析。建立JEV毒种库,并进行全面检定。结果 JEV在Vero细胞上传代适应性良好,各代次病毒滴度均大于8.5 lg LD50/ml。最适培养条件为:病毒维持液p H值为7.6,培养温度为34℃,病毒MOI为0.1;最佳接种方式为:单层接种法。在不同培养规模时,病毒滴度变化较小,且均维持在较高水平。P3V0、P3V1、P3V5、P3V10、P3V15及P3V20各代次间E基因片段同源性为100%,传代稳定性良好。建立的毒种库的鉴别试验、无菌检查、支原体检查、病毒滴定、病毒外源因子检查及免疫原性检查结果均符合《中国药典》三部(2010版)相关要求。结论已完成JEV在Vero细胞上的适应性传代培养,并成功建立毒种库,为实现以Vero细胞为基质的JEV疫苗的研发奠定了基础。     

Peptidomimetic therapeutic agents targeting the protease enzyme of the human immunodeficiency virus and hepatitis C virus

During the past two decades, great strides have been made in the design of peptidomimetic drugs for the treatment of viral infections, despite the stigma of poor drug-like properties, low oral absorption, and high clearance associated with such compounds. This Account summarizes the progress made toward overcoming such liabilities and highlights the drug discovery efforts that have focused specifically on human immunodeficiency virus (HIV) and hepatitis C virus (HCV) protease inhibitors. The arsenal against the incurable disease AIDS, which is caused by HIV infection, includes peptidomimetic compounds that target the virally encoded aspartic protease enzyme. This enzyme is essential to the production of mature HIV particles and plays a key role in maintaining infectivity. However, because of the rapid genomic evolution of viruses, an inevitable consequence in the treatment of all viral infections is the emergence of resistance to the drugs. Therefore, the incomplete suppression of HIV in treatment-experienced AIDS patients will continue to drive the search for more effective therapeutic agents that exhibit efficacy against the mutants raised by the earlier generation of protease inhibitors. Currently, a number of substrate-based peptidomimetic agents that target the virally encoded HCV NS3/4A protease are in clinical development. Mechanistically, these inhibitors can be generally divided into activated carbonyls that are transition-state mimics or compounds that tap into the feedback mode of enzyme-product inhibition. In the HCV field, there is justified optimism that a number of these compounds will soon reach commercialization as therapeutic agents for the treatment of HCV infections. Structural research has guided the successful design of both HIV and HCV protease inhibitors. X-ray crystallography, NMR, and computational studies have provided valuable insight in to the free-state preorganization of peptidomimetic ligands and their enzyme-bound conformation. Researchers have designed a variety of novel bioisosteric replacements of amino acids and short peptides that contain all of the required pharmacophore moieties and play a key role in inducing conformational changes to the overall molecule. The knowledge gained from these studies will undoubtedly guide the future design of therapeutic agents and further contribute to the success of this field.     

水痘带状疱疹病毒培养液的筛选

目的筛选培养水痘带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)的培养液。方法将4种不同的培养基分别与新生牛血清、人血白蛋白组合,配制12组不同的病毒培养液,培养VZV后,采用噬斑法检测病毒滴度。用筛选出的病毒培养液,对VZV进行6个40层细胞工厂的扩大化培养及连续传代培养,收获P1和P5病毒,进行ORF62核酸序列测序,利用DNAMan软件对测序结果进行比对分析。结果实验2、4、11组培养液培养的VZV滴度明显高于其他组(P均0.05),选择实验4组培养液对VZV进行扩大化培养后,病毒滴度均稳定在约5.4 Lg PFU/ml;连续传代培养,ORF62核酸序列无碱基突变。结论筛选出1种不含血清及人血白蛋白的VZV培养液,可以稳定地培养VZV。     

寨卡病毒研究进展

寨卡病毒病是由寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)感染引起的一种新病毒病。寨卡病毒为黄病毒的一种,由伊蚊属蚊子传播,对成人不会造成生命危险,但其与罕见的格林巴利综合征(Guillain-Barre syndrome,GBS)及新生儿小头症有关,因此,与全世界的公共卫生健康息息相关。起初该病仅在非洲地区流行,1980年传入东南亚,2007年传入密克罗尼西亚,于2014年传入美国并呈现出扩大蔓延趋势,引起世界卫生组织高度重视。2016年,在我国确诊了ZIKV输入性感染病例。本文就ZIKV的分子生物学特征、传播途径、流行病学、临床症状、诊断、预防等方面作一综述,为其相关研究提供参考。     

B型流感病毒血凝素的纯化

目的纯化B型流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)。方法使用不同浓度的菠萝蛋白酶酶切B型流感病毒HA,超速离心获得含HA的上清后,经蔗糖密度梯度离心进行纯化,HPLC分子筛分析纯化效果。纯化后的蛋白经糖苷酶PNGaseF处理后,切取丰度较高的蛋白条带,进行质谱鉴定。结果病毒蛋白与菠萝蛋白酶蛋白含量的最佳比例为40∶1;5%~30%梯度浓度的蔗糖能很好地去除低相对分子质量的蛋白,流感病毒内丰度较高的NP及M蛋白得到很好的去除;纯化的HA蛋白的纯度大于90%,且HPLC分析显示仅有1个主峰,均一性良好。结论优化了B型流感病毒HA蔗糖密度梯度离心纯化方法,获得了高纯度的HA蛋白,为制备HA标准抗血清奠定了基础。     

豚鼠对EB病毒的易感性分析

目的建立豚鼠感染EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)动物模型,分析EBV对豚鼠的易感性。方法将EBV经鼻腔和口腔感染豚鼠,建立感染EBV动物模型。提取分离的豚鼠淋巴细胞总RNA,巢式PCR法检测EBNA1及BcLF1基因mRNA的表达水平;ELISA法检测豚鼠血清中抗EBV IgG抗体水平的变化。取豚鼠肝脏、肺、脾脏、腮腺进行病理分析。结果10只模型组豚鼠中有6只检测到BcLF1基因mRNA的表达,其中有4只同时检测到了EBNA1和BcLF1基因mRNA的表达;经双酶切及测序鉴定,扩增的EBNA1及BcLF1基因大小与预期相符。10只豚鼠血清中VCA IgG和EBNA-IgG抗体水平均有所升高。模型组中有5只豚鼠的肝脏、肺、脾脏、腮腺的组织发生不同程度的病变。结论豚鼠可作为EBV感染动物模型的备选动物。