江浙蝮蛇毒抗栓酶纯化方法的改进

用DEAE－SephadexA50离子交换层析结合亲和层析方法，从江浙蝮蛇（AgkistrodonhalysPallas）粗毒中分离纯化抗栓酶（EC3．4．21．28）。所得抗栓酶在SDS－PAGE上呈一条主区带及二条副区带，分子量在33～44KD之间，比活为14000USP单位／mg蛋白，回收率可达到60％以上，制品的出血毒及神经毒素均可合格，较本所原制备方法的纯度和得率分别提高10倍和4倍，且操作简单，适于大规模制备。     

长白白眉蝮蛇蛇毒类凝血酶的纯化及质量检测

长白白眉蝮蛇原毒经DEAE Sepharose FF ,CM Sepharose FF和G Sepharose CL 6B层析后 ,制得长白白眉蝮蛇蛇毒类凝血酶精品。该产品经质量检测完全符合卫生部颁发的质量标准 ,该工艺适合于大规模纯化长白白眉蝮蛇蛇毒类凝血酶。     

精制抗江浙蝮蛇毒血清与韩国三种蝮蛇毒的交叉中和作用

目的　考察本所精制抗江浙蝮蛇毒血清能否中和三种韩国蝮蛇毒及其中和能力。方法　用免疫双扩散法鉴定抗江浙蝮蛇毒血清与三种韩国蝮蛇毒交叉反应。并根据动物实验结果计算出每毫升抗血清中和三种韩国蝮蛇毒的致死毒及出血毒的量。结果　中国精制抗江浙蝮蛇毒血清 1.0ml可分别中和韩国黑眉蝮蛇毒、短尾蛇毒和乌苏里蝮蛇毒液态原毒的致死毒 1、3.9和 2 .5mg ;同时可分别中和上述 3种蛇毒蛋白 0 .8、3.15和 2 0mg中和出血毒。结论　中国精制抗江浙蝮蛇毒血清具有中和上述三种韩国蝮科蛇毒的作用。     

人源尖吻蝮蛇毒蛋白抗体单链可变区片段噬菌体文库的初建

目的构建人源尖吻蝮蛇毒蛋白抗体单链可变区片段(scFv)噬菌体文库。方法采用Trizol试剂提取尖吻蝮蛇咬伤后恢复期患者的外周血淋巴细胞的总RNA,用Oligotex誖mRNA Mini Kits纯化获得总mRNA,逆转录合成总cDNA,针对人抗体轻链和重链可变区基因设计一系列特异性引物,以合成的总cDNA为模板,扩增得到抗体轻链和重链可变区基因库,再通过重叠延伸PCR(splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)将轻链和重链拼接得到scFv文库;将scFv基因双酶切后,插入T7噬菌体骨架进行包装,以尖吻蝮蛇蛇毒蛋白抗原进行4轮淘选,建立蛇毒蛋白抗体scFv噬菌体文库,采用噬斑法检测scFv噬菌体文库滴度并进行PCR及测序鉴定。结果成功地将轻链和重链可变区基因库混合拼接得到scFv文库;经4轮淘选,蛇毒蛋白抗体scFv噬菌体文库滴度为6.0×1014PFU/ml,抗体基因在噬菌体中表达的阳性率达50%以上,表达的scFv片段均为轻链和重链的杂合体,可较好的重现可变区的多样性。结论已成功构建了人源尖吻蝮蛇毒蛋白抗体scFv噬菌体文库,为下一步噬菌体文库的克隆构建和筛选奠定了基础。     

蛇毒的研究及应用进展

蛇毒是由蛇的毒腺分泌的一种天然毒蛋白 ,含有多种蛋白质、多肽、酶类和其他小分子物质 ,具有广泛的生物学活性。随着蛇毒毒理学、药物学、生物化学和分子生物学的发展 ,蛇毒的许多组分已得到分离纯化和序列测定 ,并广泛应用于理论研究和临床应用。本文就研究较为深入的蛇毒组分 :神经毒素、细胞毒素、神经生长因子和类凝血酶的研究与应用进展及蛇毒的研究发展方向作一综述。1 蛇毒神经毒素蛇毒神经毒素是一类相对分子质量小的碱性多肽 ,相对分子质量为 6 0 0 0～ 12 0 0 0 ,ｐＨ值 9以上 ,可通过多种不同的方式改变中枢和周围神经系统正常…     

防老剂BHT的提纯及其纯度检测

为提高和准确测定防老剂BHT的纯度，采用重结晶和区域熔融法对工业品防老剂BHT进行提纯，并用高效液相色谱仪和差示扫描量热仪对样品进行纯度检测。高效液相色谱法（HPLC）的标准曲线法测得的回收率在100．19％～100．28％之间，相对标准差（RSD）为0．05％；提纯品防老剂BHT的纯度为99．09％，RSD为0．08％。用差示扫描量热法（DSC）测得提纯品纯度为99．16％，RSD为0．14％。纯度达到国际同类产品水平。     

硫丹毒性研究

硫丹（ｅｎｄｏｓｕｌｆａｎ）原药和３５％乳油对ＳＤ大鼠的急性经口和经皮毒性属于高毒到中等毒范围，两种染毒途径均具有明显的性别差异，对雌性的毒性大。中毒表现主要为神经系统症状，部分动物死于肺水肿。对小鼠有中等蓄积毒性。对家兔皮肤、眼粘膜有轻度刺激作用。Ａｍｅｓ试验，小鼠骨髓胞微核试验和睾丸初级精母细胞染色体畸变试验结果均匀为阴性。     

防老剂BHT的提纯及其纯度检测

为提高防老剂BHT的纯度，采用重结晶和区域熔融法对工业品防老剂BHT进行提纯。用高效液相色谱仪和差示扫描量热仪对样品进行纯度检测，试验结果表明，其方法可靠、准确。提纯品防老剂BHT的纯度为99．09％（高效液相色谱法，相对标准偏差0．08％）和99．16％（差示扫描量热法，相对标准偏差0．14％），纯度可达到国际同类产品水平。     

α1b型基因工程干扰素大规模纯化工艺的建立

应用α1b型基因工程干扰素大规模纯化工艺制备了3批干扰素，每批使用16kg菌体，其干扰素平均得率和纯化倍数分别为11．55％和1659倍。按照WHO规程的要求，其纯度经SDS—PAGE银染色法检定，呈一条带，其分子量约为20KD，纯度在98．97％以上。用HPLC检定纯度均为单一峰形，纯度在96％以上。其它检定项目如残余DNA和鼠IgG含量、热原、水分和安全试验等均符合规程要求。     

防老剂BHT的提纯及其纯度检测

为提高和准确测定防老剂BHT的纯度，采用重结晶和区域熔融法对工业品防老剂BHT进行提纯，并用高效液相色谱仪和差示扫描量热仪对样品进行纯度检测。高效液相色谱法（HPLC）的标准曲线法测得的回收率在100．199／5～100．289／5之间，相对标准差（RSD）为0．059，5；提纯品防老剂BHT的纯度为99．099，6，RSD为0．089，6。用差示扫描量热法（DSC）测得提纯品纯度为99．16％，RSD为0．14％。纯度达到国际同类产品水平。     

蛇毒中趋化活性成分的筛选

目的　从由蛇毒提取的短肽中筛选趋化活性成分。方法　利用趋化小室和细胞微生理检测仪 ,从国内外 12种蛇毒中筛选具有趋化活性的成分。结果　从蝰蛇蛇毒中筛选出Knis2- 2、Knis3- 5、Knis5 - 3和Knis3- 6 ;从长白黑眉蛇蛇毒中选出Chsv7- 8。经进一步检测去除了活性弱的Chsv7- 8和具有细胞毒作用的Knis5 - 3,得到Knis2 -2、Knis3- 5和Knis3 -6三个活性成分。结论　为进一步研制生物药剂奠定了基础。     

甲氨基阿维菌素苯甲酸盐对鹌鹑的急性及蓄积毒性研究

进行甲氨基阿维菌素苯甲酸盐（甲维盐）原药对鹌鹑的急性和蓄积毒性试验及该药不同制剂对鹌鹑的急性毒性比较试验。结果表明甲维盐原药对鹌鹑的急性毒性为中毒，受试制剂中0．2％、1％甲维盐EC对鹌鹑为高毒，3％甲维盐WG、5％甲维盐WG、1％甲维盐ME和1．9％甲维盐EC为中毒或中低毒；甲维盐原药对鹌鹑的蓄积毒性为中等蓄积，蓄积染毒中、后期鹌鹑体重和耗食量均显著减少，肺和肾脏的脏器系数与对照有显著性差异，血液血清生化指标中碱性磷酸酶与对照相比显著降低。     

木浆清洁漂白废水中毒性物质的研究

为掌握木浆清洁漂白技术的毒性排放负荷及漂白废水的主要有机毒性成分,采用发光细菌急性毒性测试技术和GC／MS分析技术研究木浆清洁漂白废水的毒性及毒性物质。结果表明,木浆OHMP漂白废水的总排放毒性因子（Toxicity Effkuent Factor,TEF）为73．136TU·m^3／t浆,     

一种新型破伤风类毒素的理化和生物学特性的研究

对所研制的新型破类进行SDS－PAGE和HPLC分析，其主要成分为分子量大于584KD的聚合物，HPLC显示第一峰占82．09％～97．68％。此抗原的稳定性能良好，毒性逆转试验阴性，说明此种新破类解毒彻底。动物试验表明，其免疫原性大大优于常规破类，而且达到和超过了1990年版《中国生物制品规程》规定的吸附精制破伤风类毒素的要求。     

高纯氧化镁生产新工艺

为了综合利用运城盐湖的卤水资源，以碳酸氢钠为原料与卤水进行反应生产高纯氧化镁，同时副产无水硫酸钠和氯化钠。工艺条件为：反应温度60～65℃，反应物Mg^2＋质量分数约3．3％，NaHCO3溶液质量分数约14％，加料速度约20L／min，反应时间1h，洗水量为氧化镁质量的50倍。生产的高纯氧化镁纯度达99％以上，反应后的母液经过蒸发，所得产品不经洗涤，无水硫酸钠纯度可达98％，氯化钠纯度可达97％，这样的卤水每15m^3可生产1t氧化镁，副产无水硫酸钠2．2t、氯化钠1．6t。     

淋病奈瑟菌外膜蛋白Ⅰ的分离提纯及鉴定

在CaCl2存在下，以CTB提取淋球菌的OMP，再以Z3，14萃取PI，然后经DEAESepharoseCl－6B层析柱提纯，获得纯PI10．97毫克。SDS－PAGE显示纯PI为单一蛋白区带，分子量为35KD，经可见光扫描，其纯度达96.21％。用ELISA间接法检测证明，纯PI保持完好的抗原活性。亚类特异性鉴定证实为WI群PIA。     

杀菌剂氟吗啉和多菌灵对蚯蚓的急性毒性

采用自然土和OECD标准人工土研究了氟吗啉和多菌灵对蚯蚓的急性毒性，并对试验过程中蚯蚓的中毒症状和形态、行为变化进行了观察。结果表明，氟吗啉在自然土壤中对蚯蚓的LC50为592．73mg／kg，95％置信区间为562．41～623．80mg／kg；氟吗啉在人工土壤中对蚯蚓的LC50为318．79mg／kg，95％置信区间为181．63-543．79mg／kg。多菌灵在自然土壤中对蚯蚓的LC50为26．53mg／kg，95％置信区间为15．98-42．93mg／kg；多菌灵在人工土壤中对蚯蚓的LC50为5．57mg／kg，95％置信区间为2．48～11．83mg／kg。依据农药对蚯蚓的毒性等级划分标准，氟吗啉在自然土壤和人工土壤中对蚯蚓的毒性均为低毒级；多菌灵在自然土壤中对蚯蚓的毒性为低毒级，而在人工土壤中对蚯蚓的毒性为中毒级。     

氟吗啉对家蚕的毒性和安全性评价

研究了氟吗啉对家蚕的胃毒、触杀、熏蒸毒性，并进行安全性评价。试验结果表明：氟吗啉对家蚕2龄起蚕胃毒毒性的LC50为10548．4mg／L；对家蚕触杀毒性的结果为10000．0mg/L浓度以下对2龄起蚕没有毒性作用；对家蚕熏蒸毒性的结果为10000．0mg／L浓度以下对2龄起蚕没有毒性作用。与氟吗啉的推荐使用剂量100-200mg/kg相比，氟吗啉对家蚕安全，对家蚕毒性为“低毒”。     

B型肉毒神经毒素的纯化及胰蛋白酶对其作用分析

目的纯化B型肉毒神经毒素,并比较未激活和用胰蛋白酶激活的B型肉毒神经毒素的分子特性,分析在酸性和碱性条件下B型肉毒毒素复合物的完整性。方法取未激活、胰蛋白酶激活和热处理激活的B型肉毒毒素复合物,采用阴离子交换柱层析纯化神经毒素(分别为A、B和C组)。在酸性条件下溶解激活的B型肉毒毒素复合物(D组)。对各组进行纯度(特异毒性)测定和SDS-PAGE分析。结果柱层析后,神经毒素纯度均比复合物的纯度高,激活的神经毒素比未激活的高2～3倍;在非还原和还原条件下,A组的SDS-PAGE显示神经毒素、重链和轻链3条带;B组显示重链和轻链2条带;C组在非还原条件下显示重链和轻链2条带,在还原条件下只显示轻链1条带。在酸性条件下,B型肉毒毒素复合物由神经毒素与非毒性成分构成,在碱性条件下,神经毒素与非毒性成分分离。结论已成功纯化了B型肉毒神经毒素,经胰蛋白酶处理后,单链裂解为双链,比活性提高。     

体外3T3细胞光毒性中性红摄取法评价化妆品的光毒性作用

采用体外3T3细胞光毒性中性红摄取法,评价化妆品引起皮肤光毒反应的可能性。首先用不同质量浓度的5种标准品作用于3T3细胞,通过照射UVA与不照射UVA测试结果相比,建立了光毒性检测评价方法,并对24种化妆品样品(其中7种防晒化妆品和17中美白祛斑化妆品)进行检测和评价。结果表明,有2款化妆品具有比较强的光毒性。