GSTθ转染对宫颈癌HeLa细胞侵袭性的影响

目的 了解增加GSTθ表达水平对人类宫颈癌HeLa细胞生长及侵袭能力的影响。方法 通过脂质体将pcDNA3-GSTθ真核质粒载体转染获得高GSTθ表达水平的HeLa稳定转染细胞;采用RT-PCR检测GSTθmRNA的表达水平;采用细胞记数和MTT法测定细胞的生长;采用划痕拍照方法观察细胞侵袭能力的改变。结果 GSTθ高水平表达显著地延缓和降低HeLa细胞的生长,并使HeLa细胞的侵袭能力下降。结论 GSTθ高水平表达可以延缓和降低细胞生长并降低HeLa细胞的侵袭能力。     

普洱茶提取物对宫颈癌HeLa细胞的诱导凋亡作用

目的探讨普洱茶提取物对人宫颈癌HeLa细胞系的诱导凋亡作用及其分子机制。方法应用不同浓度的普洱茶提取物(15、30、60、120、250、500μg/ml)作用HeLa细胞后,采用MTT法检测其对细胞增殖的影响;DAPI染色法分析细胞凋亡形态学变化;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞早期凋亡;Western blot分析pro-caspase-3和pro-caspase-9的变化。结果普洱茶提取物对HeLa细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈浓度依赖性;经普洱茶提取物处理的细胞荧光显微镜下可见典型的凋亡形态学变化,细胞早期凋亡率显著高于未处理的细胞(P<0.05);经普洱茶提取物处理的细胞pro-caspase-3和pro-caspase-9均被活化。结论普洱茶提取物具有可以诱导HeLa细胞凋亡的天然活性成分,且凋亡途径可能依赖于caspase-3、caspase-9相关的线粒体凋亡途径。     

Hedgehog信号通路对人胃癌SGC-7901细胞体外血管形成的调控

目的探讨Hedgehog信号通路调控人胃癌SGC-7901细胞体外血管形成的可能分子机制。方法常规培养SGC-7901细胞和人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC),将SGC-7901细胞分为对照组A(未给药)、实验组B(环靶明终浓度5μmol/L)及实验组C(环靶明终浓度10μmol/L),培养48 h后,免疫荧光检测各组胶质瘤相关癌基因1(Glioma-associated oncogene homolog,Gli1)和血小板源性生长因子-D(Platelet-derivedgrowth factor D,PDGF-D)在胃癌SGC-7901细胞中的表达;通过小管形成试验和血管拟态试验检测细胞处理前后血管形成能力的变化;RT-PCR和Western blot检测细胞处理前后Gli1、PDGF-D的mRNA和蛋白表达变化,并对二者mRNA和蛋白表达水平进行相关性分析。结果 Gli1和PDGF-D在各组SGC-7901细胞中均有表达;实验组SGC-7901细胞的体外血管形成能力较对照组下降,且呈剂量依赖性,差异具有统计学意义(P<0.05);实验组Gli1和PDGF-D的mRNA和蛋白表达较对照组均受到显著抑制,差异有统计学意义(P<0.05),且二者mRNA和蛋白表达水平呈正相关(r=0.829,r=0.786,P<0.05)。结论 Hedgehog信号通路可能通过Gli1来调控PDGF-D的表达,进而促进肿瘤血管的形成。     

树突状细胞疫苗与宫颈癌细胞免疫治疗的新进展

宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一,其发病率在女性恶性肿瘤中居第2位。树突状细胞(DC)是机体免疫应答的始动者,以DC为基础的抗肿瘤免疫治疗已成为热点。本文就树突状细胞的抗肿瘤机制及其在宫颈癌免疫治疗中的应用作一综述。     

结核分枝杆菌感染细胞的信号传导通路研究进展

结核分枝杆菌是一种典型的胞内致病菌,在其感染宿主细胞的过程中,激活或抑制了复杂的信号传导通路,发挥调控感染细胞对IFN-γ的反应性,抑制炎症相关细胞因子产生,抗感染细胞凋亡,阻断吞噬体溶酶体融合等生物学效应,有利于Mtb生存并逃避免疫系统攻击。     

梓醇对宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡作用的研究

研究梓醇对宫颈癌He La细胞增殖与凋亡的作用。方法:配制不同浓度的梓醇(0、0. 25、0. 5、1 mmol/L)处理He La细胞24、48 h后,进行MTT实验检测梓醇对细胞增殖的影响;倒置显微镜观察不同浓度处理后的He La细胞的形态变化;利用Hoechst33342染液对处理后的He La细胞进行核染,观察梓醇对细胞凋亡的作用。MTT实验表明低浓度的梓醇即能明显抑制He La细胞的增殖;倒置显微镜下观察,与对照组相比,梓醇处理组均出现明显的核固缩等细胞凋亡变化;荧光显微镜下观察发现,不同浓度的梓醇作用于He La细胞后,能引起其发生不同程度的凋亡。梓醇通过抑制He La细胞增殖,诱导He La细胞凋亡最终杀死癌细胞,发挥抗肿瘤的作用。     

肿瘤坏死因子α诱导蛋白8对宫颈癌HeLa细胞的作用及其相关机制

目的通过shRNA干扰宫颈癌HeLa细胞中肿瘤坏死因子α诱导蛋白8(tumor necrosis factor alpha induced protein 8,TNFAIP8,TIPE)的表达,分析TIPE对宫颈癌生存的影响。方法转染pCDH-shRNA-TIPE质粒至HeLa细胞株(TIPE干扰组),同时设未转染质粒的空白对照组及空载体转染的阴性对照组,qPCR和Western blot法检测TIPE的表达;加入能诱导细胞凋亡的抗人死亡受体5单链抗体(aDR5ScFv)后,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测TIPE、激活型caspase-3、激活型caspase-8和激活型caspase-9蛋白表达。结果与空白对照组相比,TIPE干扰组细胞mRNA和蛋白表达均显著降低(P 0. 05);加入aDR5ScFv后,TIPE干扰组细胞增殖抑制率和凋亡率与空白对照组和阴性对照组相比显著升高(P 0. 05)。TIPE干扰组细胞激活型caspase-3、caspase-8和caspase-9蛋白的表达显著高于空白对照组和阴性对照组(P 0. 05)。结论 HeLa细胞干扰TIPE表达产生显著调节作用,TIPE的表达降低可对caspase诱导的HeLa细胞凋亡途径产生抑制,对生物治疗新药的进一步研发具有重要意义。     

丹皮酚调控Nrf2/HO-1抑制宫颈癌Hela细胞生长的研究

目的:探讨丹皮酚对宫颈癌细胞增殖的影响以及核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶(HO-1)的作用。方法:用丹皮酚或DMSO处理Hela细胞后,MTT法、TUNEL检测细胞活性。采用免疫化学方法和westernblot检测Nrf2和HO-1信号的分子表达。结果:与对照组相比,丹皮酚处理的Hela细胞增殖活性降低,细胞凋亡指数升高,Nrf2、HO-1表达降低。结论:丹皮酚诱导Hela细胞凋亡,机制可能通过调节Nrf2与HO-1的表达。     

Axin2基因对肝癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关分子表达的调控及机制

目的探讨Axin2基因对肝癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关分子表达的调控及其机制。方法通过TOPflash试验检测Axin2基因对Wnt/β-catenin信号通路的影响;荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,QPCR)法检测Axin2基因在正常肝细胞LO2及3种肝癌细胞HepG2、HHCC、HB611中的表达水平;对肝癌细胞HepG2中Axin2的表达进行干扰,并检测Wnt/β-catenin信号通路相关基因(β-catenin、Cyclin A、CDK2、Wnt5a、STAT3、EGFR、APC)mRNA转录水平及相关蛋白(β-catenin、Cyclin A、CDK2、APC)的表达量。结果 Axin2对Wnt/β-catenin信号通路有显著抑制作用,且呈剂量依赖性(P 0. 05);3种肝癌细胞Axin2的表达水平显著低于正常肝细胞LO2(P 0. 05);干扰HepG2细胞中Axin2基因表达后,Axin2基因m RNA转录及蛋白表达水平降低,Wnt信号通路下游基因β-catenin、Cyclin A、CDK2、Wnt5a、STAT3和EGFR基因mRNA转录水平及β-catenin、Cyclin A、CDK2蛋白表达量均上升,而APC基因mRNA转录水平及蛋白表达量降低。结论 Axin2基因通过调控Wnt/β-catenin信号通路相关基因的表达抑制肝癌细胞的生成,本研究为寻找新的肝癌治疗靶点及防治药物提供了实验依据。     

酿酒酵母TOR信号通路研究进展

TOR信号通路是酿酒酵母非常重要的保守信号通路,它连接着细胞所能得到的营养信号与细胞生长过程.它可以通过调节翻译、转录、核糖体生物合成、营养物质的运转以及与营养条件相关的自溶来调控细胞的生长.本文综述了酿酒酵母TOR信号通路的主要作用元件,并介绍了其与酿酒酵母时序寿命和Ras/cAMP/PKA信号通路的关系.     

壳聚糖固定化酶和细胞研究新进展

分析评价了壳聚糖作为固定化酶和细胞载体的特性,概述了壳聚糖凝胶固定化酶和细胞的形态及制备方法,着重介绍了近年来壳聚糖固定化酶和细胞的改进方法,并指出今后壳聚糖固定化酶和细胞的发展方向。     

LTD蛋白体外对HeLa细胞毒性的影响

目的探讨LTD蛋白在体外对HeLa细胞毒性的影响。方法将不同浓度的LTD蛋白作用于HeLa细胞,光学显微镜下观察细胞形态等变化,MTT法检测细胞增殖情况,激光共聚焦显微镜观察蛋白在细胞内的定位,HE染色和TUNNEL试剂盒检测细胞凋亡情况。结果 LTD蛋白对HeLa细胞具有毒性作用,能抑制细胞增殖,引起细胞凋亡。随着蛋白浓度的增加及作用时间的延长,HeLa细胞凋亡现象明显,生长抑制作用增强,蛋白浓度与细胞A_(490)值之间明显相关;且LTD由定位于细胞膜变为定位于胞浆和细胞核。结论 LTD蛋白促进HeLa细胞凋亡,对其增殖具有明显的抑制作用。     

牛Ⅱ型链球菌vanB2基因真核表达质粒的构建及其在宫颈癌HeLa细胞中的表达

目的构建牛Ⅱ型链球菌(Streptococcus bovis biotypeⅡ)van B2基因真核表达质粒,并在宫颈癌HeLa细胞中进行表达。方法以牛Ⅱ型链球菌基因组为模板,采用PCR法扩增van B2基因,克隆至真核表达载体pVAX-1中,构建重组表达质粒pVAX-1-van B2。采用FuGENE HD Transfection Reagent试剂盒将重组表达质粒转染HeLa细胞,转染48 h后,RT-PCR法检测转染细胞中van B2基因mRNA的转录;间接免疫荧光法和Western blot法检测转染细胞中van B2蛋白的表达。结果重组表达质粒pVAX-1-van B2经双酶切及测序鉴定构建正确;重组表达质粒转染HeLa细胞48 h后,荧光显微镜下可见绿色荧光表达,RT-PCR及Western blot分析分别可见570 bp及相对分子质量20 900的目的条带。结论成功构建了牛Ⅱ型链球菌van B2基因的真核重组表达质粒,并在HeLa细胞中成功表达。本实验为进一步研究牛Ⅱ型链球菌对抗生素的耐药性机制及其与van B2基因的相关性奠定了基础。     

黄芩苷通过Bcl-2/Caspase-3信号通路促HepG2细胞凋亡

目的：探究黄芩苷对人肝癌细胞HepG2是否具有促凋亡效应及其相关作用机制。方法：通过MTT法检测了黄芩苷对HepG2的增殖抑制效应;流式细胞分析检测了黄芩苷对HepG2凋亡的影响;Western Blot实验和q-RTPCR实验检测了黄芩苷对细胞凋亡相关分子Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达影响。结果：黄芩苷对人肝癌细胞HepG2存在明显的增殖抑制效应,诱导细胞发生了凋亡,且引起Caspase-3与Bax表达上调,Bcl-2表达下调。结论：黄芩苷通过Bcl-2/Caspase-3信号通路促HepG2细胞发生凋亡,为中药药物抗肿瘤机制研究提供参考。     

二氢青蒿素通过调控PTEN/Akt信号通路对肝癌HepG-2细胞增殖的影响

目的:探讨不同浓度的二氢青蒿素(DHA)对肝癌HepG-2细胞生长的影响,以及影响其增殖可能的作用机制。方法:体外培养人肝癌细胞HepG-2,将实验分成加药实验组和空白对照组。加药组加入不同浓度的二氢青蒿素(25μM、50μM、100μM、150μM、200μM)干预。利用CCK8法检测不同浓度的二氢青蒿素对肝癌HepG-2细胞增殖抑制的情况,采用Western blot检测细胞内PTEN/Akt信号通路中PTEN、Akt、CyclinD1、P27相关蛋白的表达情况。结果:由CCK8的结果得出的结果,二氢青蒿素可以抑制肝癌HepG-2细胞的生长,并呈一定的浓度和时间依赖性抑制。二氢青蒿素处理48 h后,通过Western blot的结果显示,PTEN、P27表达量升高,CyclinD1和Akt表达量降低(P0.05)。结论:二氢青蒿素抑制肝癌细胞HepG-2的增殖可能与抑制PTEN/Akt信号通路,阻滞细胞生长周期有关。     

基于cGAS-STING通路的调控剂及研究进展

环状GMP-AMP合酶(cGAS)-干扰素基因刺激分子(STING)信号通路能够感受胞质DNA触发免疫反应。STING在病原体感染、癌症和炎症性疾病中具有重要作用。本文从STING的结构和功能进行描述,概括了近年来STING通路的研究进展,STING相关疾病的研究以及近期一些代表性调控剂的发现。STING是一个非常具有潜力的药物靶点,希望能够为进一步探索STING的调控剂提供一些思路。     

pEGFP-C1-GnRH/TRS在HeLa细胞中的遗传稳定性

目的研究质粒pEGFP-C1-GnRH/TRS在HeLa细胞中的遗传稳定性。方法取0代及传至第10、20、30和40代的工程细胞,在有选择压力(加G418)的条件下,测定pEGFP-C1-GnRH/TRS质粒丢失率。分别提取各代次工程细胞质粒DNA进行双酶切鉴定。将经酶切鉴定正确的第40代工程细胞质粒测序,并将各代次工程细胞加压筛选后,于荧光显微镜下观察。结果连续传10、20、30和40代后,质粒丢失率均不超过2%。不同代次的工程细胞质粒DNA经BamHⅠ/EcoRⅠ双酶切,酶切图谱相同。第40代质粒的GnRH/TRS序列与原代质粒相同。第40代细胞荧光分析与原代细胞相似。结论质粒pEGFP-C1-GnRH/TRS在HeLa细胞中有较好的遗传稳定性。     

Notch信号通路相关分子在脊椎生长过程中的差异表达及其对软骨细胞分化的调控作用

目的探讨Notch信号通路相关分子在脊椎生长过程中的差异表达及其对软骨细胞分化的调控作用。方法采用RT-PCR检测各不同发育年龄段小鼠椎间盘Notch信号分子mRNA的表达情况,筛选调控脊椎正常生长发育的重要信号分子,并采用免疫组化法进行验证。用重组腺病毒介导Dll-1、Jag-1、骨形态发生蛋白-2(bone morphogeneticprotein-2,BMP-2)在髓核(nucleus pulposus,NP)细胞中过表达,RT-PCR检测软骨细胞特征性标志物蛋白聚糖(aggrecan,ACAN)和Ⅱ型胶原(collagen typeⅡ,COL2A1)的表达,甲苯胺蓝染色检测软骨细胞基质分泌情况。结果小鼠脊椎生长发育过程中,Notch信号分子mRNA的表达总体呈下降趋势,其中Dll-1、Dll-3、Jag-1下降趋势尤其显著;Dll-1和Jag-1广泛表达于软骨细胞胞膜,随着小鼠年龄的增大,二者在椎间盘中的表达显著下降;BMP-2过表达可促进NP细胞成软骨分化,ACAN和COL2A1表达升高,甲苯胺蓝染色增强;Dll-1、Jag-1过表达可显著抑制BMP-2诱导的成软骨分化效应。结论 Notch信号分子,尤其是Dll-1、Jag-1对正常脊椎生长及椎间盘软骨细胞的成熟分化具有明显的负性调节作用。