注射用A型肉毒毒素的生物学特性及质量分析

目的对注射用A型肉毒毒素(Botulinum toxin type A for injection,商品名衡力,出口商品名BTXA)制品中的活性药用成分(Active pharmaceutical ingredient,API)的性质及2009～2011年生产的注射用A型肉毒毒素原液的比活性进行分析。方法对BTXA收获物样品进行阴离子交换层析,分离毒素复合体各组分;采用血凝试验、HPLC法、SDS-PAGE、等点聚焦电泳及N-末端氨基酸测序等方法分析A型肉毒毒素复合体及其各组分的性质;统计2009～2011年连续生产的注射用A型肉毒毒素原液的比活性数据,分析连续生产的工艺稳定性和质量重现性。结果 BTXA收获物样品在碱性条件下可被解离,解离出的A型肉毒神经毒素相对分子质量约为150 000,无血凝效价;BTXA的API为完整的单体,纯度均在99.5%以上;复合物和神经毒素的等电点分别为4.97、4.91,N-末端氨基酸测序结果与GenBank基本一致;在连续3年的生产过程中,原液比活性平均为3.0×107LD50/mg蛋白,BTXA成品中API载量约为5 ng/瓶。结论注射用A型肉毒毒素的活性成分是特异的复合体结构,可在碱性条件下解离出A型肉毒神经毒素;BTXA原液的比活性在连续3年的生产中持续稳定,具备很好的连续性,为临床使用的安全性提供依据。     

A型肉毒毒素和A型肉毒神经毒素的非临床安全性评价

目的分析注射用A型肉毒毒素和注射用A型肉毒神经毒素活性药用成分(active pharmaceutical ingredient,API)的纯度、N-末端氨基酸序列和相对分子质量,并通过多个非临床研究试验,评价两种制品在药理、毒理特性等方面的一致性。方法采用SDS-PAGE法检测注射用A型肉毒毒素(衡力~,Lantox~,以下简称复合物)和注射用A型肉毒神经毒素(Chintox~,以下简称神经毒素)的纯度;对其N-末端氨基酸序列进行测序,并将测序结果与NCBI blast数据库中A型肉毒梭菌Hall株的氨基酸序列比对,确证其各组分的成分;毛细管凝胶电泳(capillary gel electrophoresis,CGE)检测其在非还原及还原条件下各组分的相对分子质量;单次肌肉注射、静脉注射、灌胃给予大鼠及单次肌肉注射给予食蟹猴的试验评价复合物和神经毒素的急性毒性;重复肌肉注射给予食蟹猴39周和恢复期12周的药理毒理试验评价复合物和神经毒素的长期毒性;家兔红细胞的体外溶血试验评价两者的溶血性;肌肉注射给予大鼠Ⅰ、Ⅱ段生殖毒性试验评价肉毒毒素的生殖毒性。结果神经毒素组:非还原条件下,神经毒素相对分子质量约152 000,N-末端氨基酸序列ALNDLQINVN,为完整的A型肉毒神经毒素;还原条件下,由相对分子质量约101 000,N-末端氨基酸序列ALNDLQINVN的重链和相对分子质量约51 000、N-末端氨基酸序列PFVNKQFNYK的轻链组成;复合物组:非还原条件下,含A型肉毒神经毒素(Mr 152 000)、非毒素非血凝素蛋白(non-toxic non-HA,NTNH)(Mr 136 000)、HA70组分(Mr 57 000、17 000)、HA33组分(Mr 30 000、28 000)和HA17组分(Mr 15 000),还原条件下,则含有重链、轻链、NTNH、HA70、HA33和HA17组分。注射用A型肉毒毒素、注射用A型肉毒神经毒素单次肌肉注射和静脉注射给予大鼠,肌肉注射的最大耐受剂量≥100 U/kg,静脉注射的最大耐受剂量≥30 U/kg;单次肌肉注射给予食蟹猴所产生的急性中毒反应与死亡情况一致,最大耐受剂量均为20 U/kg,近似致死剂量为40 U/kg;反复肌肉注射给予食蟹猴的试验中,未见明显毒性作用剂量(no observed adverse effect level,NOAEL)均为16 U/kg;在体外对家兔红细胞无溶血作用,不引起红细胞凝聚;Ⅰ段生殖毒性试验对雄鼠生育力的NOAEL为4U/kg,对雌鼠生育力的NOAEL为8 U/kg,对孕鼠早期胚胎发育的NOAEL为16 U/kg;Ⅱ段生殖毒性试验对孕鼠的NOAEL为1 U/kg,对胚胎-胎仔毒性和致畸性的NOAEL为16 U/kg。结论注射用A型肉毒毒素和注射用A型肉毒神经毒素在食蟹猴和大鼠的急性毒性、长期毒性等试验中,剂量、动物病理解剖结果一致,进一步说明A型肉毒毒素和A型肉毒神经毒素的药理毒理特性是相同的,且在反复肌肉注射给予食蟹猴的长期毒性试验中发现,A型肉毒神经毒素更不易产生抗体。在神经毒素灌胃试验中半数致死剂量高于复合物,表明其安全性更好。     

青藏高原地区应用生物灭鼠剂控制草地鼠害的药效试验研究

采用微生物源生物毒素D型肉毒灭鼠剂在青海、甘肃、西藏等地进行药物控制高原鼠兔的药效试验,试验结果表明,当浓度为0.05%时平均灭效为88.80%,0.1%时平均灭效93.43%,0.15%时平均灭效为93.99%,空白对照组平均灭效为19.08。三个浓度组间无显著差异(p>0.05);试验组与空白对照组间呈极显著差异(p<0.01)。说明该生物毒素具有现地应用价值,且按照生态平衡与经济学角度来综合分析,以0.10%为最佳配制浓度。     

小鼠E型肉毒毒素中毒血清蛋白差异分析

目的以小鼠为动物模型研究E型肉毒毒素中毒血清蛋白变化,寻找中毒相关蛋白,为肉毒中毒早期诊断及预后寻找新的生物标记分子。方法经腹腔注射昆明系近交小鼠E型肉毒毒素0.75 LD_(50),分别于24、48、72 h后眼眶采血,分离血清,SDS-PAGE结合2-DE-SDS-PAGE分离血清蛋白,PDQUest 8.0软件对凝胶进行背景消除和点的匹配,离子阱质谱检测差异蛋白点。结果 SDS-PAGE条带显示,中毒24 h血清蛋白变化最明显,正常血清和中毒24 h血清2-DE图谱找到20个差异蛋白点,其中14个只存在小鼠正常血清中,3个只存在肉毒中毒血清中,3个在肉毒中毒呈现低量表达。质谱检测出晶体蛋白家族,只在正常小鼠血液中表达;急性期蛋白在E型肉毒毒素中毒24 h出现明显变化,其中结合珠蛋白在中毒血清中低表达,而血清淀粉样蛋白A高表达。结论这些鉴定出的蛋白涉及机体能量代谢、肌肉收缩功能、细胞应激反应、转录、翻译以及细胞增殖的改变,尤其是结合珠蛋白和血浆淀粉样蛋白可初步作为潜在的诊断标记分子。     

B型肉毒神经毒素的纯化及胰蛋白酶对其作用分析

目的纯化B型肉毒神经毒素,并比较未激活和用胰蛋白酶激活的B型肉毒神经毒素的分子特性,分析在酸性和碱性条件下B型肉毒毒素复合物的完整性。方法取未激活、胰蛋白酶激活和热处理激活的B型肉毒毒素复合物,采用阴离子交换柱层析纯化神经毒素(分别为A、B和C组)。在酸性条件下溶解激活的B型肉毒毒素复合物(D组)。对各组进行纯度(特异毒性)测定和SDS-PAGE分析。结果柱层析后,神经毒素纯度均比复合物的纯度高,激活的神经毒素比未激活的高2～3倍;在非还原和还原条件下,A组的SDS-PAGE显示神经毒素、重链和轻链3条带;B组显示重链和轻链2条带;C组在非还原条件下显示重链和轻链2条带,在还原条件下只显示轻链1条带。在酸性条件下,B型肉毒毒素复合物由神经毒素与非毒性成分构成,在碱性条件下,神经毒素与非毒性成分分离。结论已成功纯化了B型肉毒神经毒素,经胰蛋白酶处理后,单链裂解为双链,比活性提高。     

水对离子液体溶解再生蚕蛹蛋白的影响

以蚕蛹粉为原料,考察了含水量对离子液体1-烯丙基-3-甲基咪唑氯([Amim]Cl)溶解再生蚕蛹蛋白的影响,并对再生蚕蛹蛋白的结构和热稳定性进行了分析.结果表明,水会破坏[Amim]Cl的氢键结构,降低对蚕蛹粉的溶解再生效率;不含水的[Amim]Cl溶解再生蚕蛹蛋白的效果最好,在溶解温度90℃、时间24 h、乙醇为再生剂的条件下,蚕蛹粉溶解率为86.5%,蚕蛹蛋白再生率达59.6%,再生物为蛋白质,并具有α螺旋、β折叠二级结构,且β折叠结构比例大于α螺旋结构;离子液体含水量对再生蛋白的结构没有明显影响,再生蛋白的热稳定性比蚕蛹粉稍有提高.     

4种常用杀鼠剂对高原鼠兔防治效果与安全性评价

[目的]验证地芬·硫酸钡、雷公藤甲素、莪术醇、溴敌隆等4种常用杀鼠剂对高原鼠兔的适口性、防治效果及对非靶标生物的安全性.[方法]采用人工洞口投药验证4种杀鼠剂适口性和防治效果,采用直接投喂和间接投喂验证其安全性.[结果]高原鼠兔对地芬·硫酸钡、雷公藤甲素、莪术醇、溴敌隆取食率分别为84.27％、87.08％、38.26...     

苏云金杆菌及其毒蛋白对土耳其斯坦叶螨不同螨态的毒力测定

[目的]选取苏云金芽孢杆菌及其2种毒蛋白(Cry1Ac活化毒素/原毒素、Cry2Ab活化毒素/原毒素)对土耳其斯坦叶螨不同发育阶段进行毒力测定,为新型生物杀虫剂在土耳其斯坦叶螨生物防治及应用方面提供理论依据。[方法]采用玻片浸渍法和叶片浸渍法。[结果]2种活化毒素对若螨和雌成螨有较高毒力,其中Cry2Ab最高,LC_(50)值分别为30.68、144.58 mg/L,其次是Cry1Ac,LC50值为79.86、187.29 mg/L。但是对卵的活性明显偏低。苏云金杆菌制剂及2种原毒素对土耳其斯坦叶螨3种螨态毒力均较低。[结论]2种活化毒素对若螨和雌成螨有毒力,可以用于土耳其斯坦叶螨的生物防治。     

一次性摄食抗凝血剂的灭鼠效果接近100％

1986年第七届英国害物防治会上,发表了关于第二代抗凝血杀鼠剂——flocoumafen的论文。其商品名Storm,一次摄食致死剂量即可使鼠致死,且对大、小鼠包括抗性品系均有效。由于它有上佳的适口性和延滞作用,能消除老鼠对毒饵的戒备,从而确保其始终有效。这些特点使其适合于更经济有效的脉冲式投饵技术。     

亚致死剂量马拉硫磷导致小鼠肾损伤及内质网应激分析

[目的]探讨有机磷化合物对哺乳动物肾组织的毒效作用,为有机磷的非胆碱能毒理机制研究提供参考。[方法]选取马拉硫磷为有机磷代表,分别以1/3 LD_(50)、1/10 LD_(50)、1/25 LD_(50)亚致死剂量马拉硫磷经口灌胃小鼠18 d,苏木精-伊红(HE)染色观察各组肾组织病理变化情况,荧光定量PCR和免疫组织化学染色法测定药物处理前后肾组织DDIT3基因的m RNA和蛋白表达情况。[结果]亚致死剂量马拉硫磷可以升高小鼠血液中的血尿素氮、肌酐、尿酸含量。HE染色显示,与对照组比较,1/3 LD_(50)和1/10 LD_(50)剂量组对小鼠肾小球、肾小囊腔内、肾静脉血管损伤显著。荧光定量PCR和IHC结果显示,马拉硫磷可显著升高小鼠肾组织中内质网应激的标志基因DDIT3的m RNA水平和蛋白表达。[结论]以上结果提示,亚致死剂量马拉硫磷可致肾组织损伤,增加肾细胞的内质网应激,诱导肾细胞凋亡可能是其产生损伤的原因之一。     

破伤风毒素的提纯及形成离子通道的特性

应用硫酸铵分段沉淀和 Ultrogei AcA_(34)凝胶过滤对破伤风毒进行了提纯,并对形成的离子通道在中毒作用中的功能进行了讨论。提纯的毒素与抗粗制毒素血清形成一条沉淀线,于聚丙烯酰胺凝胶电泳中形成单一的蛋白带,分子量为15万,等电点为5.95,毒力为1～3×10~4MLD/μg 蛋白。给小鼠注射低剂量毒素引起迟发性强直性痉挛;注射高剂量毒素引起快速的类肉毒毒素的松弛性麻痹,直至死亡。应用 Patch clamp 技术,破伤风毒素于人工磷脂膜上形成离子通道。只有当膜两侧存有 pH 梯度时毒素才形成离子通道,因此是 pH 依赖的。通道的电导系数为9 PS。     

沸石分子筛吸附性能及其在烟气减害中的应用研究

为研究开发烟气减害新型材料,合成了高硅型Y型沸石分子筛颗粒和ZSM-5型沸石分子筛颗粒,对材料物化性质进行了表征,并将其分别添加至三元复合滤棒卷制卷烟,进行烟气减害性能评价及感官质量评价。结果表明:合成的两种分子筛颗粒满足滤棒生产上机适用性需求,卷烟试验样与对照样相比,烟气三项指标烟碱、焦油量及一氧化碳量基本不变;Y型分子筛颗粒对烟气七项有害成分中的HCN、巴豆醛的降低率分别为10.2%和7.1%,ZSM-5型沸石分子筛颗粒对烟气七项有害成分中HCN、巴豆醛、B[a]P的降低率分别为20.1%,10.6%和14.4%,烟气评价指数降低0.5。两种分子筛颗粒对卷烟感官质量影响不大。     

大分子组装体作用下仿生膜的合成

引　言仿生合成技术是将生物矿化机理引入无机材料合成 ,以有机物的组装体为模板控制无机物的形成 ,制备具有独特显微结构特点的无机材料 ,使材料具有优异的物理和化学性能[1,2 ] .仿生合成材料具有广阔的应用前景———微米级多孔仿生合成材料是极好的隔热、隔声材料 ;具有纳米级精细孔结构的分子筛可根据粒子大小对细颗粒进行准确的分类 ,例如筛选细菌与病毒等 ,用作高渗透通量、高分离精度的纯净水生产装置 ;如果与细小催化剂颗粒相结合 ,这种材料可以实现反应与分离过程的有效耦合 ;仿生合成的磷灰石材料是性能优异的新骨组织构造基架 ,…     

A型肉毒抗毒素的层析纯化

目的层析纯化A型肉毒抗毒素,提高免疫球蛋白F(ab′)2的纯度。方法采用阴离子交换层析纯化A型肉毒抗毒素,并通过试验设计(design of experiment,DoE)方法优化缓冲液的pH与电导。结果流穿液中的小分子杂蛋白含量受电导的影响较显著,并随着电导的降低而降低,而pH在试验设计范围内对其影响较小;聚集体/聚合体含量在低pH、高电导时含量较高,高pH、低电导时含量较低;F(ab′)2的纯度主要受电导的影响,并随着电导的升高而降低,在试验设计范围(2~20 ms/cm)内,F(ab′)2的纯度均在90%以上。结论采用阴离子交换层析可有效降低A型肉毒抗毒素中聚集体/聚合体以及部分小分子杂蛋白的含量,提高F(ab′)2的含量。     

施工工艺

201101123能增强所涂覆件抗静电性的导电聚合物型固化涂料组合物：W0201O-49503[国际专利申请，英]／法国：Compagnie Generale D＇Optique（Zheng, Haipeng）.-2010.05.     

几种农药对美国白蛾幼虫活性比较及生物学效应

[目的]筛选出对美国白蛾高效低毒药剂,明确其致死、亚致死效应;延缓害虫抗性进程。[方法]室内采用饲毒法进行生物测定,统计农药的致死和亚致死效应。[结果]25%吡虫啉粉剂和4.5%高效氯氰菊酯乳油对美国白蛾2龄幼虫48 h LC50值分别为10.93、6.02 mg/L;当20%灭幼脲III乳油、1.8%阿维菌素乳油、3%高渗苯氧威乳油有效含量分别为400、3.6、4 mg/L时,96 h对3龄美国白蛾校正死亡率分别达到20.0%、30.0%和10.0%;化蛹率分别降低43.0%、57.0%、50.5%;幼虫期较对照分别延长4、5、4 d。[结论]美国白蛾密度高时,可以采用高效氯氰菊酯乳油和吡虫啉交替用药,密度低时,建议用另外3种药剂。     

Dawson结构三取代杂多酸盐电化学性质的研究

采用立体选择法合成了Dawson结构三取代杂多酸盐：KmH2[P2W15TiO62]·2H2O,K12[P2W15（TiO2）,O59]·8H2O,K12[P2W15Zr3O62]·6H2O和K12[P2W15（ZrO2）3O59]·5H2O,并利用红外光谱和紫外光谱对其进行了检测。用电化学方法研究了所合成杂多酸盐的氧化还原性质。实验结果表明：过氧型杂多配合物的氧化性大于非过氧型杂多配合物的氧化性。过氧型中Ti取代的杂多配合物的氧化性大于Zr取代的杂多配合物的氧化性。     

反应挤出原位制备纤维素马来酸酯

以离子液体1-丁基-3-甲基咪唑氯盐([Bmim]C)l作反应介质,采用马来酸酐对纤维素进行原位化学改性。利用双螺杆挤出机的剪切作用来提高纤维素在[Bmim]Cl中的溶解效率,并促进马来酸酐与纤维素的酯化反应。红外光谱(FTIR)结果证明了纤维素马来酸酯的生成,导致纤维素的氢键网络结构破坏,同时也破坏了纤维素的规整度,降低了纤维素的结晶度。热重分析(TGA)结果显示:马来酸酐支链阻碍了纤维素主链的运动,使改性纤维素的热稳定性明显高于未改性纤维素。当马来酸酐与纤维素质量比为0.8、螺杆转速为50 r/min时,改性纤维素在[Bmim]Cl中的溶解度达到20%,是未改性纤维素溶解度的2倍。     

吡虫啉对意大利蜜蜂学习行为的影响

[目的]吡虫啉是一种新烟碱类杀虫剂,它作用于昆虫的烟碱型乙酰胆碱受体。通过喙伸反应研究了亚致死剂量吡虫啉对意大利蜜蜂工蜂学习行为的影响。[方法]喙伸反应(PER)是研究学习行为的经典方法。吡虫啉以0.1、0.15、0.65 ng/蜂3种剂量滴蜜蜂背板,最高浓度为室内毒力测定LD5值的1/10。[结果]0.65 ng/蜂剂量吡虫啉滴背板后,蜜蜂对稀糖水的敏感性显著降低。0.15、0.65 ng/蜂剂量吡虫啉对蜜蜂学习行为有影响。研究结果表明亚致死剂量吡虫啉对蜜蜂的学习行为有影响。[结论]喙伸反应试验可应用于亚致死剂量农药对蜜蜂学习行为的研究中。     

水性涂料

与各种基材膜的正向层压性优异的有机溶剂型涂料；用于具有降低的初始黏性和高光泽的涂料组合物的防污组合物；具有好的水再分散性的粉末涂料及其形成的具有耐水性的涂膜；具有优异的耐水解性的硅酸盐组合物及由其制备的水稀释性涂料；[编者按]