泰乐菌素单克隆抗体的制备及竞争ELISA检测方法的建立

目的制备泰乐菌素(Tylosin)单克隆抗体,并建立泰乐菌素竞争ELISA检测方法。方法用羰基二咪唑将半抗原泰乐菌素分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,制备泰乐菌素免疫抗原Tylosin-BSA和检测抗原Tylosin-OVA,用紫外光谱扫描检测Tylosin-BSA偶联物,辣根过氧化物酶标记Tylosin-OVA偶联物。采用杂交瘤技术,制备特异性抗泰乐菌素单克隆抗体,建立泰乐菌素竞争ELISA检测方法。结果筛选出2株稳定分泌抗泰乐菌素单抗的杂交瘤细胞株3E4和2G10,2G10分泌的单抗腹水效价为6×10-4,抗体类型为IgG1型,轻链为κ链,在酸、碱及热条件下均较稳定。选择该单抗建立了泰乐菌素竞争ELISA检测方法。该方法灵敏度达50ng/ml,标准曲线线性关系良好(r=0.9827),且特异性、稳定性较好,准确性、精密性较高。结论已成功制备了泰乐菌素单克隆抗体,并建立了竞争ELISA检测方法,可用于动物源性食品中残留泰乐菌素含量的检测。     

臭氧氧化去除水中泰乐菌素的研究

探究了臭氧预氧化方法对水环境中普遍存在的泰乐菌素的去除效率,研究了泰乐菌素初始浓度、溶液p H值、臭氧投量和腐殖酸对臭氧氧化去除泰乐菌素效率的影响。结果表明,氧化反应20 min后,泰乐菌素的去除率基本稳定。随泰乐菌素初始浓度的增加,其去除率呈降低趋势;溶液p H值对泰乐菌素的去除率存在一定影响,泰乐菌素的去除率随溶液p H的增加而降低;随臭氧投量的增加,泰乐菌素去除率也随之升高;腐殖酸对泰乐菌素的氧化去除有一定的抑制作用,且浓度越高,抑制作用越强烈。     

臭氧氧化去除水中泰乐菌素的研究

探究了臭氧预氧化方法对水环境中普遍存在的泰乐菌素的去除效率,研究了泰乐菌素初始浓度、溶液p H值、臭氧投量和腐殖酸对臭氧氧化去除泰乐菌素效率的影响。结果表明,氧化反应20 min后,泰乐菌素的去除率基本稳定。随泰乐菌素初始浓度的增加,其去除率呈降低趋势;溶液p H值对泰乐菌素的去除率存在一定影响,泰乐菌素的去除率随溶液p H的增加而降低;随臭氧投量的增加,泰乐菌素去除率也随之升高;腐殖酸对泰乐菌素的氧化去除有一定的抑制作用,且浓度越高,抑制作用越强烈。     

甲基紫三波长叠加共振光散射法测定酒石酸泰乐菌素的含量

在Clark-Lubs缓冲溶液中，基于酒石酸泰乐菌素与阳离子甲基紫试剂发生电荷转移反应，建立了三波长叠加共振光散射法(TRLS)测定酒石酸泰乐菌素含量的新方法。研究发现，在实验条件下，共振光散射图谱中会产生3个特征散射峰，分别在322、510、628 nm。在322、510、628 nm处，酒石酸泰乐菌素的质量浓度都在0.04～0.2 mg/L内呈线性关系；相关系数分别为0.999 4、0.999 5、0.999 2;检出限分别为0.036、0.040、0.038 mg/L。而采用三波长叠加法测定时，酒石酸泰乐菌素的质量浓度在0.04～0.2 mg/L内呈线性关系，相关系数为0.999 9,检出限为0.013 mg/L,检出限为单波长检测法的3倍。因建立的TRLS新方法简便、省时、灵敏度高，故可用于酒石酸泰乐菌素含量的大批量检测。     

一种制备高纯度替米考星的方法研究

以泰乐菌素为原料,通过酸化水解制得脱碳霉糖泰乐菌素(Desmycosin)。脱碳霉糖泰乐菌素通过调碱转入有机相,然后向有机相中加入一定量的3,5-二甲基哌啶缓慢升温至70℃恒温滴加甲酸催化合成替米考星。合成液通过萃取、反萃取等措施制备高纯度替米考星。     

畜禽专用抗生素——替米考星

替米考星是1种较新的由泰乐菌素半合成的大环内酯类畜禽专用抗生素,具有广谱抗菌作用,同泰乐菌素有相似的广谱抗菌活性,对革兰氏阳性菌、某些革兰氏阴性菌、支原体、螺旋体均有抑制作用,对巴氏杆菌、支原体的抗菌活性明显强于泰乐菌素。     

提高3-O-乙酰基4”-O-异戊酰基泰乐菌素产量和降低生产成本的方法

本发明是在发酵法合成泰乐菌素衍生物3-O-乙酰基4”-O-异戊酰基泰乐菌素时，向发酵液中补入高浓度的L-亮氨酸溶液或固体悬浮液和高浓度的泰乐菌素溶液，及使用成本较低的液化淀粉液及成本较低的泰乐菌素半成品或中间体作为发酵过程中的补料物，比现有工艺过程显著提高产量及降低生产成本。     

小分子醇/盐二元双水相体系中盐酸土霉素的分配行为

在双水相体系研究的基础上,建立了乙醇与正丙醇和磷酸二氢钠形成的二元双水相体系萃取盐酸土霉素的新方法,考察了小分子醇的用量、盐种类和浓度、pH值、温度以及静置时间对盐酸土霉素分配行为的影响。结果表明,小分子醇/盐二元双水相体系可用于抗生素分配行为的研究,其中体系组成为乙醇和正丙醇,磷酸二氢钠浓度在48%,pH值在4～5,温度25℃,以及静置12 h左右,盐酸土霉素在该二元双水相体系中的分配系数达到21.95,萃取率达86.09%。     

二元小分子醇/盐双水相体系中磺胺嘧啶的分配行为

在双水相体系研究的基础上,建立了乙醇与正丙醇和硫酸铵形成的二元小分子醇/盐双水相体系萃取磺胺嘧啶的新方法,考察了盐种类和浓度、pH值以及静置时间对磺胺嘧啶分配行为的影响。结果表明,二元小分子醇/盐双水相体系可用于磺胺类抗生素分配行为的研究,体系组成为乙醇与正丙醇体积比例为1∶1,硫酸铵浓度为40%,pH值在4.0～5.0,温度25℃,静置10 h,磺胺嘧啶在该二元双水相体系中的分配系数达33.49,萃取率达96.97%。     

紫外分光光度法测定延胡索酸泰妙菌素预混剂的含量

实验建立了紫外分光光度法测定延胡索酸泰妙菌素预混剂的含量。实验结果表明,延胡索酸泰妙菌素的最大吸收波长为202nm,在此波长处,延胡索酸泰妙菌素在2.5~15.0μg/mL浓度范围内,其吸光度与浓度呈现良好的线性关系:A=0.0271c+0.0521,r2=0.9999(n=6)。该方法操作简单、测定快速,结果准确,可用于延胡索酸泰妙菌素预混剂的含量测定。