卵黄免疫球蛋白IgY的研究及应用

随着生物化学和免疫学检测技术的飞速发展，实验用抗体的制备和纯化已成为一个非常重要的问题。目前在各种检测实验中，主要是应用哺乳动物的血清抗体，由于哺乳动物抗体本身的一些特点，使其对实验产生内源性干扰，影响检测的敏感性［1］。Williams等1962年研究发现，当用某种抗原免疫产蛋母鸡时，鸡可产生相应的血清抗体并通过产蛋的方式将抗体垂直遗传给后代而储存于蛋黄中［2］。由于卵黄中仅有IgG类抗体，故称其为卵黄免疫球蛋白lgG（YolKIgG简称为IgY）［3］。至今尚未证实蛋黄中有IgA和lgM的存在，只有少量存在于蛋清中［4］。…     

病毒灭活后抗淋巴细胞免疫球蛋白的稳定性

目的 观察经过病毒灭活后抗淋巴细胞免疫球蛋白(ALG)的稳定性。方法 取各项指标均符合国家暂行规程要求的ALGc放2-8℃保存,在不同时间进行质量测试。结果 24个月时,制品的花环抑制效价仍不低于1:4000,淋巴细胞毒效价不低于1:1 000。其纯度和IgG各组分含量与试验之前相比,差异无显著意义,且其他各项主要指标也均达到国家制检规程的标准。结论 经过病毒灭活后制品的稳定性良好。     

蓉生静注人免疫球蛋白(pH4)质量稳定性考察

目的考察蓉生静注人免疫球蛋白(pH4)存放于不同温度、不同时期的质量稳定性,以及内包装材料对制品质量稳定性的影响。方法将静注人免疫球蛋白(pH4)分别放置于2~8℃和20~25℃的条件下,定期取样。依照《中国生物制品规程》(2000年版)的相应标准进行检测,并比较进口与国产模制瓶灌装对产品质量的影响。结果静注人免疫球蛋白(pH4)在2~8℃条件下存放2年后,与出厂时的检验结果比较,质量指标无显著变化;在20~25℃条件下存放2年后,分子大小分布、抗-HBs效价、浊度等质量指标变化显著。静注人免疫球蛋白(pH4)灌装于进口模制瓶的质量稳定性优于国产模制瓶。结论蓉生静注人免疫球蛋白(pH4)保存在2~8℃在有效期内质量稳定。     

静注人免疫球蛋白（pH 4）工艺优化后产品的稳定性

目的 评价静注人免疫球蛋白（pH 4）[human immunoglobulin(pH 4)for intravenous injection,IGIV,简称静丙]工艺优化后产品的稳定性。方法 在多批次规模化生产中,采用A滤板和B滤膜分别对不同分离阶段蛋白组分进行过滤,以降低产品中免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA)残留量。对成品进行物理（外观、可见异物、不溶性微粒检查及热稳定性试验）、化学检定[蛋白质含量、纯度、分子大小分布、抗-HBs、白喉抗体、激肽释放酶原激活剂（prokallikrein activator,PKA）、抗补体活性（anti-complement activity,ACA）及抗-A和抗-B血凝素抗体效价、IgA残留量]及加速和长期稳定性试验。结果 采用优化工艺生产的静丙关键质量指标与正常工艺生产批次相比,均无明显差异,IgA残留量明显下降（t分别为3.992和11.215,P均<0.05）。加速稳定性和长期稳定性试验工艺优化后的静丙各项检测结果均合格,符合《中国药典》三部（2020版）中相关规定。结论 工艺优化后的静丙在有效降低IgA残留...     

抗甲型肝炎病毒卵黄免疫球蛋白的制备及应用

目的制备抗甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)卵黄免疫球蛋白(immunoglobulin of yolk,IgY),并建立双抗体夹心ELISA法,用于测定甲肝疫苗中的HAV抗原含量。方法用纯化的HAV免疫健康产蛋母鸡,制备抗HAV IgY,采用多步骤分离纯化IgY,紫外分光光度法测定纯化IgY的蛋白含量,还原型SDS-PAGE分析IgY的相对分子质量及纯度,间接ELISA法检测IgY的效价、特异性及其热稳定性和酸碱稳定性。以纯化的IgY作为包被抗体,HRP标记的抗HAV单克隆抗体作为二抗,建立双抗体夹心ELISA法,对疫苗生产过程中的HAV抗原含量进行测定,并与市售ELISA试剂盒的检测结果进行比较。结果亲和层析纯化后的抗HAV IgY浓度为3.67 mg/ml;重链和轻链的相对分子质量分别为66 000和27 000,纯度为96.78%;效价最高为1∶16 000;纯化的抗HAV IgY只与HAV呈阳性反应,与脊髓灰质炎病毒和肠道病毒71(enterovirus 71,EV71)均不反应;纯化的抗HAV IgY在25⁷0℃条件下处理15 min及经pH 3.070℃条件下处理15 min及经pH 3.0¹0.0的Tris-HCL缓冲液处理2 h,其抗体效价基本无影响。建立的双抗体夹心ELISA法HAV浓度在15.6210.0的Tris-HCL缓冲液处理2 h,其抗体效价基本无影响。建立的双抗体夹心ELISA法HAV浓度在15.62² 000.00 ng/ml范围内,HAV浓度的对数值与A450值之间呈线性相关,R2=0.935,最低检测量为7.81 ng/ml,与市售试剂盒检测结果具有良好的相关性,相关系数为0.952 7。结论制备的抗HAV IgY浓度、纯度、效价均较高,特异性较强,稳定性良好,建立的双抗体夹心ELISA法可用于检测甲肝疫苗生产过程中HAV的抗原含量。     

抗流感病毒鸡卵黄免疫球蛋白IgY的制备和性质

用流感病毒免疫产蛋鸡,获得的免疫卵黄经两步盐析和一步凝胶过滤分离得到的IgY经SDS-PAGE分析其纯度在95%以上,纯化的IgY经胃蛋白酶(pH=4 0,37℃)酶解后,得到的片段抗体为Fab。采用竞争抑制ELISA法对IgY和Fab的免疫反应活性进行了对比,表明IgY经胃酶切解后保留了约70%的反应活性。     

大规模生产静脉注射用人血免疫球蛋白工艺的研究

本文介绍一种制备静脉注射用人血免疫球蛋白(IVIG)的工艺。工艺流程为:以低温乙醇法的 FⅢ上清为原料,经 NMWL 为3万的超滤膜脱醇,DEAE-Sephadex-A-50吸附,pH3.8～4.0条件下超滤,最后添加麦芽糖等稳定剂冻干。本工艺具有收率高、质量好、生产过程简单温和、经济效益显著等特点,适于大规模生产。     

防龋型免疫球蛋白的研究现状

研究了防龋型免疫球蛋白的现状，综述了免疫球蛋白的稳定性、生产和制备方法、作用机理及其应用等，指出在pH值为5—7时比较稳定，采用胶囊技术可以保护IgY的活性不受外界影响，可与变形链球菌表面抗原特异性结合，直接抑制其生长繁殖，并抑制牙菌斑的形成，从而获得防龋的效果，可应用在防龋、美白、清新等类型牙膏中。对防龋型免疫球蛋白的发展前景作了大胆预测。     

乙型肝炎人免疫球蛋白的应用研究

本文就乙型肝炎免疫球蛋白应用效果、作用机理及应用中存在的问题等作了全面综述。     

抗轮状病毒IgY的研制

目的用鸡卵黄制备抗轮状病毒（ＲＶ）免疫球蛋白,预防和治疗婴幼儿ＲＶ感染。方法制备ＲＶ 抗原,通过不同途径免疫母鸡,几种纯化方法联合应用从鸡卵中提取特异性鸡卵黄抗体（ＩｇＹ）,进行理化学检定及动 物效力实验。结果免疫母鸡均可产生特异性ＩｇＹ,纯度可达９１％以上,产量为４４ｍｇ／蛋;可保护乳鼠兔受ＲＶ攻击; ＩｇＹ耐热、耐酸,室温保存半年、４℃两年效价不变。结论已成功地应用ＲＶ免疫母鸡制备出高效价特异性抗ＲＶ－ＩｇＹ。     

鸡卵抗体(IgY)理化特性的研究

本文研究了抗脊髓灰质炎病毒Ⅲ型鸡卵抗体（IgY）的理化特性，实验证明IgY在室温条件下能保持活性6个月，经巴氏消毒后抗体活性不丧失，并且具有很好的耐酸性，研究结果提示特异性IgY可作为良好的婴幼儿食品添加剂。     

鸡卵黄抗体(IgY)的诱导

目的　获得鸡卵黄抗体（Ｉｇｙ）,并研究该抗体在鸡的黄液中表达的进程。方法　用吗啡—牛血清蛋白 结合物为模型抗原对３０周龄产蛋鸡进行免疫诱导,用ＥＬＩＳＡ间接法测定不同时间的抗体滴度。结果全程免疫过 程中白蛋白抗体最高滴度为１：１２８００,吗啡抗体最高滴度为 １：１６００,经 ５次免疫后（４２周龄）抗体滴度不再升高。结论　为使目的抗体在鸡卵黄液中持续而高质量诱导奠定基础。     

强氧化剂对高铁酸盐的稳定性研究

在新配制的高铁酸盐溶液中添加强氧化剂,通过对比试验筛选出具有最佳稳定作用的强氧化剂;对于过硫酸盐系列强氧化剂,以氧化剂种类、温度及添加量作为考察因素,做正交试验,确定最佳试验参数。试验结果表明电极电位高于高铁酸盐或在高铁酸盐附近的强氧化剂可有效降低高铁酸盐的分解速率,添加0.5%Na2S2O8,高铁酸盐溶液的分解率较空白可降低54.87%;S2O28-可有效抑制高铁酸盐碱性稀溶液的分解,在相同的存储条件下,以添加Na2S2O8的稳定效果最佳,且添加量越大,稳定效果越好;温度对试验结果影响最大,温度越高,分解速率越快。这些结论为高铁酸盐的长时间稳定保存提供了有效的试验依据。     

4，4′—苯二甲酰基双—PMP的质谱及其稳定性研究

本文对三个新型螯合萃取剂──４，４′—苯二甲酰基双—ＰＭＰⅠ～Ⅲ的质谱中代表化合物的主要碎片离子的裂解过程、分子离子峰的强度及其稳定性等进行了分析和研究，发现Ｍ＋丰度的大小与试剂的稳定性呈线性关系。     

抗氯霉素卵黄抗体的制备及其分离纯化

将合成的氯霉素(CAP)与牛血清白蛋白(BSA)的偶联物(CAP-BSA)作为免疫抗原注射到母鸡体内得到氯霉素卵黄抗体(IgY). 比较了不同的提取方法,用优化的辛酸-硫酸铵沉淀法从卵黄液中初步提取卵黄抗体. 选用3,3￠-二氨丙基亚胺(DADPA)作为亲和凝胶与配基氯霉素之间的"间隔臂",合成了分离纯化抗氯霉素特异性IgY的亲和层析柱. 将IgY粗品经过亲和层析柱,得到的特异性IgY的抗体活性提高了10倍,收率约为3.3%.     

无壳弹发射药安定性的研究

采用差热分析、五秒延滞期爆发点的测定和热减量实验 ,综合比较了无壳弹发射药和几种参比火药的安定性 ,得到了评价无壳弹发射药安定性的定性、定量结果。这对无壳弹的配方设计、贮存及实际应用有重要的指导意义     

Destabilization of Egg Yolk Emulsion After IgY Removal Through Enzymatic Treatments

The objective of this study was to destabilize the protein–lipid complex in egg yolk precipitate obtained after the removal of soluble proteins, referred to as the pellet, through enzymatic treatment for further phospholipids extraction. A combination of proteolytic and lipolytic enzymes was applied to release the lipids from the pellet or weaken the pellet emulsion. Emulsions prepared using Protease P/Lipase AY30, Protease II/Lipase AY30 and Protease M/Lipase AY30 treated pellets had larger oil droplets (78, 65, 56 µm) and higher coalescence rates (51, 41, 35 %) than those of Protex 51FP, pellet, Protex 7L and Protease A with oil droplet size of 20, 18, 15 and 13 µm and coalescence rates of 31, 8, 7.5 and 8 %, respectively. Cream and liquid subnatant fractions obtained after further centrifugation of hydrolysates were subjected to lipid analyses. Over 90 % of phosphatidylcholine (PC) present in the pellet and 80 % of that in the original egg yolk were recovered in the cream from Protease P/Lipase AY30 treatment, while the recovery of PC from the egg yolk was significantly lower in creams from Protex 7L or Protease 51FP treatments (12 and 10 %, respectively). Pellets treated with Protease M, Protex 7L or Protex 51FP in combination with Lipase AY30 led to a significant loss of PC due to the conversion of PC to lysophosphatidylcholine or its degradation. Cream fractions obtained from the study represented a better material for the recovery of PL than intact egg yolk using environmentally-friendly techniques such as supercritical carbon dioxide (SC-CO₂) extraction.     

静注甲型H1N1流感人免疫球蛋白的研制

目的研制高效价静注甲型H1N1流感人免疫球蛋白。方法用甲型H1N1流感疫苗(简称甲流)对固定供血浆者按疫苗说明书免疫后2周开始采集原料血浆,采用血凝抑制法检测原料血浆和制品的甲流抗体效价;采用柱层析法从高效价甲流免疫血浆中提取富含IgM免疫球蛋白的样品,模拟低温乙醇蛋白分离法工艺从小量混合血浆分离IgG样品,测定血浆和提取样品的甲流抗体效价,分析甲流中和抗体效价与IgG、IgM含量的对应关系,判断甲流中和抗体的免疫球蛋白类型;按本公司静脉注射人免疫球蛋白(Intravenous immunoglobulin,IVIG)生产工艺制备静注甲型H1N1流感人免疫球蛋白,并与普通IVIG及相应合并血浆的甲流抗体效价进行比较。结果筛选到甲流抗体效价≥320 HU/ml的合格血浆9 866袋,合格率达33.5%,其中抗体效价≥640 HU/ml的血浆占合格血浆的49%,血浆质量符合《中国药典》三部(2010版)"血液制品生产用人血浆规程"要求;甲流抗体效价与IgG含量呈相应比例关系,而与IgM含量无关,甲流中和抗体的免疫球蛋白类型以IgG为主;制备的甲流人免疫球蛋白制品的甲流中和抗体效价达2 560 HU/ml,为普通IVIG的197倍,其他质量指标符合《中国药典》三部(2010版)"静注人免疫球蛋白制检规程"要求。结论成功研制了静注甲型H1N1流感人免疫球蛋白,在甲流疫情得到有效控制的情况下,仍具有战略储备意义。