螺旋藻多糖的纯化和高效液相色谱分析

采用两种改进除蛋白方法得到的螺旋藻粗多糖ESPS和TSPS．分别经DE-52柱层析和Sephadex G-100柱层析分离纯化得精制多糖ESPSl、ESPS2、ESPS3和TSPS1、TSPS2;用高效凝胶渗透色谱法鉴定了各精制多糖的纯度并测定了分子量;各精制多糖经酸完全水解后,用高效液相色谱法测定了多糖的单糖组成,证明均为不同己糖构成的杂多糖．并且首次在螺旋藻多糖的单糖组成中发现有D-果糖。     

红松松子壳多糖的单糖组成及结构初步分析

采用膜分离技术对红松松子壳热水提取物进行分离纯化,经脱蛋白、脱色后得到总多糖PPSPⅠ-b,通过DEAE-52离子交换纤维素柱层析分离得到纯化组分PPSPⅠ-1,采用气相色谱和红外光谱分析了多糖样品的单糖组成及结构特征。气相色谱分析表明:PPSPⅠ-b主要由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,其物质的量比为3.40∶1.40∶0.79∶7.82∶10.67∶18.35;PPSPⅠ-1主要由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,其物质的量比为0.96∶2.30∶2.97∶10.60∶6.91。红外光谱分析表明,PPSPⅠ-1具有多糖的特征吸收峰。     

沙葱多糖的提取纯化及纯度鉴定

采用热水浸提法提取沙葱多糖,三氯乙酸法除蛋白,活性炭脱色,Sephadex凝胶柱层析纯化,收集单一峰溶液命名为SCSP,对纯化产物SCSP分别采用紫外分光光度法、纸层析法、比旋光度法、凝胶柱层析4种方法联合检验其纯度,结果表明,在波长260nm和280nm处无核酸和蛋白的明显吸收,纸层析见单一染色海蓝色斑点,比旋光度测定结果均一致为+51.36°,凝胶柱层析结果显示出现了单一狭窄对称峰,以上纯化结果综合表明SCSP为均一组分多糖。     

石榴皮多糖的提取、纯化和结构分析

选用石榴皮为原料,在单因素实验的基础上采用正交实验优化了石榴皮多糖的提取条件;采用三氯乙酸法和大孔吸附树脂脱除石榴皮粗多糖中的蛋白质和色素;采用全自动蛋白多糖纯化系统对纯化后的石榴皮多糖进行分离,并利用红外光谱对分离的组分进行结构分析。结果表明:石榴皮多糖的最佳提取条件为乙醇体积分数20%、提取温度80℃、提取时间6h、料液比1∶20(g∶mL),在此条件下,石榴皮多糖提取率达到9.45%;三氯乙酸法脱蛋白率为88%;5种大孔吸附树脂中S-8型大孔吸附树脂的除色素效果最佳,色素去除率为75%;利用全自动蛋白多糖纯化系统分离出SLP-1、SLP-2、SLP-3三种组分;红外光谱分析表明,SLP-1组分具有甘露糖的特征吸收峰,三种组分均含有吡喃环结构。     

松茸多糖的分离纯化和美白功效研究

通过采用水提醇沉、三氯乙酸脱蛋白、分级醇沉等方法对松茸多糖提取物进行初步分离纯化,获得9个组分。用凝胶渗透色谱-十八角度激光散射联用系统和酪氨酸酶抑制法对9个组分的分子质量、多糖纯度和美白活性进行测定。通过纯度和美白功效选择最优的组分通过凝胶层析法分离纯化。结果表明,松茸多糖中分离得到TMSP-6Ⅱ,重均分子质量Mw=7.251×103D,纯度不小于95%,其具有良好的抑制酪氨酸酶活性,IC50值为136.4 mg·L-1。     

固体发酵紫芝9519菌丝体多糖组分Ⅰ的分离纯化及结构分析研究

紫芝9519菌丝体经水浸提、脱蛋白、透析、50%的乙醇沉淀、Sephadex G-100色谱纯化得菌丝体多糖组分Ⅰ.凝胶色谱分析表明,该多糖为单一多糖,分子量为7.2×104Da,由L-阿拉伯糖、D-半乳糖、D-葡萄糖3种单糖以β-糖苷键相连接,所占比例分别为44.8%、37.47%和17.73%.     

毛泡桐(原变种)内桐皮的化学成分

对玄参科(Scrophulariaceae)泡桐属(Paulownia)植物毛泡桐(原变种)(Paulownia tomentosa(Thunb.)Steud.var.tomentosa)内桐皮的化学成分进行了研究。采用Sephadex LH-20柱色谱及薄层色谱等方法进行反复纯化分离及制备,从其70%丙酮提取物乙酸乙酯萃取相中分离到5种化合物,经理化性质和波谱解析化合物分别鉴定为:对香豆酸(ρ-coumaric acid,Ⅰ)、咖啡酸(caffeic acid,Ⅱ)、毛蕊花糖苷(verbascoside,Ⅲ)、异毛蕊花糖苷(isoverbascoside,Ⅳ)和肉苁蓉甙F(cistanoside F,Ⅴ)。化合物Ⅰ和Ⅱ为酚酸类化合物,Ⅲ～Ⅴ为差向立构苯丙素苷类化合物,Ⅰ、Ⅱ和Ⅴ首次从该植物中分离得到。     

芥菜多糖的研究（Ⅱ）──芥菜多糖的分离与鉴定

芥菜多糖的研究（Ⅱ）──芥菜多糖的分离与鉴定从芥菜中提取水溶性多糖，经脱酯，脱蛋白分离纯化后得棕色多糖，再用双氧水缓慢脱色得白色多糖。经高效液相色谱仪（日本产，岛津ＬＣ－６Ａ）分析鉴定，该多糖含有果糖、葡萄糖、半乳糖，乳糖，麦芽糖、蔗糖等组分。对棕色...     

白茅根多糖的分离纯化工艺研究

以白茅根为原料,采用超声波辅助热水浸提法提取白茅根多糖,并对其进行分离和纯化。首先对白茅根采用热水超声提取,80%乙醇沉淀后得到白茅根粗多糖P80,提取率为6.81%,苯酚-硫酸法测得P80的糖含量为46.5%。对P80进行Sevag法除去蛋白、透析、冻干等操作,得到LGR80。随后使用DEAE Focurose 6FF阴离子交换柱层析对LGR80进行分离,得到LGR80-1和LGR80-2两个洗脱部位。采用Sephadex G-75凝胶柱分别对LGR80-1和LGR80-2进一步纯化,得到LGRP80-1和LGRP80-2两个多糖成分,用高效凝胶渗透色谱进行纯度检验,结果表明白茅根多糖LGRP80-1和LGRP80-2均具有较高的纯度。     

层析法纯化C群脑膜炎球菌多糖及其制备的多糖蛋白结合物的安全性和免疫原性

目的采用层析法纯化C群脑膜炎球菌多糖,以替代冷酚抽提法,并对制备的多糖蛋白结合物进行初步安全性和免疫原性评价。方法采用温和的表面活性剂去氧胆酸钠对C群脑膜炎球菌多糖进行前处理,并用Capto adhere和Capto DEAE阴离子交换凝胶柱串联,对多糖进行柱层析纯化,再通过脱盐去除残留的去氧胆酸钠,获得精制多糖。对缓冲液中的去氧胆酸钠浓度、缓冲液pH值、样品的前处理时间及离子交换流速进行优化,并对建立的层析纯化工艺进行放大,纯化3批多糖,按照《中国药典》三部(2010版)要求检测各项质控指标,并通过核磁共振-氢谱检测纯化后的多糖结构。将层析法和苯酚法纯化的多糖分别与破伤风类毒素结合,制备多糖蛋白结合物,对结合物进行异常毒性、小鼠急性毒性试验和免疫原性检测。结果经优化,确定缓冲液的去氧胆酸钠浓度为1.0%,pH值为8.0,样品前处理时间为6 h,离子交换流速为2.0 ml/min。放大工艺制备的3批C群脑膜炎球菌多糖各项检测指标均合格,多糖回收率均大于70%,明显高于苯酚法制备的多糖。核磁共振-氢谱显示,层析法与苯酚法纯化的多糖主要峰基本一致,层析法未改变多糖结构。层析法纯化的多糖制备的多糖蛋白结合物异常毒性试验合格,小鼠急性毒性试验结果与苯酚法纯化多糖制备的多糖蛋白结合物比较,差异无统计学意义(P>0.05),免疫小鼠后均具有良好的免疫原性。结论层析法分离杂蛋白操作简便,省时省力,工艺易于放大,且减少了对环境的污染,可替代苯酚抽提法用于C群脑膜炎球菌多糖的纯化。     

海洋来源真菌中二个聚酮类化合物的NMR研究

采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱以及重结晶等方法,从海洋来源真菌Penicillium sacculum发酵液的乙酸乙酯萃取部分中分离得到2个聚酮类化合物：Griseophenone B（Ⅰ）和Griseophenone C（Ⅱ）,通过1DNMR和2DNMR（HSQC,HMBC）等技术确定了化合物的结构。首次报道了化合物Ⅰ的13 CNMR数据以及化合物Ⅱ的核磁共振数据,并利用2DNMR技术对2个化合物的核磁共振信号进行了归属。化合物Ⅱ为首次从该种真菌中分离得到。     

烷基双胍硫酸盐的合成及iNOS抑制活性的测定

二腈二胺在60℃下与硫酸铜反应1 5h得配合物(Ⅰ);然后分2次加入烷基胺(间隔时间为1h)于70℃(对Ⅱa、Ⅱb)或80℃(对Ⅱc～Ⅱe)下反应10h合成了5种烷基双胍硫酸盐(Ⅱa～Ⅱe),Ⅱa、Ⅱb、Ⅱc、Ⅱd、Ⅱe的收率分别为83 75%、84 21%、88 45%、87 62%、86 51%,以元素分析、IR、NMR、UV对化合物Ⅱa～Ⅱe的结构进行了确认。对化合物Ⅱa～Ⅱe及配合物(Ⅰ)的诱生型一氧化氮合酶(iNOS)抑制活性进行了测定,结果表明,化合物Ⅱb及配合物(Ⅰ)有iNOS抑制活性,其中配合物(Ⅰ)的活性强于对照物氨基胍。     

Ⅰ型氯吡格雷硫酸氢盐的合成及晶型转换

优化了Ⅰ型氯吡格雷硫酸氢盐的合成方法,发现利用3-戊酮等溶剂在-10~-16℃反应10~16 h,能以80%左右的产率得到Ⅰ型氯吡格雷硫酸氢盐,并用熔点、红外与X衍射等方法对其进行了表征;同时还研究了Ⅰ、Ⅱ型氯吡格雷硫酸氢盐之间的相互转化。     

太空诱变对链球菌菌体多糖分子表达的影响

目的研究太空诱变对α-溶血性链球菌多糖分子表达的影响。方法采用改良的过碘酸钠法将辣根过氧化物酶(HRP)分别标记在刀豆凝集素(ConA)、麦胚凝集素(WGA)、接骨木凝集素(SNA)、蓖麻凝集素Ⅰ(RCA-Ⅰ)及植物血凝素(PHA)上,合成HRP-凝集素,检测普通型α-溶血性链球菌及太空型链球菌菌体内多糖分子的表达水平。结果太空型链球菌菌体内末端为ConA、SNA及RCA-Ⅰ所识别的多糖分子含量较普通型α-溶血性链球菌高,且差异有统计学意义;末端为WGA及PHA所识别的多糖分子含量,普通型α-溶血性链球菌较太空型链球菌稍高,但差异无统计学意义。结论太空诱变对细菌的多糖分子表达具有调控作用,为细菌多糖制品的筛选及其性能和产量的提高提供了新的途径。     

人溶菌酶-木聚糖酶融合基因在毕赤酵母中的表达

目的在毕赤酵母中表达人溶菌酶(Human lysozyme,hLY)-木聚糖酶(Xylanases,XynⅡ)融合基因。方法通过PCR技术将hLY基因与XynⅡ基因连接,中间插入肠激酶识别位点序列;将其克隆至载体pPIC9K上,构建重组表达质粒pPIC9K-XynⅡ-EKsite-hLY,经SacⅠ线性化后,电转化毕赤酵母GS115,通过G418抗性筛选得到高拷贝转化子,PCR鉴定为阳性的克隆用甲醇进行诱导;表达的融合蛋白经Sephadex G-75凝胶柱层析纯化后,用肠激酶酶切,分别采用改良舒加法和DNS法测定hLY和XynⅡ的活性。结果获得的融合基因序列与理论序列完全一致;重组表达质粒构建正确;融合蛋白的hLY和XynⅡ活性分别为170和158 U/ml,经肠激酶酶切后,hLY的活性为520 U/ml,XynⅡ的活性达244 U/ml。结论已在毕赤酵母中成功表达了XynⅡ-EKsite-hLY融合基因,经肠激酶酶切后的目的蛋白活性均有较大提高。     

氢醌双苄醚的合成

在KOH -C2 H5 OH中 ,氢醌与氯苄反应得到氢醌双苄醚 (Ⅰ )和氢醌单苄醚 (Ⅱ )的混合物。当n(氢醌 )∶n(氯苄 ) =1∶3时 ,Ⅰ的产率大于 70 % ,而Ⅱ的产率小于 5 %。红外光谱表明 ,Ⅱ比Ⅰ在 3386 .8cm- 1 处多一羟基吸收峰。     

氮浓度对新型生物电化学-颗粒污泥反应器运行的影响

探讨了新型生物电化学-颗粒污泥反应器在不同进水氮浓度下的脱氮效能与产电性能，并从颗粒污泥的关键酶活性、胞外聚合物组分以及微生物群落分布等角度系统研究了其影响机制。结果表明，COD、NO₃^--N、NO₂^--N和溶解性甲烷在第Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ阶段（进水NO₃^--N和NO₂^--N浓度分别为60 mg·L^-1和20 mg·L^-1、100 mg·L^-1和40 mg·L^-1、140 mg·L^-1和60 mg·L^-1、180 mg·L^-1和80 mg·L^-1）均得以有效去除，其中COD去除率在第Ⅳ阶段效果最佳，去除率达96%以上，NO₃^--N出水浓度在第Ⅱ阶段更为稳定，其去除率达99%以上，NO₂^--N去除率在各阶段均达99%以上；该反应器最大的功率密度与输出电压值为第Ⅳ阶段的4号格室，分别为471.2 mV·m^-3和608.1 mV。污泥疏松型胞外聚合物（LB-EPS）中多糖与蛋白含量最高为第Ⅱ阶段的5号格室，分别为13.7 mg·g^-1和14.7 mg·g^-1；1号格室污泥中辅酶F₄₂₀活性最低，进水氮浓度的增大提高了污泥中蛋白酶活性。由第Ⅰ阶段至第Ⅳ阶段，该反应器中变形菌门（Protebaoteria）相对丰度减少，而绿弯菌门（Chloroflexi）、厚壁菌门（Firmicutes）和浮霉菌门（Planctomycetes）相对丰度增加；具有脱氮作用的陶厄氏菌属（Thauera）在1号格室减少了8.64%，但该反应器脱氮效果未受到影响；甲烷丝状菌属（Methanothrix）在4号格室相对丰度增至12.3%，表明产甲烷菌可在该反应器中与其他菌群联营共存。     

Influence of nitrogen concentration on operation of a novel bio-electrochemical-granular sludge reactor

The performance of nitrogen removal and electricity generation of a novel bio-electrochemical-granular sludge reactor at different influent nitrogen concentration was investigated. The impact mechanism of granular sludge, key enzyme activity, extracellular polymer composition and microbial community distribution were systematically studied. The results showed that COD, NO₃^--N, NO₂^--N and dissolved methane were efficiently removed in stages Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ and Ⅳ (Influent NO₃^--N and NO₂^--N concentrations were 60 and 20 mg·L^-1, 100 and 40 mg·L^-1, 140 and 60 mg·L^-1, 180 and 80 mg·L^-1, respectively). The removal efficiency of COD was the highest in stage Ⅳ, and it was above 96%. The effluent concentration of NO₃^--N was the most stable at stage Ⅱ, and the removal efficiency was over 99%. The NO₂^--N removal efficiency was above 99% in each stage. In stage Ⅳ, the maximum power density and output voltage was 471.2 mV·m^-3 and 608.1 mV at the fourth compartment, respectively. The polysaccharide and protein content of LB-EPS was the highest in stage Ⅱ of the fifth compartment, 13.7 mg·g^-1 and 14.7 mg·g^-1, respectively. Coenzyme F₄₂₀ activity was the lowest in the first compartment. The protease activity of the sludge was increased due to the increase of influent nitrogen concentration. From stage Ⅰ to stage Ⅳ, the relative abundance of Protebaoteria was decreased, while the relative abundance of Chloroflexi, Firmicutes and Planctomycetes were increased. Although Thauera with denitrification effect was decreased by 8.64% in the first compartment, the nitrogen removal was still well in the reactor. The relative abundance of Methanothrix was increased to 12.3% in the fourth compartment, indicating that Methanothrix could co-exist with other bacteria in the reactor.     

红霉素肟的醚化反应活性研究

比较了双烷氧环己烷Ⅱ(1,1 二甲氧基环己烷Ⅱa,1,1 二乙氧基环己烷Ⅱb,1,1 二异丙氧基环己烷Ⅱc)和烷氧基环己烯Ⅲ(1 甲氧基环己烯Ⅲa,1 乙氧基环己烯Ⅲb,1 异丙氧基环己烯Ⅲc)2类不同的醚化剂对红霉素肟Ⅰ的保护反应。发现同类醚化剂的反应活性随着环上取代基体积的增加而提高,即Ⅱc>Ⅱb>Ⅱa和Ⅲc>Ⅲb>Ⅲa,而具有相同环取代基的烷氧基环己烯活性要比双烷氧环己烷高,即Ⅲa>Ⅱa,Ⅲb>Ⅱb,Ⅲc>Ⅱc。与目前工业上使用的Ⅱc相比,Ⅲc和Ⅲb具有进一步研发应用的前景。该文同时给出了醚化反应的优化条件:室温下,二氯甲烷为溶剂,n(盐酸吡啶)/n(Ⅰ)=1 5～2,n(Ⅱ或Ⅲ)/n(Ⅰ)=2～3。     

淡豆豉中多糖的分离纯化及结构特征研究

以中药淡豆豉为原料,采用超声法提取淡豆鼓多糖,硫酸-苯酚法检测总多糖含量。通过透析、醇沉、酶解蛋白、H2O2脱色,并经Sephadex G-100凝胶柱层析进一步纯化,得到多糖组分SPSS和SPSSII。利用凝胶渗透色谱(GPC)对其进行相对分子质量分析,红外光谱检测主要结构特征。结果表明,淡豆豉中总多糖含量为0.91%,SPSSI和SPSSII为均一性多糖,相对分子质量分别约为9500和7000,其结构具有多糖类物质的典型特征。