黑豆皮花色苷的酶法酰化制备及其稳定性分析

以黑豆皮花色苷矢车菊素-3-O-葡萄糖苷（cyanidin-3-O-glucoside，C3G）为原料，采用月桂酸为酰基供体，经酶法酰化制备具有亲脂性能的花色苷脂肪酸酰化产物。分别以黑豆皮粗提物（C3G含量35.8%）、纯化C3G样品（纯度>80%）、C3G标准品（纯度>98%）为底物进行酰化，通过改进反应溶剂体系，实现了黑豆皮粗提物中花色苷的高效酰化，酰化率达66.59%，产率达到C3G标准品酰化的75%，但工艺更为简单，底物无需纯化；酰化产物矢车菊素-3-O-葡萄糖苷月桂酸酰化物（cyanidin-3-O-glucoside-lauric acid，C3G-La）经液液萃取，纯度可达82.39%；经进一步正相硅胶分离纯化后，产物纯度达97.58%。稳定性试验发现，在pH为中性和酸性环境中，C3G-La的稳定性优于C3G，但二者在碱性和光照条件下稳定性均较差。     

蓝莓果渣花色苷提取工艺优化及其提取物的抗肿瘤活性

在单因素实验基础上,通过正交实验优化蓝莓果渣花色苷在浸提(OSE)、微波辅助(MAE)和超声辅助(UAE)提取3种提取方式下的工艺条件,并对比花色苷组分及其提取物抗肿瘤活性。结果表明:微波辅助提取法获得花色苷含量优于浸提法和超声辅助提取法,花色苷提取条件为:微波功率300W、微波时间60s、料液比为1∶40 g/mL,在此条件下,花色苷含量46.88?0.63 mg C3G/g,3种提取法均获得6种花色苷组分,分别为飞燕草素-3-葡萄糖苷、矢车菊素-3-葡萄糖苷、矢车菊素-3-芸香糖苷、牵牛花素-3-葡萄糖苷、锦葵素-3-半乳糖苷和芍药素-3,5-二己糖苷。3种提取方式获得的花色苷提取物对HepG2肝癌细胞和A549肺癌细胞生长和侵染均有抑制作用,且对A549肺癌细胞抑制效应更强。     

黑加仑花色苷的分离纯化及其热降解动力学

以黑加仑为原料,采用AB-8大孔树脂-Sephadex LH-20凝胶柱层析联用方法和液相色谱-质谱联用技术对黑加仑花色苷进行分离纯化和组分鉴定;分析了不同纯度花色苷在不同pH和温度下的降解动力学;通过1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和2,2'-联氮基-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基的清除评价了不同纯度花色苷的抗氧化能力。结果表明:黑加仑中包含飞燕草素-3-葡萄糖苷、矢车菊素-3-芸香糖苷、牵牛花素-3-葡萄糖苷、芍药素-3,5-二己糖苷和锦葵素-3-半乳糖苷5种组分。经分离纯化后最终获得2种花色苷,分别为飞燕草素-3-葡萄糖苷(A_3)和矢车菊素-3-芸香糖苷(A_4)。pH 3.0和温度50℃时,花色苷的热稳定性最强。不同纯度花色苷组分热降解均符合一级动力学模型。经大孔树脂纯化后的花色苷(A_1)、乙酸乙酯萃取后的花色苷(A_2)、A_3和A_4对DPPH自由基清除率的半数抑制浓度(IC50)分别为9.45、8.17、5.95和7.62 mg/L,而对ABTS自由基清除率的IC50分别为99.38、97.21、78.19和85.54 mg/L。     

一测多评法测定黑果小檗果实中5种花色苷含量

建立高效液相色谱一测多评法(HPLC-QAMS)测定黑果小檗果实中5种花色苷的含量。采用Welch Topsil^TM C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm);流动相为甲醇-2.5%甲酸水溶液,梯度洗脱;检测波长为520 nm;流速为0.8 mL/min;柱温为35℃;进样量为10μL。以矢车菊素-3-O葡萄糖苷为内参物,建立飞燕草素-3-O-葡萄糖苷、矮牵牛素-3-O-葡萄糖苷、芍药素-3-O-葡萄糖苷以及锦葵素-3-O-葡萄糖苷的相对校正因子,并计算各成分含量,同时与外标法测定结果进行对比。5种花色苷分别在各自浓度范围内与峰面积的线性关系良好(0.999 4≤R²≤0.999 6);平均加样回收率为99.44%～101.72%,RSD为1.32%～2.59%;6批不同产地的黑果小檗采用QAMS法与外标法所测含量无显著性差异(P>0.05)。该方法可用于黑果小檗果实中5种花色苷的含量测定。     

响应面分析法优化黑果枸杞总花色苷提取工艺及结构鉴定

以新疆产黑果枸杞为原料,采用溶剂浸提法提取黑果枸杞总花色苷。通过Box-Behnken响应面实验设计和DesignExpert8.0.6分析软件,以浸提温度、浸提时间、乙醇浓度和液料比四个因素为自变量,浸提液吸光度A为响应值,研究各个变量及其交互作用对黑果枸杞总花色苷浸提率的影响。模拟得到回归方程,并确定最佳工艺条件为:浸提温度58℃、浸提时间74min、乙醇浓度65%、液料比55:1(m L/g)。总花色苷纯化分级后,利用超高效液相色谱-电喷雾串联高分辨质谱(UPLC-DAD-ESI-QTOF-MS/MS)技术对其中流分HG-15进行研究。结果表明,黑果枸杞总花色苷HG-15流分中含有矮牵牛素-3-O-(6-O-对香豆酰)芸香糖苷-5-O-葡萄糖苷(Petunidin-3-O-(6-O-p-coumaryl)-rutinoside-5-O-glucoside)、锦葵素-3-反-对香豆酰芸香糖苷-5-O-葡萄糖糖苷(Malvidin-3-trans-pcoumaryl-rutinoside-5-O-glucoside)、飞燕草素-3-O-(6-O-乙酰)葡萄糖苷(Delphinidin-3-O-(6-Oacetyl)-glucoside)等六种主要花色苷。     

紫薯中花色苷及色素抗氧化性能的密度泛函理论研究

采用密度泛函理论中的B3LYP/6-31G(D)方法,对紫薯中两种花色苷和两种花色素(芍药-3-葡萄糖苷,矢车菊-3-葡萄糖苷,芍药色素,矢车菊色素)以及各自的脱氢自由基进行结构优化,基于分子的几何结构、酚羟基解离能BDE、HOMO和LUMO的能级及能级差△E(LUMO-HOMO)分析了紫薯中四种化合物的抗氧化活性强弱。结果表明,C4'位酚羟基为最大反应活性位点,C5、C7位酚羟基都有一定的活性,C3位糖苷上的酚羟基不具有抗氧化活性。矢车菊色素抗氧化活性大于芍药色素,矢车菊色素-3-葡萄糖苷抗氧化活性大于芍药色素-3-葡萄糖苷,且花色素抗氧化性能要优于相应的花色苷的抗氧化性能。     

树莓果渣总花色苷和总多酚微波萃取工艺及组分分析

采用响应面法中Box-Behnken设计对树莓果渣中总花色苷和总多酚微波辅助萃取工艺进行优化,并结合液相色谱-质谱联用技术对树莓果渣中花色苷组分进行鉴定,通过SEM观察经微波萃取和常规溶剂萃取后样品的微观结构。结果表明:微波辅助萃取树莓果渣中总花色苷和总多酚的最佳工艺参数为:萃取温度61℃、液料比30∶1(mL/g)和萃取时间5 min,在该条件下,树莓果渣总花色苷和总多酚含量分别为4.14 mg C3G/g和15.88 mgGAE/g。经微波萃取后样品细胞结构遭到严重破坏,而经传统的溶剂萃取后样品细胞结构保存完好,且微波法所得的树莓果渣总花色苷和总多酚含量明显较高。经鉴定树莓果渣中含有6种花色苷组分,分别为飞燕草素-3-葡萄糖苷、矢车菊素-3-芸香糖苷、牵牛花素-3-葡萄糖苷、芍药素-3,5-二己糖苷、芍药素-3-(6-丙二酰)-葡萄糖苷和天竺葵素-3-(6-丙二酰)-葡萄糖苷。     

树莓果渣总花色苷和总多酚微波萃取工艺

采用响应面法中Box-Behnken设计对树莓果渣中总花色苷和总多酚微波辅助萃取工艺进行优化，并结合液相色谱-质谱联用技术对树莓果渣中花色苷组分进行鉴定，通过SEM观察经微波萃取和常规溶剂萃取后样品的微观结构。结果表明，微波辅助萃取树莓果渣中总花色苷和总多酚的最佳工艺参数为：萃取温度61 ℃、液料比30:1 mL/g和萃取时间5 min，在此条件下，树莓果渣总花色苷和总多酚含量分别为4.20 mg C3G/g和16.05 mg GAE/g。经微波萃取后样品细胞结构遭到严重破坏，而经传统的溶剂萃取后样品细胞结构保存完好，且微波法所得的树莓果渣总花色苷和总多酚含量明显较高。经鉴定树莓果渣中含有6种花色苷组分，分别为飞燕草素-3-葡萄糖苷、矢车菊素-3-芸香糖苷、牵牛花素-3-葡萄糖苷、芍药素-3.5-二己糖苷、芍药素-3-(6-丙二酰)-葡萄糖苷和天竺葵素-3-(6-丙二酰)-葡萄糖苷。     

体外消化对蓝莓提取物抗氧化、抗癌及组分的影响

以蓝莓为原料,考察了体外消化前、后蓝莓提取物(总酚和花色苷)含量、抗氧化性、抗癌作用及花色苷组成的变化,并推测了花色苷的降解途径。分别采用福林-酚法和pH示差法测定总酚和花色苷含量;以脂质体的抑制率、DPPH和ABTS+自由基清除能力评价体外消化前后提取物的抗氧化能力;利用高效液相色谱-电喷雾二级质谱联用技术分析花色苷组成。结果表明,与未经消化的提取物相比,经肠道消化后样品总酚含量增加47.21%,花色苷含量降低71.82%,脂质体的抑制率、DPPH和ABTS+自由基清除率分别提高38.45%、29.41%和29.12%;对Hep G2肝癌细胞、A549肺癌细胞和Hela人宫颈癌细胞的生长抑制作用显著增加,蓝莓花色苷组分由12种降为9种。对胃肠消化花色苷的降解过程推测发现,矢车菊素-3-葡萄糖苷降解形成槲皮素的过程与天竺葵素-3-葡萄糖苷降解成山柰酚的过程机制相同。     

金边桑叶中矢车菊素-3-O-(2″-没食子酰基)-β-吡喃半乳糖苷的提取分离及结构鉴定

采用醇提水沉法富集金边桑叶中的总花色苷,运用Sephadex LH-20凝胶柱色谱、制备型高效液相色谱等技术对花色苷主成分矢车菊素-3-O-(2″-没食子酰基)-β-吡喃半乳糖苷(Cy3galloylGa)进行分离,使用紫外光谱(UV)、超高效液相色谱-电喷雾串联质谱(UPLC-ESI-MS/MS)以及核磁共振波谱等技术对其结构进行鉴定,并利用薄层色谱、高效液相色谱等方法分析Cy3galloylGa纯度。结果表明,Cy3galloylGa纯度为97.3%,基本满足质量控制等相关研究的需要。