大肠杆菌生产重组极耐热木聚糖酶的诱导条件及其酶学性质

构建重组菌(JM109／pTre-99A-xylIV)作为极耐热木聚糖酶的生产菌株，研究了IPTG诱导时间、IPTG浓度、重组菌生长的不同阶段加IPTG和温度对重组菌生产极耐热木聚糖酶的影响以及它的酶学性质．结果表明，IPTG诱导8h后极耐热木聚糖酶的表达量基本维持不变，0．5～5mmol／L浓度的IPTG诱导重组菌表达极耐热木聚糖酶的效果基本相同；当重组菌生长到OD600为1．2左右时加IPTG诱导最好，诱导温度对极耐热木聚糖酶表达水平的影响不大．重组耐热木聚糖酶的最适反应pH值为5．4～5．8，重组极耐热木聚糖酶的最适反应温度大于100℃，重组极耐热木聚糖酶在pH值4．2～7．5都比较稳定，重组极耐热木聚糖酶的温度稳定性好，在90℃下保温2h后残存酶活还有90％。     

DNA聚合酶基因pfu的克隆及初步表达

通过分子克隆技术从嗜热极端微生物Pyrococcus furiosus中克隆出高热稳定性的pfu DNA聚合酶基因，琼脂糖凝胶电泳显示基因片段的长度为2．3kb，将其转化入大肠杆菌中并获得初步表达。重组酶成功地扩增了800bp的DNA片段。     

纺织用嗜热内切-1,4-β-葡聚糖酶 在大肠杆菌中的重组表达、纯化与酶学性质

首先从Pyrococcus horikoshii中克隆出编码热稳定性的内切纤维素酶基因，以载体pet21a为表达质粒， 构建重组质粒pet21a-1171，并转化至大肠杆菌BL21(DE3)plys中进行表达，目的基因得到明显的可溶性表达，通 过加热变性处理和离心后，重组酶纯度达到80%以上，随后对加热处理后的粗酶液进行简单酶活测定，结果表明， 最适反应温度为95℃，与国外文献报道相一致，嗜热内切-1,4-β-葡聚糖酶成功得到重组可溶性表达。     

嗜酸乳杆菌和嗜热链球菌混菌发酵合成共轭亚油酸的动力学

利用Logistic方程建立发酵过程中菌体生长和共轭亚油酸合成的动力学模型;应用Origin 8.0对实验数据进行处理,得到了嗜酸乳杆菌和嗜热链球菌混菌发酵合成共轭亚油酸动力学的模型及参数,相关系数R2分别为0.985 09和0.986 75,说明动力学模型与实验数据拟合较好,基本反映了嗜酸乳杆菌和嗜热链球菌混菌合成共轭亚油酸的发酵过程。     

提高原油采收率的耐热产多糖基因工程菌构建

为了提高用于微生物采油的掺水不溶性多糖的JD菌的耐温性能,将嗜热质粒pET-ecoRRF和pET-tteRRF转化至菌株JD中,用卡纳霉素筛选转化子.在耐热性初步鉴定中,所构建的菌株可在45 ℃下生长;再进行Western-blot检测确认,结果表明,RRF基因有高量的表达.RRF基因转化到JD菌中有较好的表达,提高了目标菌株的耐热性能,耐热范围提高了5～8 ℃.由于Enterobacter sp. 和Escherichia coli的亲缘关系较近,所以将Escherichia coli中的RRF基因在JD菌中表达效果比Thermus thermophilus中的基因表达效果要好.最终将野生JD菌改造成了一株能够在45 ℃耐热、产多糖的基因工程菌.     

外源基因在噬夏孢欧文氏菌中的表达

用CaCl2法制备噬夏孢欧文氏菌(Erwinia uredouora)感受态细胞，热激处理可使质粒pACYC184转入噬夏孢欧文氏菌细胞，转化率为656 cfu／μg DNA，转入的质粒可以在细胞中稳定存在，并随着细胞分裂而复制，质粒上的氯霉素抗性基因在其启动子的控制下能够高效表达，氯霉素乙酰转移酶可达噬夏孢欧文氏菌菌体总蛋白的30．269／6。噬夏孢欧文氏菌可以作为一种新的原核表达系统。     

br基因的定点突变与表达

细菌视紫红质(bacteriorhodopsin BR)是极端嗜盐菌(Halobacterium halobium)紫膜上的一种光能转换色素蛋白，是一种极有前途的生物光电材料．野生型BR蛋白达不到实用光电材料的要求，因此，通过对细菌视紫红质基因(br基因)的定点改造，构建和表达BR突变体成为生物光电材料研究中的一个热点．以野生型br基因为模板，通过连续PCR的方法向br基因引入一个点突变，并将之克隆至pUCl9载体中．将经测序鉴定的br突变基因重组到穿棱质粒pNov—R中并转化BR缺陷型嗜盐菌L33，得到紫色阳性克隆．经PCR分析和Western杂交检测表明，阳性克隆中构建的br突变基因获得了表达．     

聚晶金刚石热稳定性的研究

通过对3种聚晶金刚石在空气中差热和热重曲线的分析，了解了其在空气中的氧化方式．通过扫描电镜对高频感应加热的复合片进行了形貌观察，以了解其热损伤的程度．结合聚晶金刚石的差热曲线和SEM照片，确定以差热曲线的起始氧化温度作为其热稳定性的表征温度．结果表明：对应于复合片SYNDITE CTB002、CTB010、CTB025，热稳定性表征温度分别为650、690、720℃．     

复合酸奶中乳酸菌总菌数与嗜酸乳杆菌数的测定

在培养基中加入番茄汁和脱脂牛奶，可以缩短乳酸菌总菌数的测定时间，培养基中添加０．１－０．２％的胆酸盐，嗜酸直菌能够生长，保加利亚杆菌和嗜热链球菌不能生长，用这种办法可以专一地测出嗜酸杆菌数量。     

IIb型与Ib型金刚石热稳定性比较

通过在铁基触媒中加入氮化硼的方法，高温高压合成了IIb型金刚石．用光学显微镜对IIb型金刚石与Ib型金刚石的单晶形貌结构进行观察．利用冲击韧性测定仪、静压强度仪及差热分析仪对IIb型金刚石与Ib型金刚石在空气中的热稳定性进行了系统的对比研究．结果一致表明，合成的IIb型金刚石较Ib型金刚石不仅具有优异的热冲击韧性和静压强度，而且具有较好的热稳定性，并通过差热分析提出了进一步提高金刚石热稳定性的有效地途径．金刚石的热分解过程与其重量的损失是同步的，表明失重是由金刚石石墨化和氧化引起的．