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1.  新城疫F蛋白基因工程疫苗的研究现状  
   陶静  叶红《Canadian Metallurgical Quarterly》,2011年第39卷第17期
   新城疫(Newcastle disease,NDV)是当今世界上最严重的禽类传染病之一,被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的传染病.同预防其他传染病一样,新城疫的主要防控手段仍是免疫接种.F蛋白是构成新城疫病毒(NDV)致病性的分子基础之一.综述了国内外新城疫F蛋白基因工程疫苗的研究进展.    

2.  新城疫病毒F48E8株HN基因的克隆和序列分析及与国外NDV HN基因的同源性比较  
   李太元  吕杰  《粉末涂料与涂装》,2001年第14卷第2期
   目的 克隆NDV F48E8株HN基因,与国外NDV HN基因进行比较分析。方法 提取RNA,应用RT-PCR一次性扩增出NDV F48E8株的全长HN基因,将该HN基因插入pKS(-)后进行克隆并测序。结果 NDV F48E8株的HN基因核苷酸长度为1713bp,编码571个氨基酸,有5个糖基化位点,12个极保守的半胱氨酸残基,与国外发表的NDV序列相符。结论 NDV F18E8株HN蛋白基因与国外性遥NDV HN蛋白基因核苷酸同源性在83.3%-89.2%之间,的氨基酸同源性在87.6%-91.1%之间。    

3.  新城疫病毒F_(48)E_8株HN基因的克隆和序列分析及与国外NDV HN基因的同源性比较  被引次数:2
   李太元  金宁一  丁壮  王兴龙  金扩世  吕杰  米志强  殷震《粉末涂料与涂装》,2001年第2期
   目的 克隆NDV F48E8株HN基因,与国外NDV HN基因进行比较分析。方法 提取 RNA,应用 RT-PCR一次性扩增出NDV F48E8株的全长HN基因,将该HN基因插入pKS(-)后进行克隆并测序。结果 NDV F48E8株的HN基因核苷酸长度为1713bp,编码571个氨基酸,有5个糖基化位点,12个极保守的半胱氨酸残基,与 国外发表的NDV序列相符。结论NDVF18E8株HN蛋白基因与国外发表的NDV HN蛋白基因核苷酸同源性在 83.3%~89.2%之间,推导的氨基酸同源性在87.6%-91.1%之间。    

4.  3株新城疫病毒体外对人喉癌Hep-2细胞杀伤效应的比较  
   姜艳华  樊晓晖  黄川  宋德志  高灵茜  杨哲  黄企光  赖振屏  罗金莲《中国生物制品学杂志》,2009年第22卷第1期
   目的比较新城疫病毒(NDV)强毒株D817、弱毒株7793和La Sota疫苗株对人喉癌Hep-2细胞的杀伤效应。方法3株病毒经扩增、噬斑纯化后,分别感染Hep-2细胞和喉正常组织细胞,一定时间后,显微镜下观察细胞形态变化,MTT比色法检测病毒对细胞的杀伤效应。结果3株病毒均能在Hep-2细胞中增殖并杀伤细胞,杀伤效应以D817株最高,La Sota株其次,7793株最低,且差异均无统计学意义。杀伤效应与病毒剂量和作用时间呈正相关,显微镜下可见明显的细胞病变。而对喉正常组织细胞的杀伤效应不明显。结论NDV D817株和7793株对喉癌细胞的杀伤效应与La Sota疫苗株相似,而对喉正常组织细胞的杀伤效应不明显,有望成为喉癌生物学治疗新的候选病毒株。    

5.  新城疫病毒自然宿主细胞膜受体的鉴定  
   刘伟  丁壮  宣华  丛彦龙  宋战昀  李少丽《中国生物制品学杂志》,2008年第21卷第8期
   目的鉴定鸡源副黏病毒F48E9株的自然宿主细胞膜受体。方法采用蛋白膜提取试剂盒提取鸡胚成纤维细胞膜蛋白,用改进的间接ELISA方法检测鸡源副黏病毒分离株F48E9与细胞膜的结合活性,利用病毒铺覆蛋白印迹技术(VOPBA)鉴定新城疫病毒(NDV)的自然宿主细胞膜受体。结果NDV与鸡胚成纤维细胞膜有很强的结合力,在转印鸡胚成纤维细胞膜蛋白的PVDF膜上有几条明显的疑似受体条带,相对分子质量介于35000~60000之间。结论初步鉴定了NDV自然宿主细胞膜的受体,其疑似受体蛋白的性质及在新城疫病毒致病中的作用尚有待进一步研究。    

6.  新城疫病毒TL1株F、HN蛋白基因共表达对细胞融合的影响  
   王学理  任林柱  李晓艳  王兴龙《中国生物制品学杂志》,2009年第22卷第10期
   目的分析新城疫病毒TL1株F、HN蛋白基因共表达对细胞融合的影响。方法在6孔细胞培养板上将4种重组表达质粒以pCI-M+pCI-NP+pCI-F和pCI-M+pCI-NP+pCI-F+pCI-HN两种组合分别共转染BHK-21细胞,转染后48h,光镜观察细胞融合现象。在25cm2细胞培养瓶中,将4种重组表达质粒以上述两种组合分别共转染BHK-21细胞,转染后48h,收集细胞上清,离心后,电镜观察有无病毒样颗粒。结果以pCI-M+pCI-NP+pCI-F+pCI-HN组合共转染BHK-21细胞,可以观察到明显的细胞融合现象,而以pCI-M+pCI-NP+pCI-F组合共转染的BHK-21细胞则未出现细胞融合现象。两种组合共转染均形成了新城疫病毒样颗粒,包含HN蛋白基因的4种重组质粒组合共转染形成的病毒样粒子更接近于真实的新城疫病毒粒子。结论HN蛋白基因具有促进细胞融合的功能,新城疫病毒样颗粒的成功表达为新城疫病毒致病机理和新型疫苗的研究奠定了基础。    

7.  新城疫病毒一步法RT-PCR检测方法的建立及初步应用  
   梁瑾  程福亮  陈甜甜  宿志瑞  范群平《中国生物制品学杂志》,2013年第26卷第2期
   目的建立新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)一步法RT-PCR检测方法,并进行验证及初步应用。方法根据NDV F基因序列,设计合成了1对特异性引物,建立一步法RT-PCR检测方法,并验证其特异性及敏感性;应用建立的方法对23份疑似新城疫(Newcastle disease,ND)病料进行检测,并与血凝及血凝抑制试验检测结果进行比对。结果建立的一步法RT-PCR同时检测NDV、传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)和禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)H9亚型,仅NDV为阳性,IBDV和AIV H9均为阴性;该方法最低可检出约4 pg的NDV RNA;23份疑似ND病料,一步法RT-PCR检出11份阳性,血凝及血凝抑制试验检出13份阳性,两种方法的阳性符合率为85%。结论建立了NDV一步法RT-PCR检测方法,该方法特异性良好,敏感度较高,用时较短,可从分子水平上对NDV进行早期快速诊断和流行病学调查。    

8.  新城疫强毒株F蛋白裂解位点串联基因的构建及其原核表达  被引次数:1
   刘成宏  金扩世  金宁一  鲁会军  贾雷立  陈义锋  金明兰  姜鲲《中国生物制品学杂志》,2007年第20卷第2期
   目的构建鸡新城疫(ND)强毒株多裂解位点串联基因表达载体,为建立NDV强弱毒株的ELISA鉴别方法奠定基础。方法人工合成一段包含4种不同NDV强毒株裂解位点的基因Fe(F prote in multitude epi-position),其中各裂解位点之间用Linker(GGGGS)使其串联,然后进行2倍和4倍拷贝,并定向克隆至原核表达质粒pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a(+)/2Fe和pET-28a(+)/4Fe,进行表达和Western blot鉴定。结果构建的原核表达重组质粒pET-28a(+)/2Fe和pET-28 a(+)/4Fe测序正确。Western blot检测结果表明,2Fe、4Fe蛋白均与新城疫强毒株F48E9阳性血清呈阳性反应,而与新城疫弱毒株V4阳性血清呈阴性反应。结论已成功构建NDV强毒株F蛋白裂解位点串联基因表达载体,为建立NDV强弱毒株的ELISA鉴别方法提供理论依据。    

9.  新城疫病毒TL1株L基因的克隆及其真核表达载体的构建  
   王学理  王兴龙  李晓艳  任林柱  刘锴《中国生物制品学杂志》,2007年第20卷第8期
   目的对新城疫病毒TL1株L基因进行克隆、序列分析及真核表达载体构建。方法根据GenBank登录的新城疫病毒L基因序列,设计了一对引物,用RT-PCR对内蒙古分离株TL1的L基因进行整体扩增。将扩增产物提纯后,克隆入pGEM-Teasy载体,再亚克隆至真核表达载体pCI-neo上,通过酶切、PCR鉴定及测序进行验证。结果测序拼接得出L基因的全序列长度为6704bp,该基因的ORF总长为6615bp,编码2204个氨基酸。与GenBank登陆的12株参考毒株比较L基因编码区全核苷酸序列和氨基酸序列,发现TL1株与鹅源新城疫NA-1株、ZJ1株和SF02株的同源性极高,说明四者亲缘关系较近。结论已成功构建L基因真核表达载体,为对该株病毒进行反向遗传操作以及有关功能基因组研究奠定了基础。    

10.  抑制新城疫病毒繁殖的九肽及其突变体基因的克隆与原核表达  
   谢俊秋  张庆华  张雪燕  姚海燕  韩跃武《中国生物制品学杂志》,2008年第21卷第8期
   目的克隆并表达抑制新城疫病毒(NDV)繁殖的九肽(Nonapeptide)及其突变体基因。方法设计并合成Non-apeptide2串联体及其突变体基因,克隆于质粒pUC18,经酶切回收目的基因,与经相同酶切的表达载体pGEX-4T-1连接,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性菌落,抽提质粒进行鉴定。IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE及Western blot鉴定。结果重组表达质粒经双酶切、PCR及测序鉴定,证明构建正确。阳性重组菌的诱导表达产物经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约29000处可见一明显条带,与理论值相符。Nonapeptide 2及其突变体蛋白的表达量分别占菌体总蛋白的41%和37%。Western blot结果显示两种蛋白均具有良好的反应原性。结论已成功克隆并表达了抗NDV繁殖的Nonapeptide及其突变体基因。    

11.  鸡新城疫-传染性支气管炎-H9亚型禽流感三联灭活疫苗的制备及检验  
   张建伟  李林  章振华  景小冬  郑小兰  姜北宇《Canadian Metallurgical Quarterly》,2011年第39卷第14期
   [目的]制备鸡新城疫-传染性支气管炎-H9亚型禽流感[ND-IB-AI(H9亚型)]三联灭活疫苗.[方法]以NDV La Sota株、IBVM41株、AIV(H9亚型)WD株为毒种,分别接种鸡胚,制备NDV、IBV及AIV(H9亚型)抗原液;采用病毒超滤系统浓缩病毒抗原液,并用甲醛溶液进行灭活;将浓缩灭活后的3种抗原液按一定比例混合(1:1:1),以司本80及吐温80为乳化剂,10号白油为佐剂,乳化制成ND-IB-AI(H9亚型)三联灭活疫苗;对制备的疫苗进行无菌检验和物理性状观察.[结果]共制备了3批ND-IB-AI(H9亚型)三联灭活疫苗实验室制品,经无菌检验为阴性,外观为乳白色,剂型为油包水型(W/O型),粘度6.3~6.8 s,离心和37℃放置21 d均不分层.[结论]所制备3批ND-IB-AI(H9亚型)三联灭活疫苗均无细菌污染,其物理性状均能达标.    

12.  新城疫病毒F基因与传染性法氏囊病毒VP0基因在鸡痘病毒中共表达  
   许凌峰  夏志平  郭志儒  王宏  王兴龙  金宁一《粉末涂料与涂装》,2002年第15卷第5期
   目的 新城疫病毒(NDV)F基因和传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP0基因在鸡痘病毒中表达,以便研制新城疫和传染性法氏囊多价重组疫苗。方法 利用鸡痘病毒282E4株非必需区TK基因构建的表达载体PU-TA2,在已存在的复合启动子p7.5ATI下游同向插入F基因,反向插入复合启动子P7.5ATI,并在其下游反向插入VP0基因,构建由2个相同的复合启动子在相反方向分别表达F和VP0蛋白的PATI2-F-VP0表达载体。使其与鸡痘病毒282E4株共转染CEF细胞后,用BUDR法筛选重组病毒,通过间接免疫荧光法检测阳性重组病毒。用Western blot法检测F和VP0蛋白。结果 在重组病毒株中,用Western blot法可检测到F和VP0蛋白。结论 已成功地获得可同时表达F蛋白和VP0蛋白的重组鸡痘病毒。    

13.  鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定  
   邹年莉  王富妍  段真真  郭明萍  吴瑞婷  付润饶  文心田  曹三杰  黄勇《中国生物制品学杂志》,2014年第1期
   目的制备鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)S1蛋白单克隆抗体,并进行鉴定。方法用差速离心纯化的IBV四川分离株Sczy3免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。利用IBV鼠高免血清建立间接ELISA,筛选杂交瘤细胞。强阳性孔经有限稀释法亚克隆,获得分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并制备腹水。用鼠单克隆抗体亚型鉴定试剂盒鉴定单抗的亚型,Western blot法分析单抗的反应原性,ELISA法分析单抗的特异性及其与不同IBV毒株的交叉反应性。结果经连续4次亚克隆,获得2株能稳定传代并分泌抗IBV Sczy3株单克隆抗体的杂交瘤细胞株1C8C1和2C10E7,其腹水效价分别为1∶12 800和1∶25 600。2株杂交瘤细胞分泌的单抗均为IgM亚型;均可特异性识别S1蛋白;2株单抗只与IBV发生特异性反应,与新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)、禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)H9亚型和AIV H5抗原均不反应,与其他5种基因型的10株IBV毒株均可产生交叉反应。结论成功制备了2株IBV S1蛋白单克隆抗体,为IBV的检测、抗原表位筛选及致病机理的研究等提供了材料。    

14.  基于多层结构模型的生物信息分析平台研究*  
   赵友杰  张剑峰  曹永忠  陆王红a《计算机应用研究》,2007年第24卷第11期
   针对生物信息分析平台的构建,给出一种复合C/S、B/S的多层体系结构模型--BIOCMSM,并以构建新城疫病毒(NDV)生物信息分析平台为例,研究了该多层结构模型的实现过程.实验证明,BIOCMSM较好地解决了生物数据更新、数据集成、应用集成等问题.    

15.  鸡Mx蛋白在293T细胞中的表达及其抗病毒活性  
   陈胜锋  王丙云  高健潜  陈志胜  计慧琴  陈金顶《Canadian Metallurgical Quarterly》,2011年第39卷第10期
   [目的]研究鸡Mx 蛋白在293T 细胞中的表达并检测其抗病毒活性.[方法]将鸡的Mx基因克隆入pEGFP-C1栽体,经筛选鉴定后磷酸钙法转染293T 细胞,并对转染细胞进行荧光分析以及RT-PCR与Western blot鉴定,同时提取细胞蛋白质,微量细胞病变试验检测其抗新城疫病毒的活性.[结果]试验构建的pEGFP-C1-cMx真核表达栽体转染293T 细胞后,在胞浆中可检测到绿色荧光,RT-PCR与Western blot 结果进一步证实,pEGFP-C1-cMx可在293T细胞中表达,微量细胞病变试验显示,表达的融合蛋白可保护鸡胚成纤维细胞免受新城疫病毒感染.[结论]试验构建的pEGFP-C1-cMx 表达载体可在293T细胞中表达具有抗新城疫病毒活性的鸡Mx 蛋白.    

16.  基于星形金纳米颗粒修饰的81°倾斜光纤光栅生物传感器  
   罗彬彬  赵明富  石胜辉  刘永《半导体光电》,2018年第39卷第5期
   提出一种星形金纳米颗粒修饰的81°倾斜光纤光栅(TFG)生物传感器。通过金黄色葡萄球菌蛋白A固定法,将自制的高纯度新城疫病毒(NDV)单克隆抗体固定于81°TFG表面,制成对NDV具有特异性检测功能的生物传感器。结果表明,传感器对NDV的最低探测极限达10~25pg/mL,检测饱和点约为1 000pg/mL;在0~200pg/mL具有较好的线性相关度(R2约为0.911),相应的灵敏度约为1 394pm/(ng/mL)。此外,通过对NDV的特异性和临床性测试,表明该生物传感器对NDV具有高度的特异性和临床有效性。    

17.  新城疫病毒 F48E8株 HN基因在杆状病毒系统中表达  被引次数:2
   李太元  金宁一  丁壮  王兴龙  殷震《粉末涂料与涂装》,2002年第15卷第6期
   目的 采用新型杆状病毒表达系统(Bac to Bac系统)在昆虫细胞Sf-9中进行新城疫病毒F48 E8株HN基因表达。方法NDV F48 E8株 HN基因插入到转座载体 pFast Bac Ⅰ,构建重组转座载体 pFast HN,转化到感受态细胞 DH10后,将目的基因转座到穿梭载体Bacmid中,经筛选获得重组Bacmid HN转染到Sf-9昆虫细胞,并进行检测。结果 表达产物经SDS-PAGE、Westem blot检测获得蛋白特异带,相对分子质量约63000。结论NDVF48E8株HN基因能通过新型杆状病毒表达系统在昆虫细胞Sf-9中进行表达,表达量约为细胞总蛋白的10%。    

18.  醛化鸡红细胞吸附释放结合NP-40法纯化新城疫病毒蛋白  
   胡仁建《重庆理工大学学报(自然科学版)》,2008年第22卷第4期
   采用醛化鸡红细胞吸附释放结合NP-40法纯化鸡胚尿囊液中的新城疫病毒蛋白.通过收集纯化的新城疫病毒,并测定新城疫病毒血凝效价和进行9%SDS-PAGE电泳,以测定新城疫病毒蛋白的纯度.用该方法纯化的新城疫病毒血凝效价为1∶256,进行9%SDS-PAGE电泳后,发现得到的新城疫病毒蛋白不含鸡胚尿囊液蛋白,是纯度较高的新城疫病毒蛋白.以上结果表明,醛化鸡红细胞吸附释放法结合NP-40法是一种经济实用、操作简便,并有较高纯化效率的方法.    

19.  鸡新城疫的诊断及防治  
   刘恒礼《农业技术与装备》,2012年第7期
   鸡新城疫(英文简称ND)又称亚洲鸡瘟,俗称鸡瘟,是由禽副流感病毒型新城疫病毒(NDV)引起的一种主要侵害鸡、火鸡、野禽及观赏鸟类的急性高度接触传染性、致死性疾病,常呈现败血症经过。鸡发病后的主要特征是呼吸困难,下痢,伴有神经症状,蛋鸡产蛋率严重下降,可视黏膜和浆膜出血,感染率和致死率高。    

20.  基于Web的新城疫病毒基因分型系统  
   陆王红  曹永忠  张剑峰《计算机工程》,2009年第35卷第4期
   根据新城疫病毒分子进化规律,采用JSP和SQLServer技术,设计并开发出基于Web的新城疫病毒基因分型系统。该系统通过计算机自动对核酸序列分析处理,提取特征位点信息,并与分型标准进行比较,从而实现快速准确分型。有效地减少分型过程中人的参与,缩短基因分型的周期,具有较强的实用性和可扩展性。    

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