β-半乳糖苷酶基因(lacZ)在大型经济海藻裙带菜中的瞬间表达

用高压氦气式基因枪将SV40启动子驱动下的β-半乳糖苷酶基因（lacZ）导入大型经济海藻裙带菜不同部位的组织切块中，48小时后染色检测，在假根、孢子叶和叶片中均检测到了lacZ的瞬间表达，研究还发现，对于裙带菜组织块的基因枪法转化，压强1300psi优于1100psi。另外在裙带菜中没有发现半乳糖苷酶的染色本底。本文结果提示：基因枪法是有效的裙带菜遗传转化方法；lacZ可以作为裙带菜基因工程研究的报告基因，SV40启动子能有效驱动外源基因在裙带菜中表面，没有组织特异性。这是lacZ在裙带菜中表面的首次报道，结果可为裙带菜基因工程育种研究提供方法学基础。     

牛α(1,3)-半乳糖转移酶基因片段的克隆及一种全新的无启动子打靶载体的构建

利用La—PCR的方法，从牛的基因组中成功地获得分别约为2．4kb、15．0kb的两段扩增产物。两个片段分别克隆于pCR—XL—TOPO载体。测序结果表明所克隆的两片段均为牛α(1，3)GT基因的基因组序列。其中2．4kb片段位于5～7外显子之间，包括了完整的第五及第六内含子；15．0kb片段位于3～4外显子，包括了完整的第三内含子。15．0kb、2．4kb片段分别作为打靶载体的5’、3’同源臂，使用融合基因策略构建了一种全新的无启动子打靶载体7zf-neo17．4。电击转染牛胎儿成纤维细胞以期敲除牛的α(1，3)-GT基因。     

草丁膦抗性基因(bar)在海带配子体中的稳定表达

为把海带配子体作为转基因海洋生物反应器,研究了其对除草剂草丁膦的敏感性以及温度对草丁膦处理效果的影响.结果表明:海带配子体对草丁膦敏感;统计学分析得出了草丁膦在不同温度条件下处理海带配子体的半致死浓度(LD50)及95%可信限;温差达到10℃时,相同处理时间各组内不同处理温度样品的LD50之间呈现显著差异.构建了SV40启动子驱动草丁膦抗性基因bar的表达载体pSVB,应用基因枪法转化海带配子体细胞,经40mg/L草丁膦液体培养基筛选出抗性转化子,Southern blotting结果表明bar基因已经整合到海带配子体基因组中.结论:以草丁膦作为筛选压力可以实现外源基因在海带配子体中的稳定表达.     

裙带菜基因工程选择标记的研究

研究了裙带莱幼袍子体对10种选择试剂的敏感性。结果发现裙带莱幼袍子体对氯霉素、潮霉素敏感，对除草剂草丁膦极敏感(2天的LD50为8．57mg/L)。根据统计学的要求得出了这3种选择试剂对裙带莱幼孢子体的半致死剂量和95％可信限。本文的结果能为裙带莱基因工程选择标记的建立提供依据。     

GUS基因在杜氏盐藻细胞中的瞬间表达

利用电激法将GUS基因转入杜氏盐藻细胞内进行瞬间表达，研究了盐藻的生长状态和电激转化条件对转化率的影响，并比较了CaMV35S,Ubil,Ubil-Ω5种启动子的转化效率。结果表明，培养5d的盐藻在6kV的脉冲电压，0．05s的脉冲持续时间和210的脉冲次数下电激可获得较高的转化率，为转化最佳条件。5种启动子中，Ubil-Ω启动子的转化效率最高，适合作为外源基因在盐藻细胞中高效表达的启动子。     

基因表达系列分析的研究进展及应用

简要概括了SAGE的基本原理和实验程序，侧重对该技术的程序修改和完善以及该方法最近在筛选候选新基因方面的应用进行综述报道。     

人骨形态发生蛋白－1（hBMP－1）成熟肽的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

采用ＰＣＲ方法从ＢＭＰ－１的ｃＤＮＡ中克隆了ＢＭＰ－１成熟肽的编码基因，删除了ＢＭＰ－１前体分子Ｎ端的信号肽序列和Ｃ端的其他序列。用ＨｉｎｄⅢ消化１．３Ｋｂ的ＰＣＲ产物，将０．８４和０．４６Ｋｂ两片段分别克隆到ｐＵＣ载体中进ＤＮＡ序列分析。分别酶切回收ＥｃｏＲ－ＨｉｎｄⅢ和ＨｉｎｄⅢ－ＢａｍＨⅠ两目的基因片段，与大肠杆菌表达载体ｐＢＶ－２２０进行退火连接，使插入基因受控于Ｐ＿ＲＰ＿Ｌ启动子。将含有ＢＭＰ－１成熟肽编码基因重组表达质粒ｐＢＶＢＭＰ－１转化大肠杆菌宿主细胞进行温度诱导表达。结果表明，经４２℃热诱导后，大肠杆菌能以包涵体形式表达ＢＭＰ－１成熟肽，其分子量约为５２ｋＤａ。     

Patatin启动子驱动的乙肝表面抗原基因在马铃薯中的表达

按常规分子克隆方法将马铃薯中高表达的ｐａｔａｔｉｎ启动子和乙肝表面抗原基因分别插入双元质粒ｐＢＩ１０１成为植物表达载体ｐＰＨＧ９,由前者驱动后者表达;通过农杆菌转化法将乙肝表面抗原基因导入马铃薯并获得再生植株;用ＥＬＩＳＡ方法检测经ＰＣＲ鉴定的转基因植株中乙肝表面抗原的含量,对照标准曲线得知转基因马铃薯植株中的乙肝表面朱含量高达１００￣１７４ｎｇ／ｍｇ可溶性蛋白。     

基于基因表达式编程的装备测试需求建立方法

在测试领域,被测对象的测试需求一直是一个比较模糊的概念,本文参考TYX公司对测试需求的定义,针对某型装备的测试需求,开展了基因表达式编程算法的研究.根据制导电子箱的电路特点,设计了基于IEEE 1641标准的运算符集合和变量集合、基于R-square的适应度函数、基于精英主义和轮盘赌算法的选择策略.采用部分映射、启发式变异算子和面向测试应用的插串算子和重组算子.提出了一种基于基因表达式编程算法的装备测试需求建立方法,并进行了系统实现.实验结果表明,该方法可以根据装备的观测数据生成制导电子箱的测试模型,得到装备准确的测试信号需求和具有参考意义的测试方法,此方法具有一定的通用性.     

小白鼠心肌核DNA片段中的基因表达的分子开关的研究

原位染色发现,LDH（1－5）…nNAD^ (LDH：乳酸脱氢酶,NAD^ ,氢化型辅酶）可以进入核孔,可能与自己编码基因特异结合,体外表达实验中,稀释心肌DNA片段,促进LDH／DNA表达LDH（1－5）,LDH（1－5）表达量与LDH／DNA中可解离的LDH（1－5）量呈正相关性。同位素^14C标记L if impglk ty LDH(1-5)…NAD^ 可以抑制LDH／DNA体外表达,LDH（1－5）表达抑制量与加入LDH（1－5）…nNAD^ 量呈正相关性,AFM直接观察到活性基因两头的调控序列可能结合自己编码的蛋白等活性因子,基因表达与调控的分子开关主要是自己编码的蛋白等活性因子,展示了未来运用AFM和同位素标记法相结合研究生物学反应的前景。