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建立了南荻愈伤组织高频诱导与再生系统及其转化愈伤组织的筛选系统,并通过本研究所建立的基因枪转化系统,将马铃薯蛋白酶抑制基因导入南荻愈伤组织而获得转基因植株。 相似文献
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转抗菌肽B基因水稻植株的获得与鉴定 总被引:6,自引:0,他引:6
构建了一个适合在水稻中表达含有抗菌肽B基因的转化载体,应用基因枪转化法将其导入水稻未成熟胚,获得了一些转基因水稻植株。根据对选择标记基因和目的基因的分子检测和抗病性测定,证明抗菌肽B基因已整合入转化水稻基因组并在转基因水稻中表达了抗病性。 相似文献
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转甜菜碱醛脱氢酶基因玉米及其耐盐性研究 总被引:19,自引:0,他引:19
构建了一个含有甜菜碱醛脱氢酶基因的表达载体,应用基因枪转化法将其转入玉米,获得了一些转基因植株。根据对目的的基因的分子检测和对盐耐性的分析,证明转化的甜菜碱醛脱氢酶基因已整合入玉米染色体组,并且转基因玉米提高了对盐的耐性。 相似文献
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对转sck基因水稻T6代生长发育不同时期的不同组织部位sck基因在转录水平和翻译水平的表达特异性进行了研究,结果显示,转基因植株的叶片、茎部、根部sck基因在转录水平和翻译水平均有表达,其中叶片的表达水平明显高于茎部和根部;在成熟的种子中CpTI外源蛋白含量低于检测低限(<0.014μg/ml),不能被定量.不同生长发育时期叶片的sck基因表达水平在分蘖期、幼穗发育期、开花结实期差别不大,幼苗期的表达水平明显低于其他时期.可见,所转入的外源基因已经能在T6代转基因水稻的不同生长时期的不同组织部位稳定表达,并且在不同时期的根、茎、叶中可以定量检测. 相似文献
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乙肝表面抗原S2S基因在蓝藻Synechococcus sp.PCC7942中的表达研究 总被引:2,自引:0,他引:2
用PCR法将乙肝表面抗原基因S2S片段从乙肝病毒中扩增得到,将其插入到蓝藻热休克表达载体pEUTMT1中,构建成表达重组质粒pES2ST1.将蓝藻Synechococcus sp.PCC7942的总染色体与质粒pES2ST1同时进行EcoRI和SacI双酶切,再连接构建成为系列含有蓝藻染色体DNA同源片段的供体表达质粒.经转化筛选得到蓝藻Synechococcus sp.PCC7942转化藻株.PCR和Southern 杂交证明目的基因已经整合到宿主的染色体中.转化藻通过热诱导后,Northern-blot结果呈阳性,用化学发光检测技术可以检测到微量目的蛋白的表达,检测含量约为0.78~0.64ng/ml,目的蛋白约为可溶性蛋白的1.1×10-6~1.5×10-6. 相似文献
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藻蓝蛋白对Hela细胞CD59基因表达调控作用的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
探讨了钝顶螺旋藻藻蓝蛋白(PC)对Hela细胞CD59基因表达的调控作用.以正常人CD59cDNA基因为模板,经PCR扩增后重组入真核表达质粒载体pALTER-MAX,然后利用阳离子脂质体(Lipfectamine-2000)将重组质粒和PcDNA共转染人子宫颈癌细胞(Hela)和对照用正常中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO)进行表达.用不同浓度的钝顶螺旋藻藻蓝蛋白作用于转染细胞,通过核酸分子杂交技术、免疫荧光标记法和ELISA法对细胞中CD59分子的表达进行检测.结果表明:成功构建了重组质粒pALTER-MAX-CD59,并将其导入真核细胞(Hela,CHO),经G418筛选获得了CD59分子高效表达的细胞克隆.用藻蓝蛋白作用于筛选出的转基因细胞,证实藻蓝蛋白可促进Hela细胞表面CD59蛋白的表达并抑制Hela细胞的增殖,而对于正常CHO细胞无明显作用. 相似文献
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抗菌核病转基因油菜植株的获得 总被引:11,自引:0,他引:11
将携带菜豆几丁质酶基因的植物表达载体pBch通过农秆菌介导法导入甘兰型油菜H165中。经卡那霉素对T0、T1和T2代植株进行连续的筛选和菌核病(sclero-tinia sclerotinorium)接种试验,共获得22株抗菌核病的T2代植株。对其中的22株进行PCRS检测,从6株扩增得到与菜豆几丁质酶基因大小对应的DNA带型,Southern杂交证实其中2株呈现阳性结果,表明外源基因已整合到油菜 相似文献
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序列分析表明,马铃薯Y病毒小鼠中和抗体重链基因(G9)全长为1505个核苷酸碱基(不包括Poly(A)尾巴),其中包括5'端非编码区16个核苷酸碱基、编码重链信号肽的57个核苷酸碱基、编码成熟蛋白的1329个核苷酸碱基和3'端非编码区的103个核苷酸碱基。与已知的小鼠抗体Mopc21的重链基因(γ1)相比,核苷酸的序列同源性为94.4%,由核苷酸序列所推导出的氨基酸序列同源性为92.6%,其中可变区内(VH)的氨基酸序列同源性达74.5%,这表明二者起源于同一种系基因。将完整的抗体重链基因正向插入植物表达载体pBⅠ121中的原GUS基因位置上,置于花椰莱花叶病毒35S启动子控制之下,获得了能够在植物细胞内表达马铃薯Y病毒中和抗体重链基因的植物表达载体pYH。 相似文献
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猪瘟病毒E2蛋白4重复抗原表位的构建及抗原活性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
利用PCR方法获得4次重复的猪瘟病毒E2蛋白中和性抗原表位基因,将其克隆到pGEM-5ZF( )载体,测序正确后亚克隆到pGEX-3X载体构建得到重组质粒pGEX-3X-4P。重组质粒在大肠杆菌中诱导表达了含4重复抗原表位的融合蛋白。该蛋白经纯化后,利用间接ELISA检测其与血清的反应性,结果表明,纯化的融合蛋白与兔抗CSFV E2血清有很强的反应性,与兔抗BVDV E2血清不反应,说明该重复抗原表位在鉴别诊断CSFV与猪的BVDV感染方面具有潜在的应用价值。 相似文献
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基因枪法转化水稻(Oryza sativa L.)获得可育的转抗虫基因水稻再生植株 总被引:13,自引:0,他引:13
应用基因枪(particle bombardment)转化技术成功地将豇豆胰蛋白酶抑制剂(cowpea trypsin inhibitor,CpTI)基因分别导入三个水稻粳稻栽培品种(Oryza sativa L.,japonica)中花8、中花10和中作321的幼胚和胚性愈伤组织中,并由此获得了可育的再生植株,抗性植株的筛选频率为6.1%-12.24%。经PCR、Southern blot分子检测和ELISA检测等证实所获得的潮霉素抗体植株为转基因植株。抗虫性分析结果表明,部分转基因水稻植株对玉米螟虫(Ostrinia nubilalis)有较好的抗性。 相似文献
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通过改造人凝血因子IX基因(h-FIX)使其与乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)的分泌信号序列(Kss)融合,并置于脆壁克鲁维酵母(K.fragilis)LAC4基因调控型启动子的控制之下,构建成h-FIX基因表达盒。将此表达盒插入克鲁维酵母的整合质粒,得到了一个高稳定的h-FIX基因整合表达载体pHKB202-FP。经摇瓶培养并以半乳糖诱导此表达载体转化的酵母菌株,ELISA检测显示酵母上清液中的人凝血因子IX表达量可达到约200ng/ml。此结果表明人凝血因子IX蛋白首次成功地在脆壁克鲁维酵母中得到了表达和分泌。这对于促进人凝血因子IX的基因工程产业化具有实际意义。 相似文献
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通过基因合成将大肠杆菌偏好的精氨酸密码子CGT取代野生型牛精蛋白基因中的稀有精氨酸密码子AGA和AGG,得到密码子优化的牛精蛋白基因,并将其克隆入原核表达载体pGEX-2T中,组装成表达载体pGEX-2T-PS。将这个表达载体转化入大肠杆菌表达菌株BL21中,经IPTG诱导,可得到一33kD融合蛋白表达带,首次成功地将牛精蛋白在大肠杆菌中进行了表达,但其表达量很低,约为总菌体蛋白的13%。增加表遂菌株培养液的离子强度,可将蛋白表达含量提高到28%,且蛋白表达量与离子强度呈正相关。纯化后的牛精蛋白可在体外条件下与DNA发生结合。 相似文献