GUS基因在杜氏盐藻细胞中的瞬间表达

利用电激法将GUS基因转入杜氏盐藻细胞内进行瞬间表达，研究了盐藻的生长状态和电激转化条件对转化率的影响，并比较了CaMV35S,Ubil,Ubil-Ω5种启动子的转化效率。结果表明，培养5d的盐藻在6kV的脉冲电压，0．05s的脉冲持续时间和210的脉冲次数下电激可获得较高的转化率，为转化最佳条件。5种启动子中，Ubil-Ω启动子的转化效率最高，适合作为外源基因在盐藻细胞中高效表达的启动子。     

提高籼稻基因枪转化频率的研究

为了提高籼稻的基因枪转化频率,以14种重要的籼稻栽培品种为材料 ,对其胚性愈伤组织的诱导与再生的培养条件、转化细胞的筛选方案以及基因枪轰击参数进行了比较研究,建立起了较高优化的基因枪转化系统,并获得了一批有价值的转化植株.     

提高灿稻基因枪转化频率的研究

为了提高灿稻的基因枪转化频率，以14种重要的灿稻栽培品种为材料，对其胚性愈伤组织的诱导与再生的培养条件，转化细胞的筛选方案以及基因枪轰击参数进行了比较研究，建立起了较高优化的基因枪转化系统，并获得了一批有价值的转化植株。     

基因枪轰击小鹅瘟病毒VP3基因疫苗诱导鹅体内体液免疫的机制

将小鹅瘟病毒VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)分别以每只1μg、3μg和6μg的基因枪轰击免疫30日龄四川白鹅,用免疫组织化学法检测pcDNA-GPV-VP3在鹅体内各组织器官表达情况;用间接ELISA检测免疫鹅血清中GPV抗体滴度.结果:①各剂量免疫组1d时能在免疫部位皮肤,3d时能在心脏/十二指肠/空肠/盲肠/肝脏,7d时在回肠/直肠检测到pcDNA-GPV-VP3的表达;7d表达最多;表达可持续至35～63d;表达产物的数量和表达持续时间总体规律为6μg组＞3μg组＞1μg组.②免疫后第7d血清抗体开始升高,21d达到最大值,免疫后第14～217d极显著(P<0.01)高于PBS和空白质粒对照;体液免疫效果存在一定的剂量依赖.研究表明,pcDNA-GPV-VP3基因枪轰击免疫雏鹅后能在免疫部位皮肤、心肌、肝脏和各肠段中表达并能够诱导雏鹅产生良好的体液免疫.     

β-半乳糖苷酶基因(lacZ)在大型经济海藻裙带菜中的瞬间表达

用高压氦气式基因枪将SV40启动子驱动下的β-半乳糖苷酶基因（lacZ）导入大型经济海藻裙带菜不同部位的组织切块中，48小时后染色检测，在假根、孢子叶和叶片中均检测到了lacZ的瞬间表达，研究还发现，对于裙带菜组织块的基因枪法转化，压强1300psi优于1100psi。另外在裙带菜中没有发现半乳糖苷酶的染色本底。本文结果提示：基因枪法是有效的裙带菜遗传转化方法；lacZ可以作为裙带菜基因工程研究的报告基因，SV40启动子能有效驱动外源基因在裙带菜中表面，没有组织特异性。这是lacZ在裙带菜中表面的首次报道，结果可为裙带菜基因工程育种研究提供方法学基础。     

激发子诱导植物基因表达研究进展

介绍了基因诱导表达调控的研究方法，并概述了与ABA，乙烯，真菌激发子诱导表达相关的顺式作用元件（G-box,GT-1结合位点，GCC－blox,W-box)，以及与这些顺式作用元件相互作用的转录因子（GBFS，GT－1，EREBPS，WRKY）。同时对植物基因诱导表达调控的分子机制作了综述。     

人骨形态发生蛋白－1（hBMP－1）成熟肽的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

采用ＰＣＲ方法从ＢＭＰ－１的ｃＤＮＡ中克隆了ＢＭＰ－１成熟肽的编码基因，删除了ＢＭＰ－１前体分子Ｎ端的信号肽序列和Ｃ端的其他序列。用ＨｉｎｄⅢ消化１．３Ｋｂ的ＰＣＲ产物，将０．８４和０．４６Ｋｂ两片段分别克隆到ｐＵＣ载体中进ＤＮＡ序列分析。分别酶切回收ＥｃｏＲ－ＨｉｎｄⅢ和ＨｉｎｄⅢ－ＢａｍＨⅠ两目的基因片段，与大肠杆菌表达载体ｐＢＶ－２２０进行退火连接，使插入基因受控于Ｐ＿ＲＰ＿Ｌ启动子。将含有ＢＭＰ－１成熟肽编码基因重组表达质粒ｐＢＶＢＭＰ－１转化大肠杆菌宿主细胞进行温度诱导表达。结果表明，经４２℃热诱导后，大肠杆菌能以包涵体形式表达ＢＭＰ－１成熟肽，其分子量约为５２ｋＤａ。     

小白鼠心肌核DNA片段中的基因表达的分子开关的研究

原位染色发现,LDH（1－5）…nNAD^ (LDH：乳酸脱氢酶,NAD^ ,氢化型辅酶）可以进入核孔,可能与自己编码基因特异结合,体外表达实验中,稀释心肌DNA片段,促进LDH／DNA表达LDH（1－5）,LDH（1－5）表达量与LDH／DNA中可解离的LDH（1－5）量呈正相关性。同位素^14C标记L if impglk ty LDH(1-5)…NAD^ 可以抑制LDH／DNA体外表达,LDH（1－5）表达抑制量与加入LDH（1－5）…nNAD^ 量呈正相关性,AFM直接观察到活性基因两头的调控序列可能结合自己编码的蛋白等活性因子,基因表达与调控的分子开关主要是自己编码的蛋白等活性因子,展示了未来运用AFM和同位素标记法相结合研究生物学反应的前景。     

β-半乳糖苷酶基因(lacZ)在海藻裙带菜中的稳定表达

借鉴海带遗传转化模式，利用基因枪法将β-半乳糖苷酶基因(lacZ)导入裙带菜雄配子体中，一部分诱导形成营养增殖的丝状体，另一部分和雌配子体受精生成孢子体。五个月后组织化学染色结果表明5％的孢子体个体和30％的丝状体细胞表现了lacZ的稳定表达，利用PCR和PCR-Southem检测得到了预期的阳性信号。本文结果提示了利用基因枪转化方法．以雄配子体介导获得外源基因在裙带菜中稳定表达的可行性．     

人高血压相关基因(HRG-1)编码蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定

为了研究一个新的人高血压相关基因HRG－1的编码蛋白在大肠杆菌中的表达及生物学活性,使用PCR的方法扩增人HRG－1基因ORF的编码序列,构建了原核表达质粒,并在大肠杆菌中诱导表达及进行体外活性鉴定,实验结果证明得到了具有生物学活性的人HRG－1原核表达蛋白,且人HRG－1原核表达蛋白具有真核表达蛋白一致的生物学活性。     

脆壁克鲁维酵母KfPDI基因高表达菌株的构建

通过构建脆壁克鲁维酵母（Kluyveromyces fragilis）蛋白二硫化物异构酶基因KfPDI强表达单元并克隆到不同类型的酵母载体上转化酵母菌株,经筛选得到了带有不同拷贝数KfPDI基因的酵母转化子。酶活性测定结果表明这些转化子中的蛋白二硫化物异构酶表达水平不仅与其KfPDI基因拷贝数有关,而且与该基因是否整合入宿主染色体也密切相关。本文所得到的KfPDI基因高表达菌株有望作为增强外源蛋白正确折叠和分泌效率的基因工程宿主菌。     

Changes in Gene Expression of E. coli under Conditions of Modeled Reduced Gravity

Relatively few studies have examined bacterial responses to the reduced gravity conditions that are experienced by bacteria grown in space. In this study, whole genome expression of Escherichia coli K12 under clinorotation (which models some of the conditions found under reduced gravity) was analyzed. We hypothesized that phenotypic differences at cellular and population levels under clinorotation (hereafter referred to as modeled reduced gravity) are directly coupled to changes in gene expression. Further, we hypothesized that these responses may be due to indirect effects of these environmental conditions on nutrient accessibility for bacteria. Overall, 430 genes were identified as significantly different between modeled reduced gravity conditions and controls. Up-regulated genes included those involved in the starvation response (csiD, cspD, ygaF, gabDTP, ygiG, fliY, cysK) and redirecting metabolism under starvation (ddpX, acs, actP, gdhA); responses to multiple stresses, such as acid stress (asr, yhiW), osmotic stress (yehZYW), oxidative stress (katE, btuDE); biofilm formation (lldR, lamB, yneA, fadB, ydeY); curli biosynthesis (csgDEF), and lipid biosynthesis (yfbEFG). Our results support the previously proposed hypothesis that under conditions of modeled reduced gravity, zones of nutrient depletion develop around bacteria eliciting responses similar to entrance into stationary phase which is generally characterized by expression of starvation inducible genes and genes associated with multiple stress responses.     

基因表达系列分析的研究进展及应用

简要概括了SAGE的基本原理和实验程序，侧重对该技术的程序修改和完善以及该方法最近在筛选候选新基因方面的应用进行综述报道。