依普利酮对慢性心力衰竭患者CD4+T淋巴细胞Kv1.3等通道mRNA及蛋白表达的抑制作用

目的: 探讨依普利酮（EPL）对慢性心力衰竭（CHF）患者CD4+T淋巴细胞Kv1.3等通道的mRNA及蛋白质表达的影响。方法: 收集慢性心衰Ⅱ、Ⅲ期的患者及正常人全血样本（30例vs 20例）。免疫磁珠分选外周血CD4+T淋巴细胞,利用流式细胞仪检测其纯度,CCK-8法检测不同浓度的EPL对CD4+ T淋巴细胞增殖的影响。共分为3组,Control组、CHF组及CHF+EPL组。RT-qPCR检测各组培养体系中的Kv1.3、KCa3.1和CRAC通道mRNA的表达;In-cell Western blot技术检测CD4+ T淋巴细胞膜上Kv1.3通道蛋白质的表达。结果: EPL的最佳抑制浓度为30 μmol/L;CHF组Kv1.3通道的mRNA和蛋白质的表达分别是Control组的10.74倍和1.20倍（P<0.01）,CHF+EPL组Kv1.3通道的mRNA和蛋白质的表达分别比CHF组降低了64.80%和39.62%（P<0.01）;CHF组KCa3.1和CRAC通道mRNA的表达分别是Control组的4.73倍和3.77倍（P<0.01）,CHF+EPL组KCa3.1和CRAC通道mRNA的表达比CHF组分别降低了19.30%和37.14%（P<0.01）。结论: CD4+T淋巴细胞的三种离子通道的mRNA和/或蛋白质在慢性心力衰竭情况下均有高表达,依普利酮均能明显下调三种离子通道的mRNA和/或蛋白质,其中Kv1.3通道的变化尤为突出,推测醛固酮受体拮抗剂可能通过抑制CD4+T淋巴细胞膜上的Kv1.3通道的激活,减少T淋巴细胞的活化/增殖,最终抑制CHF过程中炎症作用的发生发展而对心衰有利。     

映山红花总黄酮对大鼠神经元及EA.hy926内皮细胞超极化作用及机制

目的: 观察映山红花总黄酮（total flavones of rhododendra,TFR）对大鼠海马神经元及EA.hy926内皮细胞膜超极化作用及机制研究。方法: 体外培养大鼠海马神经元和EA.hy926内皮细胞,利用DiBAC4(3)荧光染料在钙离子成像系统488 nm激发波长下检测EA.hy926和大鼠海马神经元荧光强度变化以反映膜电位改变情况。结果: 与Control组比较,TFR（270 mg/L）和TFR（810 mg/L）能显著降低EA.hy926内皮细胞内荧光强度,即细胞发生了超极化现象,且BKCa特异性阻断剂IbTX及联用IKCa阻断剂ChTX和SKCa阻断剂apamin均能抑制TFR（270 mg/L）引起的荧光强度降低现象,而内源性硫化氢（hydrogen sulphide,H₂S）合成酶抑制剂DL-炔丙基甘氨酸（DL-propargylglycine,PPG）对这一超极化效应无显著影响;与Control组比较,TFR（270 mg/L）和TFR（810 mg/L）也能显著降低大鼠海马神经元荧光强度,且IbTX能抑制TFR（270 mg/L）引起的荧光强度降低现象。结论: TFR可引起大鼠海马神经元和EA.hy926细胞膜超极化,其作用机制可能与激活细胞膜上钙激活钾通道（Ca2+-sensitive K+ channels,KCa）有关。     

新型抗高血压药物盐酸埃他卡林对小动脉的选择性扩张作用及其药理学机制

目的: 研究新型抗高血压药物盐酸埃他卡林(Ipt) 对小动脉的作用特性及其药理学机制。方法: 采用大鼠尾动脉螺旋状血管条和主动脉离体血管环两种组织, 对比观察盐酸埃他卡林对大、小动脉扩张作用的药理学特性, 并且利用膜片钳技术观察盐酸埃他卡林对大鼠尾动脉平滑肌细胞钾电流的影响。结果: Ipt 在10^-7 ~ 10^-3 mol·L^-1 范围内对KCl 预致收缩的大鼠尾动脉血管条产生剂量依赖性舒张反应, 且具有部分内皮依赖性, 但对主动脉离体血管环无明显的舒张反应, 该作用在高血压状态时显著增强, 能被ATP 敏感性钾通道特异性阻断剂格列苯脲阻断, 并且对大鼠尾动脉平滑肌细胞的钾电流具有显著增强作用。结论: 盐酸埃他卡林具有选择性舒张小动脉作用, 具有ATP 敏感性钾通道开放剂的主要药理学特征。     

盐酸埃他卡林对缺氧诱导神经细胞凋亡的影响

目的: 探讨盐酸埃他卡林(Ipt) 对缺氧诱导的大鼠皮质神经细胞凋亡的影响。方法: 用电镜和流式细胞分析技术, 检测原代培养的大鼠皮质神经细胞凋亡;应用免疫组化法, 观察凋亡相关蛋白Bcl-2 、Bax 表达的改变。结果: Ipt 10 μmol·L^-1可减轻缺氧诱导的细胞染色质浓缩现象, 逆转缺氧诱导的Bcl-2表达的下调, 对Bax 表达无显著影响;Ipt (0.1~10 μmol·L^-1) 能剂量依赖性地降低凋亡细胞百分率, 以10 μmol·L^-1 浓度组效果最好, 其作用可被ATP 敏感性钾通道特异性阻断剂格列本脲(Gli) 所拮抗。结论: Ipt 对缺氧诱导的神经细胞凋亡有明显的抑制作用, 其作用机制与ATP 敏感性钾通道、Bcl-2 表达相关。     

氢化可的松抑制Jurkat 细胞的调节性体积减小

目的 研究氢化可的松对Jurkat 细胞调节性体积减小(regulatory volume decrease, RVD)的影响及可能的机制。 方法 通过Motic Images Advanced 3.1软件系统实时监测细胞体积的变化, 并通过3H 掺入实验观察Jurkat 细胞增殖。 结果 氢化可的松对Jurkat细胞RVD 具有剂量依赖性的抑制作用, 在10^-4和10^-3 mol·L^-1时可以明显抑制Jurkat 细胞的RVD,而在10^-9、10^-7 和10^-5 mol·L^-1 时对Jurkat 细胞的RVD 没有明显影响。钾通道阻断剂奎宁(quinine)亦可以抑制Jurkat 细胞的RVD。氢化可的松和奎宁在10^-3mol·L^-1均可明显抑制Jurkat 的增殖(包括自然增殖和Con A 诱导增殖)。 结论 氢化可的松对Jurkat细胞RVD 的抑制可能是通过钾通道起作用。     

IgD对人外周血Th1/Th2、Th17/Treg亚群及核转录因子的影响

目的: 研究免疫球蛋白D（immunoglobulin D,IgD）对人T细胞亚群Th1/Th2、Th17/Treg细胞平衡的影响。方法:不同浓度的IgD（终浓度1、3、10 μg/mL）刺激人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMC）24 h后,流式细胞术检测CD69、CD154的表达、Th1、Th2、Th17、Treg细胞亚群的百分比,实时定量PCR（qPCR）技术检测核转录因子T-bet、GATA-3、Foxp3和ROR-γt mRNA的表达。 结果:IgD可增加T细胞表面活化标志物CD69、CD154的表达（P<0.05）,显著减少Th1、Treg细胞亚群的百分比且可显著增加Th17的百分比,对Th2细胞亚群无显著影响;IgD可显著下调核转录因子T-bet、Foxp3 mRNA的表达且可显著上调核转录因子ROR-γt mRNA的表达,对核转录因子GATA-3 mRNA的表达无显著影响。 结论:IgD能促进T细胞活化,引起T细胞亚群Th1/Th2、Th17/Treg比例失衡。     

一氧化氮诱导心肌细胞预适应早期保护作用的信号转导途径

目的: 探讨一氧化氮(NO)诱导心肌细胞预适应早期保护作用及可能的信号转导途径。方法: 体外培养新生大鼠心肌细胞,分别以NO合成前体L-精氨酸(L-Arg)和NO供体SNAP处理细胞,观察心肌细胞在随后6h的缺氧损伤程度,以明确NO是否诱导心肌细胞预适应早期保护作用;分别以cGMP阻断剂亚甲基蓝、蛋白激酶C(PKC)抑制剂D-鞘氨醇、钙拮抗剂拉西地平和ATP敏感的钾通道[K(ATP)通道]阻断剂格列苯脲作用心肌细胞30min后加入SNAP作用60min,观察心肌细胞缺氧损伤程度,检测指标为心肌细胞存活率及乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果: SNAP和L-Arg均可诱导心肌细胞预适应早期保护作用,一氧化氮合酶抑制剂LNAME可阻断L-Arg的保护作用,亚甲基蓝可完全取消SNAP对缺氧心肌细胞的保护作用,D-鞘氨醇、拉西地平和格列苯脲均可减弱SNAP的作用。结论: NO可能通过cGMP依赖途径诱导心肌细胞预适应早期保护作用,而PKC 的活化和钙通道、K(ATP)通道的开放是其下游重要的环节。     

鸢尾黄素对肝星状细胞外基质表达的影响

目的: 研究鸢尾黄素对肝星状细胞的活化以及细胞外基质合成和降解的影响。方法: 体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,通过荧光定量PCR法检测鸢尾黄素对肝星状细胞的Ⅰ型胶原、α-肌动球蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)以及基质金属蛋白酶-1抑制剂(TIMP-1)mRNA的表达的影响。结果: 鸢尾黄素能显著抑制肝星状细胞中Ⅰ型胶原及活化标志α-SMA mRNA的表达,增强肝星状细胞中MMP-13 mRNA的表达,降低TIMP-1 mRNA的表达。结论: 鸢尾黄素既可以有效地抑制肝星状细胞的活化,同时又能减少肝星状细胞胞外基质的合成以及增加胞外基质的降解,因而具有潜在的抗肝纤维化的作用。     

盐酸埃他卡林对H2O2所致PC12细胞损伤的保护

目的: 研究 K_ATP 通道开放剂盐酸埃他卡林(iptakalim hydrochloride, Ipt) 对 H₂O₂ 所致 PC12 细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法: 采用培养的PC12细胞, MTT 法测定细胞存活率, HPLC 法测定细胞培养液中谷氨酸(Glu) 的含量, 荧光法测定胞内钙离子([Ca²⁺]_i) 浓度。结果: Ipt 可浓度依赖性的拮抗H₂O₂ 介导的细胞毒性, 提高细胞生存率, 降低胞外Glu的释放以及胞内 Ca²⁺ 浓度。该保护作用可被200 μmol°L^-1 5-HD(线粒体K ATP 通道阻断剂) 部分拮抗。结论: Ipt 可拮抗 H₂O₂ 介导的细胞损伤作用, 该保护作用可能与线粒体ATP 敏感性钾通道相关。     

参芪扶正注射液干预低糖介导的免疫抑制微环境作用及其机制研究

目的：探讨参芪扶正注射液（Shenqi fuzheng injection, SFI）干预肿瘤免疫作用及初步分子机制研究。方法：采用B16-PKM2-OE建立低糖肿瘤微环境动物模型;采用ELISA试剂盒检测白细胞介素-2（IL-2）,干扰素-γ（IFN-γ）,CD40L和转化生长因子-β1（TGF-β1）的水平;采用Western blot法检测CD4+T细胞葡萄糖转运蛋白（Glut-1）和糖酵解关键酶（HK、PFK和PK）的表达。结果：试剂盒检测结果显示,SFI可以提高肿瘤组织中IL-2、IFN-γ、CD40L水平,降低TGF-β1的水平。Western blot法检测结果发现,SFI能够促进CD4+T细胞细胞膜表面Glut-1蛋白的表达,同时呈剂量依赖性上调糖酵解关键酶的表达。 结论：SFI能够升高肿瘤组织中的IL-2、IFN-γ和CD40L水平并降低TGF-β1水平,同时增加肿瘤组织里活化CD4+ T细胞的数量,促进CD4+T细胞的糖酵解,表明SFI能够改善肿瘤免疫微环境。     

异丙酚 、氯胺酮对大鼠突触体 Na+, K+-ATP 酶活性的影响*

目的 观察异丙酚、氯胺酮对大鼠不同脑区突触体 Na⁺, K⁺-AT P 酶活性的影响。方法 SD 大鼠, 随机分为三组, 每组 10 只, 分别 ip 生理盐水 10ml/kg(对照组), 异丙酚 100mg/kg 或氯胺 酮 100 mg/kg。用分光光度法测定大脑皮层 、海马和脑干突触体 Na⁺, K⁺-ATP 酶活性。结果 与对照组比较, 异丙酚明显抑制大脑皮层 、 海马和脑干突触体 Na⁺, K⁺-ATP 酶活性 (P<0.01), 氯胺酮明显降低大脑皮层和脑干突触体 Na⁺, K⁺-ATP 酶活性(P<0.01), 但对海 马突触体 Na⁺, K⁺-ATP 酶活性无明显影响(P<0.01)。结论 异丙酚、氯胺酮的全身麻醉作 用可能与其抑制脑突触体 Na⁺, K⁺-ATP 酶活性有关。     

醋柳黄酮对血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度的影响

目的:探讨醋柳总黄酮(TFH) 对血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度([Ca²⁺]_i) 的影响。方法:采用新一代钙荧光探针Fluo-3/AM 检测在高钾、去甲肾上腺素(NE)、血管紧张素II(Ang Ⅱ) 刺激下单层兔主动脉平滑肌细胞内游离钙水平的改变, 并与传统的钙拮抗剂Verapamil (Ver) 进行对照研究。结果:TFH(100 mg·L^-1) 对静息状态的血管平滑肌细胞[Ca²⁺]_i 无明显影响;TFH(60 ～ 100 mg·L^-1) 呈剂量依赖性抑制高K⁺ 去极化引起的[Ca²⁺]_i 升高, 与Ver 作用相似, 但弱于Ver;TFH(80、100 mg·L^-1) 对NE、Ang Ⅱ通过受体介导引起[Ca²⁺]_i 升高均具有明显的抑制作用;在无细胞外Ca²⁺存在下, TFH(80、100 mg·L^-1) 对NE 引起的[Ca²⁺]_i 升高也具有一定程度的抑制效应。结论:醋柳总黄酮通过对电压依赖性钙通道和受体操纵型钙通道双重抑制降低血管平滑肌细胞内游离钙水平, 这可能是醋柳黄酮产生舒血管降压作用机制之一。     

缺氧-复氧对心室肌细胞的损伤及川芎嗪的保护作用1

目的 观察缺氧-复氧对大鼠心室肌细胞的损伤及川芎嗪的保护作用 。方法 在缺氧-复氧条件下,测量对照组和不同浓度川芎嗪组对杆形心肌细胞百分比、心肌细胞内 K⁺/Na⁺浓度比及Ca²⁺浓度的影响。结果 缺氧-复氧对大鼠心室肌细胞有损伤作用,浓度为 4μmol·L^-1的川芎嗪对缺氧-复氧损伤细胞有保护作用,它能抑制损伤细胞挛缩,提高损伤细胞生存率,抑制心肌细胞内 K⁺/Na⁺浓度比的降低 、增加细胞内 Ca²⁺浓度,且剂量越大,保护作用越好,即川芎嗪对缺氧-复氧损伤细胞的保护呈剂量依赖性 。结论 川芎嗪对缺氧-复氧损伤的大鼠心肌细胞具有保护作用,它能显著地对抗缺氧-复氧对心室肌细胞的损伤作用 。     

Effect of Metal Cations on Corrosion Behavior and Surface Structure of Carbon Steel in Chloride Ion Atmosphere

In order to better understand why the corrosion behavior of carbon steel exposed in Nansha atmospheric environment is very serious, the effect of sodium, potassium and magnesium chlorides deposited on carbon steel surface has been studied under atmosphere conditions by wet/dry accelerated test. The difference of corrosion behavior and surface structure in Na⁺, K⁺, and Mg²⁺ containing atmosphere has been investigated by thickness loss, scanning electron microscope, X-ray diffraction and electrochemical techniques. The results indicate that the thickness loss of carbon steel exposed in different metal cations containing atmospheric environment increases in the order of Na⁺, K⁺, Mg²⁺. The hard metal cation can promote the dissolution of the steel to a certain extent. In Mg²⁺ containing atmosphere, the relative content of β-FeOOH is rather higher and the protective ability index α*/γ* decreases in the order of Na⁺, K⁺, Mg²⁺. The corrosion current density of both bare carbon steel and the rusted carbon steel increases in the order of Na⁺, K⁺, Mg²⁺. The polarization resistance and the charge transfer resistance decreases in the order of Na⁺, K⁺, Mg²⁺.     

果糖二磷酸钠镁对缺血突触体乳酸含量及ATP酶活性的影响

目的 研究果糖二磷酸钠镁(FDPM)对缺血突触体乳酸含量及ATP 酶活性的影响,以探讨其脑保护作用机制。方法 制备正常大鼠脑突触体,氧糖剥夺培养建立缺血突触体模型,分别加1.3 mmol·L^-1硫酸镁,4.0 mmol·L^-11,6-二磷酸果糖(FDP)及1.3mmol·L^-1 果糖二磷酸钠镁共培养60 min,测定突触体乳酸含量及Na⁺-K⁺ATP 酶和Ca²⁺-Mg²⁺ATP 酶活性。结果 FDPM 可明显降低缺血突触体乳酸含量,升高Na⁺-K⁺ATP 酶和Ca²⁺-Mg²⁺ATP 酶活性(P <0.05),其作用强于FDP 的作用。结论 FDPM保护脑缺血的作用机制可能与其改善脑缺血后能量代谢,减轻脑组织酸中毒状态有关。     

羟丁酸钠和氯胺酮对心肌细胞毒性作用的对比研究

目的 对比研究羟丁酸钠和氯胺酮对原代培养大鼠心肌细胞的毒性作用。方法 将经原代培养成活4d 后的大鼠心肌细胞分为5 组, 每组6 孔。包括对照组, 小剂量(HL, 3×10^-3mol·L^-1)与大剂量(HH, 3×10^-2 mol·L^-1)羟丁酸钠组和小剂量(KL, 1×10^-5 mol·L^-1)与大剂量(KH, 1×10^-4 mo l·L^-1)氯胺酮组。各组均于实验开始后8 h 终止反应, 评定心肌细胞搏动功能、观察细胞形态学改变、测定心肌细胞酶及电解质变化。结果 与对照组相比, KL 组心肌细胞搏动频率明显加快(P<0.05), 而KH 组减慢(P<0.05)。细胞形态学亦有相应变化。KH 组LDH 和AST 释放量增加(P<0.05), ALP 活性下降(P<0.05)。而HL、HH 组的上述指标均无明显变化。各组间电解质变化未见显著差异。结论 高浓度的氯胺酮具有直接的心肌抑制作用, 而低浓度的氯胺酮却有正性变时性和变力性作用。无论低浓度或高浓度的羟丁酸钠, 均未见心肌细胞毒性作用。     

罗红霉素对小鼠接触性皮炎及 T 细胞功能的影响

目的: 研究罗红霉素对接触性皮炎及 T 细胞功能的影响。方法: 使用 2, 4, 6-三硝基氯苯诱导小鼠接触性皮炎, 以双向混合淋巴细胞反应及刀豆蛋白诱导脾 T 细胞增殖, MTT 法检测活细胞数量。采用 RT-PCR 方法检测细胞因子 mRNA 表达。结果: 20mg°kg^-1 罗红霉素效应相灌胃给药明显抑制 2, 4,6-三硝基氯苯诱导的小鼠接触性皮炎(P<0.01)。25μg°ml^-1 罗红霉素显著降低双向混合淋巴细胞反应(P<0.05), 5、25μg°ml^-1 罗红霉素明显抑制刀豆蛋白诱导的脾细胞存活、增殖(P<0.05, P <0.01)及T-bet 、IL-2 及 IFN-γ的mRNA 表达。结论: 罗红霉素能抑制 2, 4, 6-三硝基氯苯诱导的接触性皮炎, 可能与其抑制T 淋巴细胞存活 、活化及增殖有关。     

汉防已甲素对大鼠急性缺血性肾衰的保护作用

目的 研究汉防已甲素对急性缺血性肾衰的保护作用。方法 术前3d开始每天1次及术前lh ig 汉防已甲素20mg/kg、40 mg/kg。然后制作大鼠肾脏缺血再灌注致急性缺血性肾衰模型, 测定肾 组织中MDA、SOD、Na⁺, K^*-ATP酶含量及切片观察肾脏形态。结果 缺血 60min再灌注20min后肾组织中MDA明显升高, SOD、Na⁺、K⁺-ATP酶和Ca²⁺-ATP峰均显 著降低。用药组MDA显著下降, SOD和ATP酶均明显升高。病理结果提示再灌注组肾小管上皮 明显变性, 而用药组损害明显减轻。结论 汉防已甲素对急性缺血性肾衰有一定的保护作用。     

川芎嗪对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的 观察川芎嗪对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机理。方法 采用大鼠冠脉结扎30 min后再通20 min 造成心肌缺血再灌模型。大鼠随机分对照组、缺血组、模型组(缺血再灌组)和川芎嗪保护组。观测心肌细胞膜和线粒体中过氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH·PX)、Ca²⁺-ATP酶和K⁺, Na⁺-ATP 酶活力, MDA及心肌钙含量。结果 川芎嗪保护组心肌细胞膜SOD、GSH·PX、Ca²⁺-ATP 酶和Na⁺, K⁺-ATP酶活性较缺血再灌组均有显著性升高(P＜0.05 或P ＜0.01), 丙二醛(MDA)和心肌钙含量却呈显著性降低。线粒体中SOD和GSH·PX 活力也呈显著性升高(P ＜0.05), MDA 却为显著性降低。结论 川芎嗪对大鼠缺血再灌注损伤心肌有确切保护作用, 其机理是通过提高对氧自由基的清除及抑制脂质过氧化。