自噬在米诺环素保护肾缺血再灌注损伤中的作用

目的: 研究米诺环素对肾缺血再灌注损伤后自噬的影响,探讨自噬在米诺环素保护肾缺血再灌注损伤中的作用。方法: 建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型,采用米诺环素及自噬抑制剂干预,观察大鼠肾脏指数、肾功能变化;HE染色评价肾组织病理学变化;Western blot法检测肾组织自噬相关蛋白LC3、Beclin 1、p62的表达。结果: 米诺环素可以显著改善肾缺血再灌注损伤后的肾脏损伤,而自噬抑制剂氯喹能部分逆转米诺环素的肾保护作用。Western blot结果显示,米诺环素可上调缺血再灌注损伤肾组织LC3并下调p62的表达水平,而氯喹能部分逆转米诺环素的自噬诱导作用。结论: 米诺环素对肾缺血再灌注损伤具有显著的保护作用,其机制可能是通过激活自噬实现的。     

自噬在米诺环素保护PC12细胞氧糖剥夺-复糖复氧中的作用

目的: 探讨自噬在米诺环素保护PC12细胞氧糖剥夺-复糖复氧中的作用。方法: 构建PC12细胞氧糖剥夺-复糖复氧模型,采用米诺环素(MC,1、10、100 μmol/L)或3-甲基腺嘌呤(3-MA,5 mmol/L)进行干预,MTT检测细胞活力,单丹磺酰戊二胺(MDC)染色观察自噬泡,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白轻链3(LC3Ⅱ)、泛素结合蛋白P62/SQSTM l的表达。结果: 氧糖剥夺处理后,1 μmol/L 和 10 μmol/L的MC能显著提高PC12细胞的存活率,而 100 μmol/L 则会加重细胞的损伤。蛋白LC3Ⅱ和Beclin1的表达与MC的浓度呈正相关性,自噬抑制剂3-MA能够降低LC3Ⅱ和Beclin1,增加P62/SQSTM l的表达逆转MC的保护作用。结论: 低剂量(1、10 μmol/L)MC能够通过增加LC3Ⅱ和Beclin1的表达,诱导PC12细胞产生自噬从而保护氧糖剥夺-复糖复氧处理后的PC12细胞。     

银杏内酯注射液抑制脑缺血再灌注模型大鼠内质网应激和自噬

【摘要】目的：探讨银杏内酯注射液（the Ginkgolides Injection, GIs）对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其可能机制。方法：采用Longa法制备大鼠短暂性大脑中动脉阻塞（tMCAO）/再灌注损伤模型,于缺血再灌注1h后腹腔注射（ip, bid）不同剂量的GIs（1.25、2.5、5mg/kg）,连续治疗3天并进行神经功能评分,干湿重法测定脑组织含水量,TTC染色法测定脑梗死体积;制备大鼠tMCAO模型,于再灌注1h给予GIs (2.5mg/kg),24h和72h 时取样,Western Blotting法检测缺血半影区内质网应激、自噬等相关蛋白表达。结果：GIs（2.5、5mg/kg）显著改善tMCAO模型大鼠神经运动功能障碍,减轻脑水肿,减小脑梗死体积;GIs显著抑制缺血再灌注损伤引起的大鼠缺血半影区内质网应激和自噬水平上升。结论：银杏内酯注射液通过降低内质网应激和自噬水平,减轻脑缺血再灌注损伤。     

胡黄连苷Ⅱ对MCF-7乳腺癌细胞自噬的影响及其作用机制研究

目的:探讨胡黄连苷Ⅱ对MCF-7乳腺癌细胞自噬及PI3K/AKT/mTOR通路的影响。方法:50只裸鼠随机分为5组,每组10只,分为模型组、3-MA组、胡黄连苷Ⅱ高剂量（100 mg/kg）、中剂量(10 mg/kg)、低剂量(1 mg/kg)组。体外培养人乳腺癌细胞MCF-7,随后移植于裸鼠体内,建立MCF-7乳腺癌皮下移植瘤模型。测量各组裸鼠体质量;测量乳腺肿瘤体积并计算出肿瘤抑制率;HE染色法观察肿瘤细胞形态;TUNEL法检测MCF-7细胞凋亡情况;Western blot检测Beclin1、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白的表达。结果:胡黄连苷Ⅱ能显著抑制乳腺癌裸鼠体质量的降低（P<0.01）;提高肿瘤抑制率（P<0.01）;改善病理组织结果;促进MCF-7细胞凋亡;增加Beclin1蛋白的表达;降低PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白的表达（P<0.01）。结论:胡黄连苷Ⅱ对MCF-7乳腺癌细胞具有显著抑制作用,其机制与抑制PI3K/AKT/mTOR通路从而增强MCF-7细胞自噬有关。     

滁菊总黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的: 探讨滁菊总黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法: 将48只SD大鼠随机分为6组,假手术组、模型组、滁菊总黄酮组（40、80和160 mg/kg）、尼莫地平组,每组8只,腹腔注射给药。采用线栓法阻塞大鼠右侧大脑中动脉,制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型,缺血2 h,再灌注24 h,进行神经行为评分、脑组织含水量测定、脑梗死体积测定、脑组织丙二醛（MDA）含量测定。结果: 40、80和160 mg/kg滁菊总黄酮可降低大鼠脑组织含水量、减小脑梗死体积、降低脑组织MDA含量（P<0.05或P<0.01）;160 mg/kg的滁菊总黄酮可以降低大鼠的神经行为评分（P<0.01）。结论:滁菊总黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,可能与其抗氧化活性有关。     

当归挥发油对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的: 探讨当归挥发油对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法: 采用改良线栓法阻断大鼠大脑中动脉建立脑缺血模型,到达再灌注时限后进行神经功能缺损评分;检测脑梗死体积比、脑含水量及脑血管通透性;血清NO、NOS含量;以及SOD和GSH-Px活性。结果: 当归挥发油可有效改善脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能缺损;降低脑梗死体积比、脑血管通透性和脑含水量;降低血清 NO、NOS含量; 增强SOD和GSH-Px活性。结论: 当归挥发油对脑缺血再灌注损伤有显著保护作用,其机制可能与提高脑组织抗氧化能力有关。     

银杏内酯注射液对大鼠急性期脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:研究银杏内酯注射液对大鼠急性期缺血再灌注脑损伤的保护作用。方法: 采用Longa法制备大鼠暂时性大脑中动脉阻塞（tMCAO）模型,于缺血1.5 h再灌后1 h给予银杏内酯注射液（0.625,1.25 和2.5 mg/kg,i.p., bid）及阳性药依达拉奉注射液（3.0 mg/kg,i.p.,bid）,再灌注72 h后通过TTC染色、神经功能评分及脑水肿测定观察银杏内酯注射液对再灌注损伤的保护作用,应用免疫组化观察药物对主要神经血管单元组分神经元、星形胶质细胞、小胶质细胞和血管形态和数量的改变。结果: 银杏内酯注射液（2.5 mg/kg, i.p., bid）显著改善tMCAO模型大鼠急性期神经功能障碍、减少脑梗死体积、降低脑水肿程度,并且能调节神经血管单元组分,表现为减轻缺血再灌后大鼠半影区皮层神经元的丢失,抑制星形胶质细胞和小胶质细胞的增殖活化,降低血管外基质胶原蛋白Ⅳ（Collagen IV）的降解。结论:银杏内酯注射液对tMCAO模型大鼠急性期脑缺血再灌注损伤具有神经保护作用。     

自噬促进大鼠肠缺血再灌注损伤的细胞铁死亡

目的：探讨自噬对肠缺血再灌注损伤中细胞铁死亡的影响。方法：采用随机数字表法将24只SPF级Wistar大鼠（体质量200～220 g）分为4组（n=6）：伪手术组（sham组）、缺血组（I组）、缺血再灌注组（I/R组）、缺血再灌注+自噬抑制剂组（I/R+3-MA组）。夹闭肠系膜上动脉1 h构建缺血模型,再灌注2 h建立大鼠肠缺血再灌注损伤模型;采用HE染色光镜下观察肠黏膜病理改变并行Chiu评分;比色法检测Fe2+含量;ELISA法检测乳酸脱氢酶（LDH）、过氧化脂质（LPO）含量;Western Blot检测铁蛋白重肽（ferritin heavy polypeptide, FTH）1、核受体共激活子（nuclear receptor coactivator, NCOA）4、LC3-II/I表达,透射电镜检测线粒体形态。结果：与sham组比较,其余3组小肠组织Chiu评分均增高（P<0.01）,LC3II/I表达上调,FTH1、NCOA4表达下调（P<0.01）,I组、I/R组LDH、Fe2+含量升高（P<0.01）,I/R+3-MA组LDH（P<0.05）、Fe2+含量升高（P<0.01）,I/R组LPO含量升高（P<0.01）;与I组比较,I/R组Chiu评分增高（P<0.01)、LDH、Fe2+（P<0.05）、LPO（P<0.01）含量升高,FTH1、NCOA4表达下调、LC3II/I表达上调（P<0.01）;与I/R组比较,I/R+3-MA组Chiu评分下降,LDH、LPO（P<0.01）、Fe2+（P<0.05）含量下降,FTH1、NCOA4表达上调,LC3II/I表达下调（P<0.01）。线粒体形态学变化：sham组可见肠组织结构完整,线粒体数量较多结构完整;I组线粒体嵴数量减少,双层膜结构不完整;I/R组线粒体嵴大量减少,细胞器损伤严重。3-MA抑制后线粒体数量和内嵴有所增多,膜逐渐恢复完整。 结论：肠I/R损伤中,自噬参与细胞铁离子的调控,促进细胞铁死亡的发生,抑制自噬可以减轻I/R肠损伤。     

PI3K/Akt/FOXO3a信号通路介导的保护性自噬参与肺腺癌获得性顺铂耐药表型重塑

目的：比较顺铂压力下人肺腺癌亲本A549细胞与获得性顺铂耐药表型的A549/DDP细胞自噬水平,探寻肿瘤细胞获得性耐药表型重塑的分子机制。方法：不同浓度顺铂（cisplatin, DDP）干预亲本A549细胞及获得性顺铂耐药表型的A549/DDP细胞,应用CCK-8法比较两株细胞耐药指数、免疫印迹法比较自噬相关蛋白（Beclin 1、LC3Ⅱ及p62）表达水平;应用10 μmol/L顺铂（相当于亲本A549细胞半数抑制浓度,即A549 IC50值）干预A549及A549/DDP细胞,构建细胞应激状态,CCK-8法比较两株细胞生存活力,免疫印迹法比较自噬相关蛋白（Beclin 1、LC3Ⅱ及p62）、凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3）、转录因子FOXO3a及其磷酸化蛋白（p-FOXO3a）表达水平,免疫荧光法观察FOXO3a亚细胞定位,并利用自噬晚期抑制剂巴弗洛霉素A1（Baf A1）干预A549及A549/DDP细胞,进一步验证顺铂压力下细胞自噬激活情况;利用蛋白激酶抑制剂干预PI3K/Akt信号通路,免疫印迹法检测顺铂压力下A549及A549/DDP细胞Akt、p-Akt及自噬相关蛋白表达水平,以探寻肿瘤细胞获得性耐药表型重塑的分子机制。结果：与亲本A549细胞相比,获得性顺铂耐药表型的A549/DDP细胞具有更强的顺铂耐药性及较高的基础自噬水平。在10 μmol/L顺铂压力下,A549/DDP细胞存活率明显高于A549细胞;A549细胞中,顺铂通过抑制PI3K/Akt/FOXO3a信号通路,上调转录因子FOXO3a表达水平,下调Bcl-2表达、促进Bax及Cleaved Caspase-3活性片段表达增加,诱导细胞凋亡;A549/DDP细胞中,相同浓度的顺铂通过抑制PI3K/Akt/FOXO3a信号通路,抑制FOXO3a磷酸化,上调Beclin 1及LC3Ⅱ表达、下调p62表达,促进细胞保护性自噬,使耐药细胞获得生存活性。 结论：顺铂诱导亲本A549细胞凋亡可能与抑制PI3K/Akt/FOXO3a信号通路,上调转录因子FOXO3a表达有关;A549/DDP细胞顺铂耐药表型的获得可能与顺铂抑制PI3K/Akt/FOXO3a信号通路,抑制FOXO3a磷酸化,上调细胞保护性自噬相关。     

游泳运动通过促进自噬改善糖尿病小鼠肾功能的研究

目的：研究游泳运动对糖尿病小鼠肾脏的保护作用及机制。方法：正常小鼠随机分成正常对照组、正常游泳组、2型糖尿病（T2DM）小鼠模型组、糖尿病游泳组和二甲双胍组。用链脲佐菌素（STZ）法建立T2DM小鼠模型。正常游泳组和糖尿病游泳组小鼠给予游泳运动（每天1 h）,二甲双胍组小鼠给予二甲双胍（200 mg/kg）每天一次灌胃,持续7周。测定小鼠空腹血糖、血清胰岛素值,计算胰岛素抵抗指数值。测定血清尿酸、尿素及肌酐的含量。计算肾质量/体质量比值,观察肾组织病理结构变化,Western blot法检测肾组织自噬相关蛋白LC3和p62的相对表达。结果：与正常对照组比,模型组胰岛素抵抗指数、肾质量/体质量比值显著升高;血清尿酸、尿素及肌酐含量升高,肾小球病理变化明显;LC3II/LC3I比值显著降低;p62的表达显著增加。与模型组比,糖尿病游泳组胰岛素抵抗指数、肾质量/体质量比值显著降低;血清尿酸、尿素及肌酐含量降低,肾小球病理改变也减轻;LC3II/LC3I比值显著升高;p62的表达显著下降（均P<0.05）。 结论：游泳运动保护T2DM小鼠的肾脏损伤,其机制可能与促进肾组织细胞自噬过程有关。     

抗血小板溶栓素对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用机制研究

目的: 探讨抗血小板溶栓素（anti-platelet thrombolysin,APT）对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的机制。方法: 采用TLR4-siRNA在体转染技术,下调大鼠脑组织中Toll样受体4（TLR4）蛋白表达。分别取野生型和TLR4下调的SD大鼠,随机分为假手术组,模型组,TLR4阻断剂（TAK-242 2 mg/kg）组,APT高、中、低组（0.02、0.01、0.005 mg/kg）,每组8只。线拴法建立大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤模型,G-LISA法测定大鼠脑组织中RhoA蛋白活性,Western blot 法测定脑组织中TLR4、RhoA相关卷曲螺旋形成蛋白激酶（ROCK1/2）、磷酸化的c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）蛋白表达。结果: 与对照组比较,TLR4-siRNA在体转染大鼠脑组织中TLR4蛋白表达明显下降;在野生型大鼠中,与模型组比较,抗血小板溶栓素可明显降低脑组织中TLR4 蛋白表达,抑制RhoA活性,减少ROCK1/2、p-JNK蛋白表达;在TLR4下调大鼠中,与模型组比较,APT对脑组织中RhoA活性,ROCK1/2、p-JNK蛋白表达无明显影响。结论: 抗血小板溶栓素对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用机制主要与其抑制TLR4/RhoA/ROCK信号通路有关。     

漆黄素对脑缺血再灌注诱导学习记忆损伤及HPA轴的影响

目的: 研究漆黄素对脑缺血再灌注大鼠空间学习记忆能力的影响及其可能机制。方法: 成年雄性SD大鼠随机分为假手术组（Sham）、脑缺血再灌注组（IR）、漆黄素组（10,20和40 mg/kg,p.o.）,每组8只。采用四血管阻断法（4VO）建立脑缺血再灌注模型,观察大鼠水迷宫学习记忆能力的改变,通过测定血清皮质酮含量的改变,观察漆黄素的作用。同时采用RT-PCR法研究药物对脑缺血再灌注状态下促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）、糖皮质激素受体（GR）表达的影响。结果: IR组大鼠在水迷宫实验中表现出学习记忆能力明显下降（P<0.01）,漆黄素（20和40 mg/kg）能明显改善上述现象（P<0.05或P<0.01）;与IR组相比,漆黄素（20和40 mg/kg）能降低血清皮质酮含量（P<0.05）,同时漆黄素（40 mg/kg）能逆转缺血再灌注大鼠海马区CRH mRNA表达的增加（P<0.05）,同时上调GR mRNA水平（P<0.05）。结论: 漆黄素可逆转脑缺血再灌注对大鼠空间学习记忆损伤,这一作用机制可能与下丘脑-垂体-肾上腺轴（HPA）功能的改变有关。     

外源性血管内皮衍生超极化因子对脑缺血再灌注损伤的影响

目的: 硫化氢(hydrogen sulfide, H₂S)为一种假定的血管内皮衍生超极化因子(endothelium- derived hyperpolarizing factor, EDHF),本研究探讨外源性H₂S,即外源性假定的EDHF对脑缺血再灌注损伤的影响。方法: 采用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血(MCAO)再灌注损伤模型,测定动物行为功能、脑组织梗死体积、脑组织含水量、血清乳酸脱氢酶(LDH)活性及丙二醛(MDA)含量,用HE染色法观察脑组织学改变。结果: H₂S供体硫氢化钠(NaHS, i.v.) 0.195、0.390、0.780 mg/kg 能明显改善神经功能状态,降低缺血再灌注后脑梗死体积百分比,降低脑含水量,显著地抑制局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠血清MDA含量和LDH活性,并不同程度地改善大鼠脑病理组织学的变化。结论: NaHS可明显改善大鼠脑缺血再灌注性损伤,提示外源性EDHF (H₂S)有抗脑缺血再灌损伤作用。     

抗血小板溶栓素对局灶性脑缺血/再灌注大鼠脑损伤的作用观察

目的: 观察抗血小板溶栓素(anti-platelet thrombolysin,APT)对缺血性脑损伤的保护作用并初步探讨其作用机制。方法: SD大鼠,随机分为假手术组(Sham)、模型组(缺血再灌注组)、阳性组(依达拉奉注射液)、APT高、中、低组。双侧颈动脉结扎,建立脑缺血模型,测定大鼠脑含水量,HE染色观察脑组织病理改变;线栓法建立大鼠脑缺血/再灌注模型,进行行为学评分,酶联免疫法(ELISA)及免疫组化测定脑组织中Toll样受体4(TLR4)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、Bax蛋白含量。结果: 与模型组比较,APT高、中剂量组可明显改善缺血再灌注后大鼠神经功能障碍症状,降低脑水肿程度,改善缺血后脑组织的病理改变,明显降低缺血后脑组织中TLR4、JNK、Bax蛋白表达。结论: APT对缺血性脑损伤有较好的保护作用,其机制可能与抑制脑组织中TLR4/JNK/Bax信号通路表达,从而抑制细胞凋亡有关。     

脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡与褪黑素的影响

目的:观察局灶性脑缺血再灌注损伤(CIRI)后神经细胞凋亡与褪黑素(MT)的影响,探讨相关机制。方法:线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞2h/再灌注24h模型,再灌注0、1、2、6hi.p.MT。TTC染色观察脑梗死体积;TUNEL法检测神经细胞凋亡;免疫组化法检测脑组织Bcl-2和Bax蛋白表达;无机磷酸法测定脑组织钙调神经磷酸酶(CaN)活性;毛细管区带电泳(CZE)法测定脑组织ATP含量。结果:MT10、20mg/kg均可显著缩小脑梗死体积;MT20mg/kg可显著降低脑组织缺血半暗带区(IP)神经细胞凋亡、增高Bcl-2/Bax比值,显著抑制损伤侧脑组织CaN活性,升高脑组织ATP含量。结论:MT抑制CIRI后脑组织神经细胞凋亡,使脑梗死体积减小,其机制与上调Bcl-2/Bax比值、抑制CaN活性升高、增加ATP保有量均有关。     

姜黄素对脑缺血再灌注损伤的保护作用机制研究进展

缺血性卒中是全球死亡和致残的主要原因，恢复脑组织的血流量（再灌注）是目前最有效的治疗方法。然而，再灌注后，脑组织中过量活性氧的产生，炎症细胞异常募集，炎症因子过量释放，细胞自噬，线粒体功能障碍，钙稳态失调，内质网应激，谷氨酸兴奋性毒性，细胞凋亡及血脑屏障破坏等病理机制会进一步加重细胞损伤和死亡，最终影响神经功能恢复。大量的研究表明姜黄素可通过抑制脑缺血再灌注损伤的多种病理机制而发挥显著神经保护作用，最终改善脑循环，减少梗死体积，减少脑水肿，促进血脑屏障修复，改善神经功能。因此，姜黄素可通过减轻脑缺血再灌注损伤而改善神经功能，具有补充现有缺血性卒中治疗方法的潜力。