苦参素对实验性肝癌PCNA、cyclinD1、CDK4 表达的影响

目的: 研究苦参素对2-乙酰氨基芴(2-AAF)诱发大鼠实验性肝癌的防治作用, 并探讨其抑制肝癌细胞增殖的机制。方法: 以2-AAF 喂饲SD 大鼠制备肝癌模型。给予不同剂量的苦参素腹腔注射,观察肿瘤生成状况;免疫组化方法检测增殖细胞核抗原(PCNA) 蛋白的表达;RT-PCR 检测细胞周期素D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4) mRNA的表达。结果: 苦参素各防治组大鼠肝表面癌结节数明显低于模型组, 预防组肝表面结节数最少。苦参素各预防治疗组PCNA 和cyclinD1、CDK4 的表达显著低于模型组(P <0.01) 。结论: 苦参素有预防或延缓2-AAF 诱发大鼠肝癌发生的作用, 其机制可能通过抑制cyclin D1、CDK4 mRNA 和PCNA 蛋白的表达, 从而诱导细胞周期阻滞, 抑制肝癌细胞过度增殖。     

吉祥草中甾体皂苷RCE-4对人宫颈癌Caski细胞Ras/Erk和p16/cyclinD1/CDK4通路的影响

目的: 研究吉祥草中甾体皂苷RCE-4影响Ras/Erk和p16/cyclinD1/CDK4信号通路促进Caski细胞凋亡的作用机制。方法: 体外培养人宫颈癌Caski细胞株，用RCE-4作为处理因素，MTT法检测细胞增殖活力；流式细胞术检测细胞周期分布；Real-time PCR检测p16、cyclinD1和CDK4 mRNA表达水平；Western blot检测Ras/Erk信号通路总蛋白和磷酸化蛋白表达水平。 结果: RCE-4呈剂量依赖性抑制Caski细胞增殖，其作用24 h的IC50值为12.33 μmol/L；升高G0/G1期细胞比例，降低S期细胞比例；抑制Ras、p-Raf、p-Mek1/2和p-Erk1/2蛋白表达，降低p-Raf/Raf、p-Mek1/2/Mek1/2和p-Erk1/2/Erk1/2比值，上调p16的mRNA表达，下调cyclinD1和CDK4的mRNA表达。 结论: RCE-4可抑制Caski细胞的增殖，诱导细胞在G0/G1期阻滞，其诱导作用与其抑制Ras/Erk和p16/cyclinD1/CDK4信号通路激活有关。     

CDK1参与肝细胞癌的发展机制及其抑制剂应用价值

细胞周期蛋白依赖性激酶1（cyclin-dependent protein kinase 1, CDK1）是一种高度保守的丝氨酸/苏氨酸激酶,在有丝分裂中发挥检查点作用,协调和推动细胞周期进程。肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）中CDK1显著上调,主要与p53信号转导途径、LINC00346-miR-199a-3p-CDK1/CyclinB途径、SNHG16/let-7b-5p/CDC25B/CDK1途径和Upf1-SNORD52-CDK1途径等信号通路相关。本文系统阐述CDK1参与肝癌发生发展的作用机制,阐明CDK1抑制剂靶向治疗HCC现况,可为以CDK1为靶点的HCC治疗提供线索与依据。     

萝卜硫素介导Akt/p70S6K信号传导诱导人鼻咽癌CNE-2细胞凋亡

目的:研究萝卜硫素对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖、凋亡的影响及其对Akt/p70S6K信号传导的作用。方法:采用CCK-8实验分析萝卜硫素对CNE-2细胞生长增殖的影响，流式细胞仪检测萝卜硫素对CNE-2细胞凋亡率及细胞周期分布的影响，Western blot技术检测CNE-2细胞中调控细胞周期的相关蛋白及Akt/p70S6K信号通路关键蛋白的表达水平。结果:采用萝卜硫素干预CNE-2细胞后，细胞增殖抑制率及凋亡率相对于对照组呈浓度依赖的方式显著增高，差异有统计学意义（P<0.05）；流式细胞仪分析提示，萝卜硫素干预能够将细胞停留在S期及G2/M期，并且萝卜硫素还能抑制细胞周期蛋白Cyclin A、Cyclin B、Cyclin D、Cyclin E以及CDK/p34的表达水平，与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）；此外，萝卜硫素还能抑制Akt/p70S6K信号通路关键蛋白p-Akt及p70S6K蛋白表达水平（P<0.05），但萝卜硫素与Akt激动剂IGF-I共同处理细胞后，上述蛋白表达量与对照组相比没有统计学差异（P>0.05）。结论:萝卜硫素可能通过干扰CNE-2细胞中Akt/p70S6K信号传导而发挥有效的抗增殖及促凋亡的作用。     

枸杞多糖调控Shh信号影响骨肉瘤HOS细胞增殖和凋亡

目的:研究枸杞多糖(LBP)调控Sonic Hedgehog(Shh)信号通路对骨肉瘤HOS细胞增殖和凋亡的影响和机制。方法:骨肉瘤HOS细胞分成Control(空白对照)、LBP-I(110 μg/mL枸杞多糖)、LBP-II(220 μg/mL枸杞多糖)、LBP-III(440 μg/mL枸杞多糖)共4组,MTT测定细胞增殖,PI单染法检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染法测定凋亡,Western blot测定Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP、细胞周期依赖性蛋白激酶4(CDK4)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Shh、Gli1蛋白表达。Shh信号激活剂和枸杞多糖共同处理骨肉瘤HOS细胞,利用上述方法测定细胞增殖、周期和凋亡变化。结果:与Control组比较,LBP-I、LBP-II、LBP-III组细胞增殖能力依次降低,细胞G0/G1期细胞比例依次升高[(51.2±4.1)% vs. (59.1±3.2)%,(66.8±2.0)%,(72.3±3.2)%,F=72.76,P<0.001],细胞凋亡水平依次升高[(3.9±0.3)% vs. (13.2±1.2)%,(17.6±1.3)%,(24.8±2.1)%,F=364.50,P<0.001],细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP蛋白表达水平依次升高,CDK4、cyclin D1、Shh、Gli1蛋白表达水平依次降低(P<0.05)。与未经Shh信号激活剂处理的细胞比较,经过Shh信号激活剂处理的细胞可以逆转枸杞多糖对骨肉瘤HOS细胞增殖抑制、周期阻滞和凋亡促进作用。结论:枸杞多糖通过抑制Shh信号通路阻滞骨肉瘤HOS细胞周期、抑制细胞增殖并促进细胞凋亡。     

丁酸钠诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的信号通路及对AQP3基因表达影响的研究

目的:探讨丁酸钠诱导结肠癌HT-29细胞凋亡过程的分子机理及其对水通道蛋白AQP3基因表达的影响。方法:MTT 法检测不同浓度的丁酸钠对结肠癌HT-29细胞生长的影响;RT-PCR 检测不同浓度的丁酸钠对细胞周期蛋白Cyclin D1、CDK4、p16和AQP3的基因表达水平, 同时使用流式细胞仪检测细胞周期。结果:加入浓度超过2.5 mmol/L 的丁酸钠后, 结肠癌HT-29细胞生长受到抑制,Cyclin D1、CDK4和AQP3的表达水平下降, p16的表达水平上调, 细胞阻滞于G₁/S 期。结论:浓度超过2.5 mmol/L 的丁酸钠可以诱导结肠癌HT-29细胞凋亡, 使其细胞周期阻滞于G₁/S期, 且这种诱导作用是剂量依赖型的, 其分子通路可能是通过p16-Cyclin D1/CDK4这条信号途径,在此过程中, 伴随着AQP3的基因表达水平降低。     

NF-κB介导的连翘酯苷B对宫颈癌细胞增殖活性的抑制作用

目的:研究连翘酯苷B是否通过抑制NF-κB调控p21/Cyclin E/CDK2信号通路，对宫颈癌细胞（HeLa）增殖产生影响。方法:在培养的HeLa细胞，不同浓度（1，2，4 μmol/L）连翘酯苷B处理24、48、72 h后采用MTT实验观察细胞活力变化。观察不同浓度的连翘酯苷B对肿瘤细胞克隆形成的影响。连翘酯苷B处理细胞后，观察转录因子NF-κB（p-p65、p65）蛋白调控变化，并检测蛋白p21、以及细胞周期蛋白Cyclin E、CDK2的表达变化。结果:连翘酯苷B浓度依赖性抑制肿瘤细胞克隆形成，且对HeLa细胞增殖效应的抑制呈时间及浓度依赖性。连翘酯苷B浓度依赖性上调p21蛋白水平，并且下调p-p65、Cyclin E与CDK2水平。 结论:连翘酯苷B通过抑制转录因子NF-κB，影响p21/Cyclin E/ CDK2信号通路抑制了HeLa细胞增殖。     

ERK1/2和p38MAPK在介导CGRP和Ang II诱导血管平滑肌细胞Nox1表达中的作用

目的:探讨胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2) 和p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)在降钙素基因相关肽（CGRP）和血管紧张素II(Ang II) 诱导血管平滑肌细胞NADPH氧化酶-1（Nox1）表达中的作用。方法: 体外培养鼠源性A10血管平滑肌细胞株（A10VSMC）,用Ang II或/和CGRP作为处理因素,MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞周期分布;Western blot检测ERK1/2和p38MAPK总蛋白和磷酸化蛋白以及Nox1蛋白的表达水平。结果: 与对照组和CGRP组相比,Ang II在诱导A10VSMC活力和增殖的同时,亦能增加磷酸化ERK1/2和p38MAPK信号激酶和Nox1的表达。CGRP预孵育细胞30 min 却能显著抑制Ang II诱导的细胞增殖活力、Nox1蛋白、磷酸化ERK1/2和p38MAPK的表达;二苯基碘（DPI）能抑制Ang II诱导的细胞增殖、磷酸化p38MAPK及Nox1表达,但不能抑制Ang II诱导的ERK1/2磷酸化。p38MAPK阻断剂SB203580不但能抵消Ang II诱导的Nox1表达作用,而且能协同CGRP抑制Ang II诱导的Nox1表达。而ERK1/2阻断剂PD98059对CGRP和/或Ang II诱导Nox1表达作用的影响无统计学意义。结论:Ang II诱导A10VSMC增殖与激活Nox1有关,CGRP抑制Ang II诱导的Nox1表达,可能主要通过抑制p38MAPK信号途径发挥作用,而与ERK1/2信号途径无显著关系。     

黄芪和当归配伍对大鼠血管内膜增生血管平滑肌细胞增殖的影响

目的: 探讨黄芪和当归不同配伍对大鼠血管内皮损伤后血管内膜增生中血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化、细胞周期和磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号途径的影响。方法: 雄性大鼠制备腹主动脉球囊导管损伤血管内皮模型，设计黄芪和当归单用及不同比例配伍，对内皮损伤模型大鼠灌胃给药，干预14 d后取腹主动脉，检测腹主动脉增生内膜中VSMC表型转化、细胞周期相关蛋白表达和PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达。结果: 球囊导管损伤主动脉内皮后，可引起VSMC表型转化及VSMC增殖从而导致血管内膜增生。当归、黄芪、黄芪-当归1∶1配伍、黄芪-当归5∶1配伍可增强血管增生内膜中平滑肌α肌动蛋白（SM α-actin)表达，抑制增生内膜中增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达。当归、黄芪、黄芪-当归1∶1配伍、黄芪-当归5∶1配伍可抑制血管组织中cyclin D1、cyclin E表达的增高，抑制增生内膜中p-PI3K和p-Akt蛋白表达的升高。结论: 黄芪当归配伍对血管内皮受损后内膜增生具有抑制作用，其作用可能与其通过抑制血管内皮受损后PI3K/Akt信号通路激活，进而抑制VSMC表型转化和细胞增殖，从而发挥抗VSMC增殖的作用有关。     

人参皂苷Rg1 抗衰老作用可能与改变p16 、cyclin D 、CDK4 的表达有关

目的: 探讨人参皂苷Rg1 对抗三丁基过氧化氢(t-BHP) 诱导的WI-38 细胞衰老作用及其可能细胞周期调控机制。方法: 将WI-38 细胞随机分为4组, 用不同剂量Rg1 预处理。从30 代开始, 隔代用t-BHP 作用, 每次1 h, 共4 次, 诱导细胞衰老。从光镜、透射电镜观察细胞形态及超微结构;流式细胞术分析G₁期细胞比例;以及SA-β-半乳糖苷酶的细胞化学染色, 确定Rg1 的抗衰老作用。并采用免疫印迹技术对CDK4 、cyclin D1 和p16 等表达情况进行检测。结果: Rg1 预处理组与单纯t-BHP 处理组相比,细胞形态体积小、胞体不如后者扁平, 次级溶酶体减少,G₁ 期细胞比例下降, SA-β-半乳糖苷酶染色阳性细胞百分比下降, 说明Rg1 在t-BHP 诱导细胞衰老模型中有抗衰老作用。进一步发现用Rg1 预处理后, p16 、cyclin D1 表达水平降低、CDK4 表达水平增加。结论: 提示Rg1 可能通过改变细胞周期调控因子的表达而发挥其抗t-BHP 诱导的WI-38 细胞衰老作用。     

3, 4,5, 6-四羟基 口山 酮对大鼠离体心肌缺血-再灌注损伤的保护作用

目的: 研究合成的 口山 酮化合物 3, 4, 5, 6-四羟基 口山 酮对离体大鼠心肌缺血-再灌注损伤的保护作用及其机制。方法: 离体大鼠心脏采用 Langendorff法灌流, 停灌 30 min 再灌 30 min 造成心肌缺血-再灌注损伤模型。左心室插入水囊导管, 记录左室内压(LVP)、左室内压最大上升速率(+dp/dt_max) 和心率(HR), 定时收集冠脉流出液, 测定冠脉流量(CF)和肌酸激酶(CK) 活性。心脏灌流结束后心脏称重,计算单位心脏湿重的 CK 释放量。心肌组织制备匀浆, 用放射免疫法测定心肌组织 TNF-α含量。结果: 预先 给予 3, 4, 5, 6-四 羟基 口山 酮(30、100 或 300Μmol°L^-1) 可显著改善缺血-再灌注所致的心功能损伤, 减少CK 的释放和心肌组织 TNF-α的产生。结论: 3, 4, 5, 6-四羟基 口山 酮对心肌缺血-再灌注损伤具有保护作用, 其作用机制可能与抑制 TNF-α的产生有关。     

Characteristics and cyto-compatibility of Collagen/Ca-P coatings on Ti6Al4V substrate

The surface modification method for a substrate affects its cyto-compatibility. Collagen coating has been considered as an effective way to vary the biological interactions occurring on the Ti6Al4V substrate. However, a uniform collagen coating is difficult to be prepared by direct collagen coating method. In this study, a simple and efficient method was developed to coat a homogenous collagen top layer on a Ti6Al4V sample that was precoated with a biomimetic Ca-P intermediate layer. Scanning electron microscopy (SEM) observations show that a non-uniform collagen coating formed on the surface of a pristine Ti6Al4V substrate, whereas a continuous and homogenous collagen coating formed on a Ti6Al4V surface pre-coated with Ca-P. Human osteosarcoma cells (HOS) were cultured and their cell morphology examined using SEM after 3 and 24 h. After seeding the cultured cell onto the substrates, cell proliferation was measured using the AlamarBlue assay at 1, 5, and 10 days. It was found that cells seeded onto collagen and Collagen/Ca-P coated substrates yielded well-developed filopodia and lamellipodia. However, the cell proliferation of Collagen/Ca-P was significantly higher than those of the other specimen for 5- and 10-day culture specimen. These results suggest that the proposed method can be used to deposit a uniform collagen coating on specimens for biomedical applications.     

可控多孔结构生物活性钛的制备及其体外细胞培养

采用电子束熔化（EBM）成形工艺,制造具有可控多孔结构的Ti6Al4V植入体,分析测试其微观孔隙结构特征、孔隙率以及力学性能。扫描电镜观测结果表明,所制备的钛合金植入体孔隙结构特征与设计结构相符合,证明EBM技术能够实现钛合金植入体孔隙结构的控制;测得多孔植入体的孔隙率为60.1%,相应的抗压强度为163 MPa,弹性模量为14 GPa,与人体骨组织弹性模量相近。利用改进的碱热处理方法进行表面改性,并浸泡在模拟体液中以诱导磷灰石的形成。体外细胞培养试验结果表明,培养7 d后成骨细胞在改性的试件表面大量粘附、生长、增殖     

SiC/Ti6Al4V复合材料界面反应产物的形成序列及扩散路径

通过SiC/Ti6Al4V钛基复合材料的制备及在不同条件下的热处理试验，利用SEM，EDS及XRD分析技术研究复合材料界面反应产物相的形成及反应元素的扩散路径。结果表明：反应元素如C，Ti，Si在界面反应层中出现浓度波动，合金元素Al并没有显著扩散进入界面反应产物层，而是在界面反应前沿堆积，其界面反应产物被确认为Ti3SiC2，TiCx，Ti5Si3C，和Ti3Si；在界面反应初期，存在着TiC＋Ti5Si3Cx双相区，当形成各界面反应产物单相区时，SiC／Ti6Al4V复合材料界面反应扩散的完整路径应为：SiC ｜ Ti3SiC2 ｜ Ti5Si3Cx ｜ TiCx ｜ Ti3Si｜ Ti6Al4V＋TiCx；界面反应产物层的生长受扩散控制，遵循抛物线生长规律，其生长激活能Q^k及k0分别为290.935 kJ·mol^-1,2.49× 10^-2 m·s^-1/2.     

Cu/Mo双涂层改性SiCf/Ti6Al4V复合材料的界面与性能

采用箔-纤维-箔(FFF)法分别制备无涂层、C涂层和Cu/Mo双涂层改性的SiCf/Ti6Al4V复合材料,对制备态复合材料的力学性能和界面微观组织进行对比分析,进一步研究不同真空热暴露处理对Cu/Mo双涂层改性复合材料的界面微区的影响规律。结果表明,制备态下Cu/Mo涂层比C涂层较好地改善了复合材料的界面组织和性能,且对基体和纤维中元素扩散均具有一定的阻挡作用;求得900℃下SiCf/Cu/Mo/Ti6Al4V界面反应的生长动力学公式为H=1.380t1/2+5.397。